海安县某规模鸡场球虫种类调查

钱学智

（江苏畜牧兽医职业技术学院，泰州 225300）

鸡球虫病是一种由孢子虫纲真球虫目艾美耳科艾美耳属（Eimeria）的球虫引起的寄生性原虫病，呈世界性分布，世界上凡是养鸡的地方就有鸡球虫存在。该病是严重危害养鸡生产的主要鸡病之一。据统计，在各种鸡病中，球虫病的发生率最高，占1/6～1/5。15～50日龄的雏鸡发病率最高，死亡率可高达80%。成年鸡多为带虫者，增重和产蛋受到一定影响。耐过的病鸡，长期不得康复，生长发育受到严重的影响。而且，球虫寄生引起的组织损伤和肠道功能的变化，可造成各种有害病菌的侵入和繁殖，如产气荚膜梭状杆菌（Clostridium perfringens），可导致坏死性肠炎或伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimunium）的继发感染。球虫病还可与免疫抑制性疾病如马立克氏病（MD）和传染性法氏囊病（IBD）等并发[1]。

球虫病对养鸡业造成的危害：一方面，爆发后大批的死亡和生产力的下降，另一方面，在于预防给药所需的巨大费用。从世界范围看，估计全世界每年因鸡球虫病造成的损失高达20亿美元，全球每年用于防治鸡球虫病的药物费用约20英镑。就国内而言，据报道近年来我国的鸡存栏数约30亿羽左右，按每羽支付抗球虫药费用至少0.1～0.2元计算，则全年用于防治鸡球虫病的费用可达3.1亿～6.2亿元人民币，实际发生的费用要远远高得多。

鸡球虫同一宿主可以感染几种球虫，而且不同的地理区域球虫种类的分布和优势种有所不同。不同种类的球虫其致病性有很大的差异，因而了解不同地理区域和不同鸡场球虫种类的分布对于鸡球虫病的预防具有指导意义。江苏省海安县是中国著名的禽蛋之乡，鸡的养殖数量和规模在国内处于领先地位，鸡的球虫病一直是困扰该地区养殖业的一大主要疾病。为了对临床用药提供一定的理论依据，我们选择了海安镇周边地区具有一定代表性的某规模化肉鸡饲养场，对其鸡球虫种类及感染情况做了一初步调查。

1 材料与方法

1.1 样品采集

粪便采集于海安县海安镇某大型AA肉鸡饲养场，该鸡场为网上平养，多年受到鸡球虫病的困扰，采样时该鸡场饲养3批（45日龄、50日龄和55日龄）肉鸡，对3批肉鸡各选择2栋鸡舍进行采样，每栋鸡舍采样时分四周和中央共5点，采集新鲜排出的粪便，迅速送回江苏畜牧兽医职业技术学院寄生虫实验室进行处理。

1.2 卵囊分离培养

将粪样分别置于干净的小烧杯中，再加入适量的清水搅拌混匀，分别经60目铜丝筛和260目尼龙筛过滤，倒去粪渣，将滤液按照水洗沉淀法反复洗涤，倾弃全部上清液得沉渣。将沉渣加入饱和盐水并移入离心管使之近满，搅动管底沉渣，静置3～5 min后，再在2 000 r/min条件下离心5 min，沉渣中卵囊即漂浮至液面。吸取上层饱和盐水，加清水进行反复水洗离心沉淀，沉淀即为已经初步纯化的球虫卵囊。沉淀中最后加入等量的25 g/L重铬酸钾，移至加盖的平皿中，放入29℃的恒温箱中培养，经常晃动，使有充分的氧气孢子化，并视情况滴加25 g/L重铬酸钾防止干涸，培养3～5 d使之孢子化，并进行种类鉴定。

1.3 球虫种类鉴定

将含分离卵囊的培养皿置于29℃温箱后，每间隔一段时间用吸管吹打混匀培养液并吸取1滴置于带有测微尺的显微镜下，在10×40倍下观察每一种孢子化卵囊的形态、颜色、大小、卵囊壁的厚度与光滑度、卵膜孔、极粒、内外残体的有无、孢子囊的形态结构、孢子囊和子孢子的大小以及出现时间，显微测量每种卵囊大小至少观察50个，计算其平均值和形状指数。同时随机观察100个孢子化卵囊，记录每种卵囊所占比例。最后根据观察和统计结果并参照图谱和有关文献资料进行虫种鉴定[1]。

1.4 分离

1.4.1 试验动物

1日龄健康刚出壳苏禽黄羽肉鸡，购自江苏扬州中国农科院家禽研究所育种中心，饲养于无球虫的环境中，自由采食和饮水，所喂饲料在加工配制过程中保证不含有任何抗球虫药，水经煮沸10 min以上冷却后供鸡饮用。雏鸡饲养至12日龄，经过粪便饱和盐水漂浮镜检无球虫后进行卵囊接种增殖试验。

1.4.2 卵囊接种与柔嫩艾美尔球虫的初步分离

将1.2中3批鸡分离的孢子化的卵囊混匀后按每只鸡1万个用钝头注射器经口接种于12日龄的肉鸡，第8～9 d扑杀，取盲肠内容物，按照1.2中粪样中卵囊分离的方法和步骤分离培养卵囊。将分离的孢子化卵囊再次接种12日龄的肉鸡，第8～9 d扑杀，取盲肠内容物，同时收集6～8 d粪便，按照1.2中粪样中卵囊分离的方法和步骤分离培养卵囊，进行卵囊的复壮和增殖，以备药物疗效试验时接种用。

2 结果

2.1 球虫种类调查结果

经过调查，该肉鸡饲养场主要感染3种鸡艾美耳球虫，即柔嫩艾美耳球虫（E. tenella）、巨形艾美耳球虫（E. maxima）和堆形艾美耳球虫（E. acervulina），3种日龄的肉鸡感染的种类则完全一致，说明该鸡场球虫感染种类较为一致和恒定，所观察到的3种球虫特征如下：

2.1.1 柔嫩艾美耳球虫

卵囊宽卵圆形，卵囊壁两层，光滑无色；卵囊大小为（19.5～26 μm）×（15.7～21.6）μm，平均为22 μm×19 μm，形状指数1.16；无卵膜孔；无卵囊残体；有1～2个极粒；孢子囊呈椭圆形，大小为（12～13 μm）×（4.5～7.5）μm，平均为12.2μm×6μm，有孢子囊残体，有斯氏体；子孢子大小为（9～10 μm）×（1.5～2）μm。

2.1.2 巨型艾美耳球虫

卵囊卵圆形，是6种球虫中最大的，卵囊壁2层，粗糙浅黄色，在重铬酸钾溶液中略带蓝色；卵囊大小为（21.5～42.5）μm×（16.5～29.8）μm，平均为30.5 μm×20.7 μm，形状指数为1.47；有卵膜孔；无卵囊残体；有1极粒；孢子囊长卵圆形，大小为（15～19）μm×（8～9）μm，平均为18μm×9μm，无孢子囊残体，有斯氏体，折光体明显；子孢子大小为19 μm×4 μm。

2.1.3 堆形艾美耳球虫

卵囊窄卵圆形，一端较尖，卵囊壁2层，窄端内膜变薄，无色光滑；卵囊大小为（17.7～20.2）μm×（13.7～16.3）μm，平均为18.3 μm×14.6 μm，形状指数为1.25；无卵膜孔；无卵囊残体；有1极粒；孢子囊长卵圆形，大小为（9～12 μm）×（4.5～7.5）μm，平均为10.5 μm×5.5 μm，无孢子囊残体，有斯氏体。

2.2 3种球虫感染情况

在显微镜（400×）下对3种日龄肉鸡所采集粪便中分离的球虫孢子化卵囊进行观察，每个样品分别连续观察100个孢子化卵囊，统计出3种球虫所占所观察球虫总数的百分比，结果详见表1。

表1 3种球虫卵囊占卵囊总数的百分比（%）

由表中可知，3种日龄鸡感染的3种球虫的百分比虽然有一定的差异，但是基本一致。45日龄鸡感染柔嫩艾美耳球虫比例最高，为65%，其次为巨型艾美耳球虫，为22%，堆形艾美耳球虫最低，为13%。50日龄鸡感染柔嫩艾美耳球虫比例最高，为71%，其次为巨型艾美耳球虫，为18%，堆形艾美耳球虫最低，为11%。55日龄鸡感染柔嫩艾美耳球虫比例最高，为78%，其次为巨型艾美耳球虫，为14%，堆形艾美耳球虫最低，为12%。综合来看，该肉鸡饲养场以柔嫩艾美耳球虫所占比例最高，为优势虫种，其次为巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫，这两种球虫所占的比例较低。

2.3 柔嫩艾美尔球虫的初步分离结果

将初步分离的孢子化的混匀卵囊后接种于12日龄的肉鸡后，未出现明显血粪，剖检盲肠，盲肠壁可见轻微出血，将盲肠壁及内容物中的卵囊分离后进行孢子化，镜检确定均为柔嫩艾美尔球虫。将分离的柔嫩艾美尔球虫再次接种12日龄肉鸡，4 d时开始出现血粪，8 d扑杀时候，盲肠肿大，形成血凝块和坏死组织混合在一起的肠栓，盲肠壁出血和坏死严重，盲肠壁及内容物中的卵囊分离后进行孢子化，镜检确定均为柔嫩艾美尔球虫，柔嫩艾美尔球虫初步分离和复壮获得成功。

3 小结与讨论

（1）目前，全世界公认的鸡艾美耳球虫有7种，即柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫和和缓艾美耳球虫。另外，还有2种即哈氏艾美耳球虫和变位艾美耳球虫，其分类地位一直未得到公认。本次调查共检出3种，此次对球虫卵囊的鉴定主要以孢子化卵囊特征为主要依据，从孢子化卵囊的形态、大小以及形状指数等方面进行判断，结果与孙清平等2007年对扬州地区某规模化鸡场的调查结果基本一致[2]。这2次调查的对象均以肉鸡为主，饲养周期短，这可能是调查所获种类少的原因之一。另外，本次关于鸡球虫种类的调查方法，采用的是传统而且常用的方法，是根据卵囊的形态学特征进行种类鉴定，该方法虽然简便，但是部分球虫的卵囊形态特征差异不太明显，往往容易混淆，所得的结果也不十分可靠，特别是部分形态结构难以区分的种类往往容易混淆。为此，国内外学者进行了不少探索和研究，形成了如肠道内生发育阶段和病变观察、同工酶技术、多重PCR技术等多种鉴定方法，在条件允许的情况下，在开展球虫种类调查时应该2种以上方法相结合，这样结果才更可靠[1-2]。

（2）关于不同地区鸡球虫种类和分布，国内学者进行了大量调查，大量研究报道表明，许多因素如地区地理因素、日龄、品种、饲养方式等均会影响球虫的种类分布及优势虫株的组成。余明（1997）等[3]通过卵囊鸡体内增殖对四川遂宁某种鸡场的种鸡球虫感染情况进行了调查，发现有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫等4种球虫感染。金玉亮（1998）等[4]对哈尔滨地区的6个肉鸡和种鸡场球虫感染状况进行了调查，发现主要有3种球虫，即柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和和缓艾美耳球虫存在，其中柔嫩艾美耳球虫的感染强度远远大于另外2种，是该地区的主要致病种。杨发龙（2001）等[5]对成都地区5个郊县或郊区的9个鸡场的57只鸡进行了鸡球虫种类的初步调查，发现成都地区鸡球虫种类有世界公认的7个种中的6个种，即柔嫩、毒害、和缓、早熟、巨型及布氏艾美氏球虫，其中以柔嫩、早熟及和缓艾美尔球虫占优势，其中柔嫩艾美尔球虫危害最大，被应视为防治重点。杜爱芳（2002）等[6]对杭州地区的杭州市区、桐庐及建德等地的大型鸡场及个体养鸡场球虫感染情况进行了调查，通过对球虫卵囊的分离、培养，孢子生殖阶段虫体的形态观察，卵囊、孢子囊大小及卵囊孢子化时间的测定，初步将卵囊分为A型、B型、C型3种类型，并通过分别用这3种卵囊接种雏鸡纯繁后，收集的卵囊人工感染15日龄的小鸡，观察并记录接种后的发病时间，症状及病理变化等，鉴定球虫种类主要存在3个种，分别是柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫，而且笼养鸡的球虫感染种类和强度要远远低于地面平养和网上平养。陶建平（2003）等[7]对送检扬州大学动物医院50只鸡的球虫感染情况调查显示，15日龄以内鸡的球虫感染率为20%，15～50日龄鸡为96.5%，50日龄以上鸡为100%，总感染率为90%。共检出7种球虫，即柔嫩艾美耳76%、堆型艾美耳56%、巨型艾美耳22%、早熟艾美耳16%、和缓艾美耳10%、毒害艾美耳4%和布氏艾美耳2%。柔嫩和堆型为优势种。球虫多为混合感染的占71.1%，2种球虫混合感染最多占44.4%。陈丽凤（2003）等[8]对秦皇岛地区10个养鸡场鸡球虫种类的调查中发现6种球虫，分别是哈氏艾美耳球虫（34%）、柔嫩艾美耳球虫（26%）、早熟艾美耳球虫（12%）、和缓艾美耳球虫（12%）、堆形艾美耳球虫（11%）和毒害艾美耳球虫（5%）。宋建强（2003）等[9]从武汉郊区多个鸡场采回粪便，对艾维茵肉鸡进行感染，通过卵囊的实验室鉴定和鸡的病理剖检，初步鉴定出武汉地区鸡球虫有柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、布氏艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫等6种，主要致病虫株为柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫，与陈丽凤不同的是未发现可疑种哈氏艾美耳球虫。李培英（2004）等[10]对合肥市79份鸡的粪样进行了鸡球虫感染情况的检查，经鉴定所获7种球虫为毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫和早熟艾美耳球虫，球虫感染率存在一定的地区性和日龄差异，与其他报道所不同的是该地区鸡球虫优势虫种为毒害艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫。肖寒（2008）等[11]对安徽省5个县（区）鸡球虫种类及感染情况进行了调查，172份鸡的新鲜粪样，得出鸡球虫感染率为100%，共检出7种球虫，经鉴定均隶属于艾美耳属，分别为毒害艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、和缓艾美耳球虫、哈氏艾美耳球虫、早熟艾美耳球虫。本次对海安县某鸡场的调查结果表明该鸡场主要有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫，其中柔嫩艾美耳球虫是主要的优势种。以上报道表明，不同地区、不同日龄以及不同饲养方式等因素均会影响球虫种类和感染强度，在制定具体的治措施时，要合理选择和使用药物，要在详细调查和鉴定基础上制定防治方案，最好能针对优势虫株或混合虫株开展抗药性监测，合理选择药物，提高药物防治的效果，减少和延缓耐药性的产生，以进一步减少因球虫导致的经济损失。

[1] Bafundo K W，Cervantes H M，Mathis GF. Sensitivity of Eimeria field isolates in the United States：responses of nicarbazin-containing anticoccidials[J].Poult Sci，2008，87（9）：1760～1767

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[3] 余明. 遂宁某鸡场鸡球虫种类的调查[J]. 四川畜牧兽医学院学报，1997，11（2）：56～58

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[5] 杨发龙，蒋锡仕，李必富. 成都地区鸡球虫种类的初步调查[J].四川畜牧兽医，2001，28（4）27～30

[6] 杜爱芳，李肖梁，王素华.杭州地区鸡球虫种类研究[J].浙江农业学报，2002，14（2）：100～104

[7] 陶建平，孙秀红，孙寿永，等. 动物医院门诊病鸡球虫感染情况及其种类调查[J].中国兽医寄生虫病，2003，11（2）：40～44

[8] 陈丽凤，李蕴玉，张香斋，等. 秦皇岛地区十个鸡场鸡球虫种类的初步调查[J].中国兽医寄生虫病，2003，11（1）：38～40

[9] 宋建强，邵锦华，常国强，等.武汉地区鸡球虫种类的初步鉴定[J]. 湖北农业科学，2003（4）：95～97

[10] 李培英，彭克森，张学道. 安徽合肥市鸡球虫种类及感染情况调查[J].中国兽医寄生虫病，2004，12（3）：24～27

[11] 肖寒，李培英，王俊生，等. 安徽省部分地区鸡球虫种类及感染情况调查[J].中国兽医寄生虫病，2008，16（2）：18～22