“决明山楂燕麦胶囊”的毒理学试验

尉杰忠，丰 玲，白建平，张海飞，杨立志，马存根

（山西大同大学脑科学研究所，山西大同 037009）

“决明山楂燕麦胶囊”的毒理学试验

尉杰忠，丰 玲，白建平，张海飞，杨立志，马存根*

（山西大同大学脑科学研究所，山西大同 037009）

目的 观察决明山楂燕麦胶囊的急性及长期毒性反应，以确保用药安全性。方法 急性毒性反应以10g/kg（小鼠最大耐受量）的决明山楂燕麦给小鼠一次性灌胃，连续观察14d，逐日记录毒性反应、死亡数，并作病理学检查。长期毒性反应以低剂量组1.6g/kg、高剂量组2g/kg给大鼠连续灌服8周，对大鼠进行一般状况、血液学指标、血液生化指标、主要脏器指数和组织病理学观察和检查。结果 急性毒性实验未见小鼠出现毒性反应及死亡。长期毒性结果显示，低、高剂量组大鼠的一般状况、体质量、血液学指标、血液生化学指标及主要脏器系数与对照组比较无显著性差异；肉眼观察服药组心、肝、脾、肺、肾外观形态、颜色均无异常改变，光镜检查也未见各脏器组织结构和细胞形态异常。结论 决明山楂燕麦对实验动物安全无毒，这可为临床应用提供有用信息。

决明山楂燕麦；脂肪肝；急性毒性试验；长期毒性试验

大量报道证实决明子、山楂、荷叶有降脂、保肝、减肥等功效［1-5］。近来，我们把决明子、山楂、荷叶的提取物添加到燕麦粉中合用于动物高脂模型，发现此组方具有显著的降脂、保肝作用。为了确保临床用药安全，本试验拟进行决明山楂燕麦胶囊的毒理学研究。

1 试验材料

1.1 试验动物

CD-1（ICR）小鼠30只，体质量20±2g，雌雄各半；SD大鼠24只，体质量180±10g，雌雄各半。均购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编号：SCXK（京）2006-0009。该研究经山西大同大学生物和医学研究伦理审查委员会批准。

1.2 试验药物及试剂

决明山楂燕麦颗粒：由大同长兴制药有限责任公司提供，批号：1002101，0.45g/粒。天门冬氨酸转氨酶（AST）试剂盒、丙氨酸转氨酶（ALT）试剂盒、白蛋白（ALB）试剂盒、总蛋白（TP）试剂盒、尿素氮（BUN）试剂盒、肌酐（Cr）试剂盒、总胆固醇（TC）试剂盒、血糖（GLU）试剂盒，购自南京建成生物医学研究所。

1.3 试验饲料

小鼠、大鼠用基础饲料，购自北京科澳协力饲料有限公司，许可证编号：SCXK（京）2009-0012。

1.4 试验仪器

LDZ-5低温高速离心机（北京医用离心机厂），DR-HW-1恒温水浴（北京西城区医疗器械厂），UV-7504PC分光光度计（上海新茂仪器有限公司），XSZ-G显微镜（重庆光学仪器厂）；YD-6D智能型生物组织包埋机（浙江省金华市益迪医疗设备厂），YD-1508R轮转式切片机（浙江省金华市益迪医疗设备厂），YD-AB型生物组织摊片机（浙江省金华市益迪医疗设备厂）。

2 试验方法

2.1 小鼠急性毒性试验［6-8］

2.1.1 试验动物分组及给药

小鼠在实验室适应观察1周，在活动、进食、粪便均无异常后，随机分为2组，服药组、空白对照组。服药组以决明山楂燕麦最大浓度（20％）及小鼠最大灌胃容量（0.5mL/10g）给小鼠一次性灌胃给药；对照组给等量生理盐水。

2.1.2 试验步骤及观察项目

观察比较两组小鼠精神状态、食欲、毛色、大小便是否正常；记录两组动物死亡数；14d后处死动物进行肉眼尸检，发现病变组织，需把病变组织进行组织切片显微镜观察。如果未发现毒性反应，这项可不做。

2.2 大鼠长期毒性试验

2.2.1 试验动物分组及给药

大鼠在实验室适应观察1周，在活动、进食、粪便均无异常后，24只大鼠随机分为3组，空白对照组、高剂量组、低剂量组。2个服药组每天分别按1.6g/kg、2g/kg体质量给决明山楂燕麦水溶液灌胃，相当于临床成人用药剂量的40倍、50倍。空白对照组给予等容量生理盐水灌胃，连续8周。

2.2.2 试验步骤及观察项目

每天给药前后观察大鼠进食，行为活动，尿、粪便性状，毛发等并记录异常情况，每2周称体质量1次；给药结束后24h，摘眼球取血做血液学及血清生化指标检测［9-12］；取血后处死大鼠，对组织器官进行肉眼观察，取心、肝、脾、肺、肾等组织精密称重，计算脏器指数（g/100g体质量），并进行病理组织学检查。

3 试验结果

3.1 急性毒性试验

两组小鼠一次性灌胃给药后连续观察14d，均未发生一只死亡，毛色、眼睛、精神状态、饮食、大小便均正常，第14d全部处死，进行尸解，肉眼观察各脏器未见异常改变。

3.2 长期毒性试验

3.2.1 对大鼠一般情况和体质量的影响

未观察到动物的活动、饮食、粪便、毛发有任何异常。大鼠体质量随年龄增长而增加，药物组大鼠体质量增长与对照组比较无明显不同。

3.2.2 对大鼠血液学指标的影响

常规血象研究表明，连续应用决明山楂燕麦对大鼠血红蛋白（HGB）含量、白细胞（WBC）计数及分类、血小板计数（PLT）无明显影响。

3.2.3 对大鼠血液生化指标的影响

药物组大鼠血清AST，ALT，BUN，Cr，GLU，Tp，ALB，TC含量与对照组比较差异无显著性。

3.2.4 对大鼠脏器指数的影响

给药组的脏器指数与空白对照组比较，差异无显著性。

3.2.5 病理组织学检查

取各组大鼠心、肝、脾、肺、肾肉眼观察均无充血、肿胀和坏死等异常改变，光镜检查药物低、高剂量组心、肝、脾、肺、肾的组织结构、细胞形态与对照组比较也未见异常，见图1～5。

图1 各组大鼠心脏HE染色图（×20）

图2 各组大鼠肝脏HE染色图（×20）

图3 各组大鼠脾脏HE染色图（×20）

图4 各组大鼠肺HE染色图（×20）

图5 各组大鼠肾脏HE染色图（×20）

4 讨论

由于决明子、山楂、荷叶等均是可作食品的中药材，预试验很大剂量也不引起动物死亡，急性毒性试验无法测出LD50值，故做最大耐受量测定。决明山楂燕麦以最大浓度、最大给药容积（计算剂量为10g/kg）一次给药后连续观察14d，未见小鼠死亡及脏器损害等毒性反应，则该药物对小鼠灌胃给药途径的LD50值大于10g/kg。此剂量相当于临床人用量的250倍（人日用量为0.04g/kg）。说明该药急性毒性低，临床应用安全。

长期毒性试验大鼠分别灌服决明山楂燕麦2g/kg，1.6g/kg连续8周后不影响其活动、饮食、外观及体质量增长；所测血液学指标、血液生化指标与空白对照组比较无显著性差异，说明决明山楂燕麦对大鼠造血系统，肝、肾功能，糖代谢、脂代谢，血清蛋白含量均无明显影响；主要脏器指数与空白对照组比较差异无显著性，肉眼观察用药组心、肝、脾、肺、肾外观形态、颜色均无异常改变，光镜检查也未见各脏器组织结构和细胞形态异常，说明决明山楂燕麦对重要脏器组织结构无损伤作用。本实验结果表明决明山楂燕麦1.6g/kg，2g/kg长期连续服用是安全的。该剂量分别相当于临床人用量的40，50倍。

［1］Zhang Z S，Walter K K，Huang H Y，et al.Hypocholesterolemic activity of hawthorn fruit is mediated by regulation of cholesterol-7α-hydroxylase and acyl CoA：cholesterol acyltransferase［J］.Food Research International，2002，35（9）：885-891.

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［3］Cho S H，Kim T H，Lee N H，et al.Effects of Cassia tora fiber supplement on serum lipids in Korean diabetic patients［J］.J Med Food，2005；8（3）：311-318.

［4］王小华，邓斌，张晓军，等.决明子黄酮类化合物的提取工艺研究［J］.现代农业科技，2008，16（24）：7-8.

［5］金晶，孙阳.复方荷叶制剂调节血脂作用的研究［J］.江西中医学院学报，2008，20（5）：69-70.

［6］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002.

［7］李玉华，郑金榆，彭韬，等.钙钠米粒子急性毒性及长期毒性试验［J］.中国药理学通报，2005，21（5）：640.

［8］王庆利，彭建.对化学药物急性毒性试验的思考［J］.中国新药杂志，2004，13（11）：961-964.

［9］周一平，李亚军，陈四艳，等.雷诺嗪对大鼠的长期毒性试验［J］.中国新药杂志，2007，16（3）：200-203.

［10］沃兴德，洪行球.姜黄素长期毒性试验［J］.浙江中医学院学报，2000，24（1）：61-65.

［11］任远，贡布东智.五味麝香丸长期毒性试验研究［J］.甘肃中医学院学报，2007，24（4）：14-17.

［12］李建荣，黄芳华.中药新药长期毒性试验设计及常见问题分析［J］.中国新药杂志，2004，13（9）：769-772.

〔编辑 杨德兵〕

The Toxicology Experiments of"Semen Cassiae Hawthorn Oat Capsules"

YU Jie-zhong，FENG Ling，BAI Jian-ping，ZHANG Hai-fei，YANG Li-zhi，MA Cun-gen
（Institute of Brain Science，Shanxi Datong University，Datong Shanxi，037009）

ObjectiveTo ensure the safety of drug use，the acute and Long-period toxic reactions of semen cassiae hawthorn oat were observed.MethodsFor the acute toxic reactions，the semen cassiae hawthorn oat was orally given for one-time at 10g/kg dosages（the maximum tolerance dose in mices），observed continuously for 14 days.Daily record toxicity，deaths and pathology examination were carried out.For the long-period toxic reactions，the semen cassiae hawthorn oat was orally given for 8 weeks continuously at low（1.6g/kg）and high（2g/kg）dosages.The rats'general physical state，hematological indexes，biochemical indexes，organ coefficients and histopathological examination were carried out.ResultsThere were no the toxic reaction and animals death at the acute toxic experiments.For the long-period toxic reactions，there were no significant differences of the general state，weight changes，hematological indexes，biochemical indexes and organ coefficients in rats of low and high dosage group when compared with control group.Macroscopic observation of heart，liver，spleen，lung and kidney showed no abnormal change of appearance shape and color.Pathologic examination did not show any structural and cellular abnormalities of each organ.Conclusionssemen cassiae hawthorn oat is safe and non-toxicit for experimenta animals，these data may provide useful information for clinical use.

Semen Cassiae Hawthorn Oat；fatty liver；acute toxicity test；long-period toxicity test

R961

A

1674-0874（2011）02-0041-04

2011-01-15

山西省科技攻关资助项目［20100321105］

尉杰忠（1975-），男，山西阳高人，硕士，讲师，研究方向：神经免疫及神经病学；*马存根，男，博士，教授，通信作者。