细菌性肺炎儿童血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α测定及临床意义

严 倩 许天翔 杭州市萧山区第六人民医院 杭州 311261

周华斐 浙江省台州医院

童夏生 王恩智 李晨虹 狄志敏 浙江省台州市中西医结合医院

细菌性肺炎（bacterial pneumonia）是儿科常见病、多发病，是儿童死亡的最主要原因之一[1]。腺病毒或呼吸道病毒感染引起的急性呼吸道感染的婴儿，其血清中可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR）2的表达水平显著增高[2]。但sTNFR在细菌性肺炎中的作用尚未完全阐明，尤其是与肿瘤坏死因子（TNF－α）的相关性如何目前知之甚少。本研究通过检测细菌性肺炎儿童患者血清sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α水平变化，探讨其在细菌性肺炎发病中的作用及判断病情的临床意义。

1 临床资料

41例细菌性肺炎病例选自我院2009年7月—2010年3月住院患儿，轻度36例，重度5例。所有病例均符合细菌性肺炎的诊断标准[3]。经痰细菌培养阳性。其中男26例，女15例，年龄6个月～9岁，平均（5.5±2.0）岁；另选健康对照组22例，为同期无感染征象的健康体检儿童，其中男15例，女7例，年龄3～9岁，平均（5.8±1.5）岁。两组儿童性别、年龄具可比性。

2 方法

2.1 标本采集 采集患儿入院当时（急性期）及症状消失后3天（恢复期）的静脉血各2mL，3000r/min离心15min，分离血清，－20℃冰箱贮存，集中检测。健康对照组于体检时抽取静脉血。

2.2 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α检测 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法，检测血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平，操作严格按说明书进行，试剂盒均购自美国Biosource公司。具体方法：试剂盒平衡于室温20～25℃待用，取出96孔反应板，分别加入50μL标本于反应孔里，吸取200μL（sTNFR1或sTNFR2或TNF－α）抗体至反应孔里，室温下孵育1h，吸出液体，洗板3次，加50μL显色液，室温孵育15min，每孔加入200μL终止液，全自动酶标仪（芬兰Labsystems Dragon公司）在450nm波长读取吸光度值，绘制标准曲线，根据各标本吸光度值在标准曲线上查得相应的浓度。

2.3 统计学方法 使用SPSS 11.0统计软件，数据以（±s）表示。肺炎组的急性期与恢复期间比较采用配对t检验，肺炎组与健康对照组间比较采用成组t检验。两变量的相关分析用Pearson直线相关分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平 细菌性肺炎患儿急性期血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平显著性高于对照组（P均＜0.01）。恢复期三项指标则显著性低于急性期（P＜0.01，P＜0.05）；肺炎恢复期sTNFR2和TNF－α水平高于对照组（P均＜0.01），而sTNFR1水平与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表 1。

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比较（±s）

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比较（±s）

注：与健康对照组比较，△P＜0.01；与急性期比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组 别 n/例 sTNFR1 sTNFR2 TNF－α健康对照组 22 2.07±0.86 4.75±1.68 1.96±0.86肺炎急性期 41 5.05±2.27△ 14.18±6.01△ 3.39±1.73△肺炎恢复期 41 2.67±1.28** 10.16±3.21△** 2.75±0.82 △*

3.2 相关性分析 sTNFR1与sTNFR2、TNFα表达水平呈显著正相关（n=104，r=0.389，P＜0.01；n=104，r=0.244，P＜0.05）；sTNFR2 与 TNF－α 表达水平无相关性（P＞0.05）。

4 讨 论

TNF是一种具有多种生物学效应的重要生理学炎症介质，适当的TNF浓度可调节机体的免疫及代谢功能，增强对入侵病原体的抵抗力，对维持机体内环境的稳定状态及抵制各种致病因子具有重要意义，而TNF过量则可导致多种病理改变。研究[1，4]发现，TNF在肺炎患者的血清和肺泡灌洗液中表达升高，并随着肺炎的严重程度而增加。但TNF的所有生物学功能都依赖于TNFR，只有在与其受体结合后，TNF才能发挥其生物学效应。TNFR主要有两种亚型：TNFR1和TNFR2。TNFR在细胞表面表达，称为膜结合型TNFR（mTNFR），mTNFR在蛋白酶等作用下，可裂解成sTNFR1和sTNFR2，释放到血液或组织液中。mTNFR和sTNFR的生物学作用不尽相同，sTNFR仍有结合TNF的活性，从而调节TNF的生物学功能。TNFR具有重要的生理作用，包括抗炎、细胞毒作用，对细胞增殖作用的影响及Fc的抗TNF作用。sTNFR在正常个体中水平很低，而在病理状态中则明显升高[4－5]。临床上已使用依那西普（一种sTNFR）治疗特应性皮炎，皮肤症状得到显著改善[6]。因此对TNFR，特别是对sTNFR的研究，对疾病的诊断及治疗可能有一定的指导作用。

本研究发现，细菌性肺炎急性期患者血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平显著高于对照组，表明它们可能均参与了肺炎的炎症过程。恢复期三项指标均显著低于急性期，表明TNF－α及其sTNFR水平随着肺炎的炎症程度而相应地发生变化，在急性期炎症较重时升高，恢复期炎症减轻时下降，有助于肺炎的病情判断。推测直接或间接阻滞TNF与其受体的结合可能是有效治疗肺炎的途径之一。肺炎恢复期sTNFR1和TNF－α水平仍然高于对照组，提示肺炎恢复期可能还处于炎症过程。相关性分析表明，sTNFR1与sTNFR2水平呈显著正相关，提示炎症过程中两者的表达同时升高或降低，共同起到抗炎作用，而非选择性地以某一种受体为主。sTNFR1与TNF－α水平呈显著正相关，表明sTNFR1表达水平随着

变化而变化。相似的研究也表明，社区获得性肺炎患儿血清sTNFR1水平显著高于健康对照组[7]，而且在非感染引起的慢性肺部疾病的早产儿，sTNFR1水平显著高于无慢性肺部疾病组[8]。上述均提示sTNFR在呼吸道疾病中起着重要的作用。

［1］张绍芬，邓继岿，黄宝兴，等.肺炎患儿支气管肺泡灌洗液中TNF－α和PS水平变化研究［J］.中国儿童保健杂志，2009，17（4）：448－450.

［2］Fernández JA，Tapia L，Palomino MA，et al.Plasma interferon－gamma，interleukin－10 and soluble markers of immune activation in infants with primary adenovirus（ADV）and respiratory syncytial virus（RSV）infection［J］.Eur Cytokine Netw，2005，16（1）：35－40.

［3］胡亚美，江载芳．实用儿科学［M］．第7版．北京：人民卫生出版社，2002：1180．

［4］周京国，郭哓兰，袁国华，等.肿瘤坏死因子受体p55和p57在骨关炎软骨细胞的表达及意义［J］.中华风湿病学杂志，2007，11（1）：12－15.

［5］Luce A，Courtin A，Levalois C，et al.Death receptor pathways mediate targeted and non－targeted effects of ionizing radiations in breast cancer cells［J］.Carcinogenesis，2009，30（3）：432－439.

［6］Rullan P，Murase J.Two cases of chronic atopic dermatitis treated with soluble tumor necrosis factor receptor therapy［J］.J Drugs Dermatol，2009，8（9）：873－876.

［7］Droemann D，Hansen F，Aries SP，et al.Neutrophil apoptosis，activation and anti－inflammatory cytokine response in granulocyte colony－stimulating factor－treated patients with community －acquired pneumonia［J］.Respiration，2006，73（3）：340－346.

［8］Sato M，Mori M，Nishimaki S，et al.Soluble tumor necrosis factor receptor－1 in preterm infants with chronic lung disease［J］.Pediatr Int，2010，52（2）：268－272.