实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较

范文勇

（广东省深圳市宝安区人民医院，广东深圳 518101）

近年来，随着产前筛查在基层医院的开展以及基层医生对巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染致畸认识的加深，本地区现已基本普及对孕前妇女CMV抗体（CMV-IgM）的检测。既往CMV-IgM的检测多采用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunoabsorption assay，ELISA）[1]，本研究拟采用实时荧光定量-PCR（real-time PCR）检测孕前妇女外周血CMV-IgM抗体水平，同时与ELISA法进行比较，评价这两种方法对CMV-IgM抗体检测的敏感性及准确率。

1 对象与方法

1.1 对象

本研究收集2008年1月～2010年6月在我院进行孕前检查的108例女性，年龄21～32岁，抽取空腹静脉血5 ml，离心分离血清后置于-80℃冰箱保存，用于CMV-IgM抗体的检查。

1.2 试剂及检测方法

CMV-IgM试剂盒（ELISA）购于德国罗氏公司，严格按照试剂盒说明书步骤操作，采用美国宝特ELX808酶标仪进行检测，波长设为450 nm处检测OD值，每份标本重复检测3次，取其均数。实时荧光定量-PCR送中山大学达安基因公司检测，引物系列：sense 5'-GTG CAC AGT CCT AGG ATT AA-3'，anti-sense 5'-GAG TAA CGA TTC GAA CCG TA-3'，逆转录反应条件为37℃ 1 h，然后95℃ 3 min；实时荧光定量-PCR 反应为 93℃ 3 min，然后 93℃ 30 s，55℃ 45 s，72℃45 s，共40个循环。主要仪器为ABI 3900台式高通量DNA合成仪，科大创新HC-3018R高速冷冻离心机，ABI 9700 PCR仪，ABI 7500全自动荧光定量PCR仪。

1.3 统计学方法

2 结果

两种检测方法CMV-IgM阳性率比较，实时荧光定量-PCR法阳性率高于ELISA法，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两种检测方法的CMV-IgM阳性率比较

ELISA法检测为阳性的62例妇女采用实时荧光定量-PCR检测也为阳性，其余18例实时荧光定量-PCR法检测为阳性的妇女ELISA法检测均为阴性。笔者分析发现，此18例标本血清CMV-IgM抗体拷贝数均明显较低（拷贝数<10-4/ml）。

3 讨论

本研究表明，采用实时荧光定量-PCR检测孕前筛查妇女外周血CMV-IgM抗体水平较传统的ELISA法敏感性及准确率高，对于孕前筛查可能具有较好的临床价值。

我国是CMV感染高发的国家，且多数人感染后无明显临床症状，表现为潜伏感染[2]。然而，孕妇近期感染CMV后，不仅会对孕妇产生严重影响，如流产、早产、死胎等[3]，CMV还可通过胎盘屏障到达胎儿体内，导致胎儿畸形、发育迟缓和神经系统发育异常等[4]。检测孕前妇女外周血CMV-IgM抗体水平是评价CMV近期感染的重要检测指标[5]，目前也为广大临床医师所重视。CMV-IgM抗体一般在病毒感染3～5 d后出现，可维持12～16周，具有出现早、消失快的特点[6]。病毒感染的早期或恢复期，血中CMV-IgM抗体水平较低。因此，采用敏感性高的检测手段对CMV感染的早期准确诊断具有重要的临床意义。既往多采用ELISA法，近年来随着实时荧光定量-PCR技术的普及，有研究报道实时荧光定量-PCR检测血清CMV-IgM抗体水平也具有较好的敏感性及准确率。

笔者选择108例孕前妇女，同时采用实时荧光定量-PCR和ELISA法检测外周血CMV-IgM水平，其中实时荧光定量-PCR阳性率为74%，而ELISA法为57%，两者差异有统计学意义（P<0.05）。进一步分析发现，其中18例实时荧光定量-PCR阳性的妇女外周血CMV-IgM抗体水平均为低拷贝数（拷贝数<10-4/ml），提示对于病毒低拷贝数的人群，采用实时荧光定量-PCR法检测可在一定程度上提高诊断的敏感性及准确率。实时荧光定量-PCR具有快速、准确、敏感性高的特点，笔者认为利用其这些特点可以在一定程度上提高CMV感染检测的敏感性及准确率，但其费用较传统ELISA法高，这可能也在一定程度上限制了这种技术的临床运用。

总之，笔者认为，实时荧光定量-PCR对孕前妇女CMVIgM抗体水平的检测较传统ELISA法具有较高的敏感性及准确率，值得临床推广使用。

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