束缚加悬吊应激大鼠脑组织单胺类神经递质的变化及异丙酚对其的影响

李晓梅 杨成君 陆艳娟 (吉林大学白求恩医学院生物化学与分子生物学实验中心，吉林 长春 130021)

单胺类神经递质在应激状态下其含量异常〔1～4〕，目前尚未有关于麻醉剂异丙酚对应激大鼠不同脑区单胺类神经递含量变化的报道。本研究旨在观察异丙酚对束缚加悬吊应激大鼠脑组织不同脑区单胺类神经递质含量的影响。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 雄性SD大鼠30只，体重(250±10)g，吉林大学实验动物中心提供。正常饮食，昼夜饲养48 h。于实验前12～24 h禁食，不限水;实验分组，雄性SD大鼠30只随机为:应激对照组(S组)，将大鼠四肢用绷带分别固定于鼠板上，头朝下尾朝上悬挂，经股静脉注射5 ml生理盐水，在1 h内注射完毕;麻醉剂异丙酚组，分别在1 h内经股静脉注入用5 ml生理盐水稀释的异丙酚5 mg/kg(p1组)和10 mg/kg(p2组)束缚加悬吊时间为 6 h〔5〕。

1.2 实验试剂与仪器 注射用异丙酚，西安力邦制药有限公司;5-羟色胺(5-HT)，硫酸肌肝，去甲肾上腺素(NE)，多巴胺(DA)(美国SIGMA公司);邻苯二甲醛(分析纯上海化学试剂公司)，L-半胱氨酸(上海康达公司)。荧光分光光度计 RF-5301PC(日本岛津公司)，电热三用水箱DS-1型(北京医用仪器厂)，冷冻离心机TGL-16G型(上海分析仪器厂)。

1.3 单胺类神经递质测定与取材 各组动物实验结束后，处死迅速取脑组织分出不同脑区－80℃保存，用时取出，称重于冰冷酸性正丁醇中制成匀浆，离心分离水相及有机相。5-HT在碱性条件下与邻苯二甲醛缩合，形成具有荧光的化合物，NE、DA与氧化剂反应成具有荧光的化合物，上述荧光化合物强度与浓度成直线关系，即可测定其荧光强度〔6〕。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件进和分析，数据结果以±s表示，组间比较用t检验，P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量比较 大剂量异丙酚组脑干DA含量明显高于盐水对照组(P＜0.01)，小剂量异丙酚组5-HT含量明显低于盐水对照组(P＜0.01)。见表1。

表1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

表1 各组大鼠脑干NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

与对照组比较:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

组别NE DA 5-HT S组1.01±0.07 1.53±0.21 9.24±0.21 p1组 1.02±0.19 1.79±0.33 6.06±0.722)p2组 1.12±0.08 2.23±0.362)9.25±1.45

2.2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量比较 小剂量异丙酚组NE含量明显高于盐水对照组，而5-HT含量明显低于盐水对照组(P＜0.01);大剂量异丙酚组小脑NE、DA含量明显高于盐水对照组(P＜0.01)。见表2。

表2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

表2 各组大鼠小脑NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

组别NE DA 5-HT S组0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 p1组 0.66±0.312) 1.89±0.18 1.96±0.552)p2组 0.99±0.112) 1.71±0.362)3.47±0.51

2.3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量比较 大剂量异丙酚组皮质DA含量高于盐水对照组(P＜0.05)。其他与盐水对照组比较无明显差异(P＞0.05)。见表3。

表3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

表3 各组大鼠皮质NE、DA、5-HT含量变化(μg/g，± s，n=10)

组别NE DA 5-HT S组1.33±0.94 1.81±0.25 5.43±1.43 p1组 1.28±0.24 1.63±0.35 6.79±1.75 p2组 1.23±0.53 1.42±0.411)5.05±0.79

3 讨论

单胺类神经递质包括NE、DA、5-HT等。应激状态时这些指标起到了非常重要的作用，检测脑组织中单胺类神经递质含量变化对研究这类递质的生理、生化功能有重要意义。应激反应的重要特征之一是下丘脑-垂体-肾上腺轴激活，主要引起交感神经兴奋。许多实验证明单胺类神经递质在应激状态下有改变，同时对机体应激起着主要的调节作用。当个体暴露于应激中，肾上腺轴活性增强，导致肾上腺皮质激素分泌增加，糖皮质激素是主要的应激激素之一，除能升高血压外，还能影响肾上腺素α受体的表达，增加儿茶酚胺类的作用效果，同时还能通过对中枢神经的影响，抑制前列腺素、缓激肽、5-HT等的合成，继而引起血管收缩效应。糖皮质激素分泌增加还可以促进肾小管的重吸收，增加血容量，从而升高血压。在正常情况下，单胺类神经递质的分泌保持在一定水平，并且他们之间的比例协调，从而维持功能稳定。随着应激情况出现，单胺类神经递质也相应地发生改变，从而引起一系列功能紊乱症状的发生。本实验显示，不同脑区的单胺类神经递质NE、DA、5-HT对异丙酚作用的敏感性不同，小剂量异丙酚组脑干、小脑5-HT明显低于对照组，而小脑NE含量明显高;大剂量异丙酚组脑干、小脑、皮质DA含量升高，说明异丙酚对脑中枢神经产生一定的影响，以改变其神经递质的释放，其作用机制有待进一步探讨。

1 Zhu W，Xie W，Pan T，et al.Comparison of neuroprotective and neurorestorative capabilities of rasagiline and selegiline against lactacystin-induced nigrostriatal dopaminergic degeneration〔J〕.J Neurochem，2008;105(5):19708.

2 Gonzalez MM，Aston-Jones G.Light deprivation damages monoamine neurons and produces a depressive behavioral phenotype in rats〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2008;105(12):4898-903.

3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disnuption of dopamine homeostasis underlies selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李晓林，陆艳娟，李晓梅，等.束缚加悬吊应激模型大鼠血清、脑组织单胺类神经递质含量变化〔J〕.中国实验诊断学，2008;12(11)1349-51.

6 张 燕，王洪斌，杨海霞，等.荧光分光度法测定大鼠不同脑区单胺类神经递质〔J〕.东北农业大学学报，2010;41(1):94-6.