五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠精子质量及睾丸组织的影响

王秋萍， 王桐生， 龙子江， 刘向国， 饶玉松， 孙 鑫， 陈 花

(1．安徽省疾病预防控制中心毒理室，安徽合肥230031;2．安徽中医学院药理学教研室，安徽合肥230038;3．安徽中医学院中西医结合临床学院，安徽合肥230038)

少精子症、弱精子症是男性不育最常见的病因之一。引起男性少、弱精症的病因病机复杂，其治疗方法还处在探索发展阶段，中医药在“补肾”为其治疗大法的基础上进行辨证论治，对改善精子的数量和质量及运动功能方面显示出独特的优势，本实验以经典补肾方剂五子衍宗丸为研究对象，系统观察该方剂对少弱精模型大鼠精子质量及睾丸组织病理改变的影响，以期探讨“补肾法”的科学内涵。

1 材料

1．1 实验动物 雄性 Wistar大鼠，体质量180～200 g，SPF级，由安徽省实验动物中心提供，合格证号为:SCXK(皖)2005-001号。

1．2 实验药物 五子衍宗丸(枸杞子、覆盆子、菟丝子、五味子、车前子)，剂量参考《中华人民共和国药典》2005年版中五子衍宗丸成分中各药比例计算，每剂含枸杞子16 g、菟丝子16 g、覆盆子8 g、车前子4 g、五味子2 g，采用水煎浓缩成合适浓度备用。雷公藤多苷片，10 mg/片，上海复旦复华药业有限公司生产，批号:100502;黄精赞育胶囊，上海新亚药业邢江有限公司生产，0．31 g/粒，批号:100502。

1．3 实验仪器 OLYMPUSBX60光学显微镜;恒温水浴锅箱，北京东霞科学仪器厂生产。病理组织包埋机、组织切片机等。

2 方法

2．1 动物分组及给药［1］取体质量为180～200 g的雄性大鼠60只，随机分成正常组，模型组，黄精赞育胶囊组(阳性组，3．01 g/kg)，五子衍宗丸小、中、大剂量组(分别为 3．83、7．67、15．33 g生药/kg，按公斤体质量计算相当于人用量 46 g生药/d的5、10、20倍)。除正常组外，其他各组动物灌胃给予雷公藤多苷30 mg/(kg·d)(用0．5%CMCNa制成混悬液)，连续30 d，造成少弱精子症模型。造模结束后各组动物按剂量灌胃给药，1 mL/100 g体质量，连续给药30 d，末次给药后30 min，处死动物，摘取睾丸、附睾，做相关检测。

2．2 精子计数、活率测定［2］将盛有6 m L生理盐水的试管置于恒温水浴箱内预热至37℃，然后将一侧附睾剪碎放入试管中，摇匀，37℃保温15 min，使精子充分游离。取1滴适当稀释后滴入血细胞计数板上，200倍显微镜下计数5个中方格内精子数(n)，每毫升精子数为n×5×稀释倍数×104。另取1滴涂片，观察精子活率，至少观察200个精子，分别计数有活动力及无活动力的精子数。精子活率=活动精子数/(活动精子数+不动精子数)×100%。

2．3 睾丸组织病理学检查 取新鲜的睾丸组织，采用4%多聚甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，苏木精-伊红染色，光镜下进行病理学检查。

3 结果

3．1 五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠精子质量影响 结果见表1。

表1 五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠精子质量影响( ± s，n=10)

表1 五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠精子质量影响( ± s，n=10)

与正常组比，*P ＜0．05;与模型组比，ΔP ＜0．05。

组别 剂量/(g/kg)精子活力/%精子密度/(×106/mL)正常组 － 78．90±9．15Δ 26．40±3．63Δ模型组 － 33．50±13．39* 13．90±3．41*赞育胶囊组 3．01 58．10 ±13．96*Δ 18．90 ±8．91*五子衍宗丸组(小) 3．83 42．19 ±9．59* 17．40 ±6．19*五子衍宗丸组(中) 7．67 51．20 ±12．02*Δ 17．20 ±4．47*五子衍宗丸组(大) 15．34 58．90 ±16．73*Δ 22．20 ±8．50Δ

由表1可见:雷公藤多苷连续造模30 d后，模型大鼠的精子活力与精子密度明显下降，与正常组比差异有显著性意义(P＜0．05)。连续给药30 d后，五子衍宗丸各剂量组动物的精子活力和精子密度均明显增加，其中五子衍宗丸中、高剂量组的精子活力、高剂量组的精子密度与相应模型组比差异显著(P ＜0．05)。

3．2 五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠睾丸组织的影响 结果见图1。

图1 五子衍宗丸对少弱精症模型大鼠睾丸组织形态学的影响

光镜检查可见:正常组大鼠睾丸生精小管呈圆形或卵圆形，生精小管内含大量精子。精原细胞圆而规则，紧贴在生精小管的基底膜。各期生精细胞排列整齐、紧密、有序，层次分明。支持细胞形态正常。模型组大鼠睾丸生精小管生精上皮明显变薄，生精细胞脱落，细胞层次紊乱，精原细胞、精母细胞减少，精子细胞及精子减少更加明显，睾丸间质细胞轻度水肿。其他给药各组大鼠睾丸生精小管呈圆形或卵圆形，生精小管内含大量精子。生精细胞排列稍疏松，结构清楚，层次分明，细胞层次减少，精原细胞数量正常，形态圆而规则，紧贴在生精小管的基底膜，其他各期生精细胞数量略减少，部分区域见少量生精细胞脱落。

4 讨论

有资料表明，雷公藤制剂对生殖系统的损伤部位在睾丸和附睾，以精子细胞和精子最为敏感，雷公藤多苷大剂量时精子细胞和精母细胞变性坏死，使睾丸组织造精功能丧失，失去生育能力［3-4］。本研究发现，雷公藤多苷连续给药30 d后，雄性大鼠睾丸生精小管生精上皮明显变薄，生精细胞脱落，细胞层次紊乱，精原细胞、精母细胞减少，精子细胞及精子减少明显，睾丸间质细胞轻度水肿，说明模型制备成功，采用雷公藤多苷制备少弱精子症方法可靠。

少弱精子症属于中医“精冷”、“精清”、“精少”范畴，“肾藏精，主生殖”，肾脏的精气盛衰直接影响人类的生殖健康，因此大多数医家对男性不育症多以“肾虚”立论，治疗多从补肾着手［5-6］。五子衍宗丸为著名的补益方剂，全方由枸杞子、菟丝子、覆盆子、五味子、车前子五种中药组成，方中枸杞子滋肾填精、菟丝子温肾益精，共为君药;覆盆子温肾而不燥、固精而不凝，五味子益气补虚、强阴涩精，共为臣药;车前子清肝肺风热，导膀胱水邪，利水而不动气，用为佐药。全方不凉不燥，共奏补肾填精、疏利肾气、种嗣衍宗之功，被誉为古今“种子第一方”［7-8］。本研究发现，五子衍宗丸能明显提高模型动物精子活力，改善精子密度，并对睾丸组织的损伤有一定的保护作用，说明“补肾”法对少弱精子症的治疗有明显疗效，但其治疗机制及科学内涵有待进一步研究。

［1］李德忠，李晓明，周小煦，等．补肾毓麟汤对雷公藤多苷致伤大鼠睾丸生殖细胞的修复作用［J］．中国中医基础医学杂志，2006，12(7):522-525．

［2］邵祥龙，罗 琼，秦 芹，等．山茱萸多糖对雄性大鼠性功能损伤的影响［J］．中国中药杂志，2010，35(6):772-775．

［3］姚青海，王知侠，刘润霞，等．育生液治疗大鼠少精症、弱精症的实验研究［J］．西安交通大学学报:医学版，2004，25(2):165-167．

［4］俞晶华，卞慧敏，张启春，等．补天育麟颗粒对雷公藤多苷致大鼠不育症模型的影响［J］．南京中医药大学学报，2007，23(5):313-315．

［5］刘 铁，苏家文．清热利湿结合补益生精法治疗不育症的临床观察［J］．中国性科学，2010，19(9):18-20．

［6］徐 璐，熊国保，胥杜鹃，等．少弱精症的中西医治疗现状与进展［J］．现代诊断与治疗，2009，20(2):82-85．

［7］王志强，梁 兵，黄耀全．五子衍宗丸治疗男性不育少弱精子症的疗效观察［J］．广西医科大学学报，2010，27(2)291-292．

［8］张长城，贾亮亮，许 佳，等．五子衍宗汤对环磷酰胺致小鼠生精障碍保护作用的研究［J］．中国中医基础医学杂志，2010，16(7):570-572．