吉林省部分地区猪伪狂犬病监测及净化

李晓慧 袁 陆 呼延含蓉 杨 木 宫 江 王玉福 温 伟 孙 跃

（1.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春，130062；

2.吉林省动物卫生监督所，吉林长春，130062；

3.吉林农业大学动物科技学院，吉林长春，130118

4.吉林省动物疫病预防控制中心，吉林长春，130062）

猪伪狂犬病（Pseudoribies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的家畜和多种野生动物共患的一种传染病。其对养猪业的危害程度不亚于口蹄疫和猪瘟。临床上主要表现为母猪繁殖障碍和仔猪的高死亡率，同时也是猪呼吸系统疾病综合征的重要原发性病原。

我国首次发现该病是1947年，刘永纯从猫体内首次分离出PRV。目前已有20多个省市报道该病的发生。自猪伪狂犬病传入我国后，一直被视为灾难性的烈性传染病，它的肆意横行，已经严重影响了我国养猪业的发展。每次爆发，都给我国的畜牧业造成巨大的经济损失。彻底控制并净化伪狂犬病意义重大。

从2001年开始，本课题组就着手进行吉林省内部分规模化猪场的猪伪狂犬病流行病学的调查工作，并在2004年将调查规模由商品猪场扩大到种猪场，并首次确定吉林省内猪伪狂犬病的血清学阳性率为21.17%。

1 概况

1.1 病原体

伪狂犬病病毒（PRV）属疱疹病毒科（Herpesviridae），甲型疱疹病毒亚科（Alphaherpesvirinae），水痘病毒属（Varicellovirus）的成员。该病毒为双股线性DNA病毒，有囊膜，囊膜上有纤突。病毒粒子大小为150～180 nm。PRV是疱疹病毒科中抵抗力较强的一种，在37℃下的半衰期为7 h，8 ℃可存活46 d，而在25 ℃干草、树枝和食物上可存活10～30 d。病毒在pH 4～9之间保持稳定，用0.5%～1%氢氧化钠可迅速使其灭活；5%石炭酸经过2 min可使其灭活，但0.5%石炭酸处理32 d后仍具有感染性。PRV对乙醚、氯仿等脂溶剂以及福尔马林和紫外线照射敏感。目前已知该病毒血清型只有一个。

1.2 流行病学

各种家畜如牛、羊、犬等可自然感染，许多野生动物也易感，但人对PRV无易感性。猪是PRV的贮存宿主和传染源，其对PRV的易感性与病毒的毒力、感染数量、感染途径、 动物种类、个体状态及应激情况等因素有关。该病无明显季节性，一年四季均可发生。发病猪多为2周龄左右仔猪，且死亡率高。成年猪也可发病，但多呈一过性，很少死亡。发病后存活下来的猪均为隐性感染者，终身带毒，受到一定条件的刺激会使病毒激活，在猪群中传播。PRV可通过直接接触传播，也可通过间接接触传播，目前要彻底消灭PRV应依靠监测与净化并行的技术手段。

1.3 临床症状

患病猪的临床症状会随年龄的变化而产生差异。出生仔猪患病后会全身颤抖，无力或停止吸乳，体温升高至41℃～41.5℃，精神萎靡，食欲不振。部分病猪出现叫声嘶哑、口角流涎，眼睑红肿；部分病猪出现共济失调，头歪向一侧，做圆圈运动；个别病猪出现呕吐或产后瘫痪；还有的患病仔猪表现出犬坐姿势，不时倒地，四肢划动，数分钟又恢复正常，经1～2h口吐白沫而死。死亡率高达95%以上。断奶仔猪在感染PRV时，发病率在30%左右，死亡率可达10%左右，主要表现为呕吐拉稀，也有病猪偶发神经症状。而成年猪一般为隐性感染，出现症状一般都很轻微，主要表现为发热、腹泻，4～8d即可完全恢复。怀孕母猪则会发生流产、产木乃伊胎或死胎，产后数月配种成功率低。公猪在感染PRV后，则表现出睾丸肿胀、萎缩，丧失种用能力。

1.4 病理变化

病猪一般表现为脑膜出血，扁桃体肿大，全身淋巴结肿大、出血或坏死。心房肌柔软，冠状沟有白色黏液附着，心肌肥厚并附有点状出血。气管内有大量泡沫状黏液。肾皮质部布满粟粒大小的出血点。膀胱黏膜有大小不等的出血点。仔公猪附睾肿胀或轻微出血。

1.5 诊断

根据疾病的临床症状和病理变化，结合流行病学，可做出初步诊断，确诊需进行实验室诊断，常用ELISA、血清中和试验和PCR进行检测。

2 血清学调查

2.1 材料与方法

实验材料 血清：吉林省内各县市猪场内未注射PR疫苗的猪血清共895份，-20 ℃保存；试剂盒：伪狂犬病胶乳凝集试验试剂盒（购自武汉科前动物生物制品有限责任公司）；灭菌木质牙签、载玻片。

2.2 方法

取被检血清、阳性血清、阴性血清各1滴分置于载玻片上，分别加入乳胶抗原各1滴，用灭菌木质牙签搅拌混匀，静置5min后观察结果。

2.3 结果

血清学调查结果详见表1、表2。

表1 吉林省内部分猪场猪伪狂犬病血清学调查结果

表2 吉林省内各地市猪场猪伪狂犬病阳性率统计

3 控制与净化

3.1 材料与方法

3.1.1 主要试剂与仪器 伪狂犬病胶乳凝集试验试剂盒（购自武汉科前动物生物制品有限公司）；猪伪狂犬病Tk/gI双基因缺失弱毒疫苗（购自哈药集团生物制品有限公司）；猪伪狂犬病gI-ELISA检测试剂盒（购自武汉科前动物生物制品有限责任公司）。

3.1.2 方法

3.1.2 .1 血清学监测 以猪场为单位，在猪场内进行普遍的血清学检查。本课题组首先对吉林省内部分猪场通过伪狂犬病胶乳凝集试验对所有猪血清进行检测，初步了解我省猪伪狂犬病流行情况，最终选择九台、四平、东丰、农安的4个猪场（3个轻度感染场，1个中度感染场）千余头猪作为重点净化对象实施净化方案。

3.1.2 .2 淘汰阳性猪 将通过伪狂犬病胶乳凝集试验得到的阳性猪和阴性猪分群饲养，阳性猪建议隔离饲养或扑杀。为避免感染面扩大，期间将猪场进行彻底消毒。

3.1.2 .3 采用基因缺失疫苗注射免疫 将全部猪注射猪伪狂犬病Tk/gI双基因缺失弱毒疫苗，注苗间隔4周再进行1次加强免疫，以后每4个月进行1次重复注射。

3.1.2 .4 血清学鉴别检查 首免1个月后采用gI-ELISA试剂盒对猪群进行检测，之后每隔半年进行1次血清学鉴别检查，将注射疫苗血清学阳性的猪归为健康群，将野毒感染血清学阳性的猪归为感染群，对检出阳性猪进行淘汰，采取隔离饲养或扑杀。

3.1.2 .5 复查 半年后再次采用鉴别ELISA诊断方法进行检测，对这4个猪场1年来净化情况进行总结。

3.2 结果

（1）通过伪狂犬病胶乳凝集试验进行了血清学监测，监测对象为整个猪场所有公猪（包括种猪和后备公猪）和母猪（包括生产母猪和后备母猪），以及所有哺乳仔猪、生长猪和育肥猪。其中公猪和母猪部分，九台猪场共采血清169份，检出阳性3份，阳性检出率1.78%；四平猪场共采血清178份，检出阳性4份，阳性检出率2.25%；东丰猪场共采血清163份，检出阳性17份，阳性检出率10.43%；农安猪场共采血清197份，检出阳性5份，阳性检出率2.54%。对所有检出阳性猪均进行了扑杀处理。哺乳仔猪、生长猪和育肥猪部分见表3。

（2）注射猪伪狂犬病Tk/gI双基因缺失弱毒疫苗1个月后，通过gI-ELISA诊断方法进行血清学鉴别检查。结果公猪和母猪部分，九台猪场共采血清164份、四平猪场共采血清170份、农安猪场共采血清194份，经检测试验样品孔OD630值均低于标阴值，结果均为阴性。东丰猪场共采血清138份，经检测检出阳性4份，阳性检出率3.13%，其余均为阴性。哺乳仔猪、生长猪和育肥猪部分见表4。

表3 各个猪场哺乳仔猪、生长猪和育肥猪血清学监测情况

表4 各个猪场哺乳仔猪、生长猪和育肥猪gE-ELISA血清学鉴别检查情况

（3）半年后，不分公猪和母猪再次进行血清学鉴别检查。九台猪场共采血清163份、四平猪场共采165份、东丰猪场共采128份、农安猪场共采189份，检测结果均为阴性；哺乳仔猪、生长猪和育肥猪部分，九台猪场共采血清1134份、四平猪场共采血清1017份、东丰猪场共采933份、农安猪场共采1228份，经检测结果也均为阴性，说明净化成功，效果明显。

4 讨论

（1）本课题组通过伪狂犬病胶乳凝集试验对吉林省内各县市部分猪场进行血清学调查，此次调查范围覆盖吉林省大部分地区，共包括28个县市内的51个猪场。调查总数为895头，其中有77头检查呈阳性，占检查总数的8.60%。这个结果相对于2004年本课题组的调查结论而言（2004年吉林省猪伪狂犬病的血清学阳性率21.17%），已经有了显著的下降，说明各个猪场无论从管理模式、生产水平还是防疫措施都有所加强。但我们不能掉以轻心，猪伪狂犬病还有随时发生暴发的可能，控制和净化猪伪狂犬病仍势在必行。

（2）血清学监测发现阳性猪达50%以上的种猪场，建议全群淘汰；阳性率超过1%未超过50%的，建议淘汰阳性猪。

（3）通过本课题组1年多来的实际研究发现，合理地利用基因缺失弱毒疫苗进行免疫、长期科学地监测以及制定严密规范的免疫程序和生物安全措施可以有效地控制PR，并逐步达到净化PR。

①本课题组选用了猪伪狂犬病Tk/gI双基因缺失弱毒疫苗，该弱毒疫苗具有良好的免疫效果，避免了其他疫苗免疫效果差的风险；另外缺失的gI基因可以做为一个“标记”基因，用来区分感染动物和接种动物，通过鉴别ELISA的方法即可筛选出阳性的野毒感染动物，从而为根除猪伪狂犬病打下基础。

②每隔半年，本课题组便对实施了净化程序的4个猪场进行伪狂犬病的监测，首先通过伪狂犬病胶乳凝集试验方法将猪场内感染猪伪狂犬病的阳性猪和阴性猪进行初步筛查，随后注射TK/gI双基因缺失弱毒疫苗，过1个月利用gI-ELISA诊断方法对猪场的送检血清进行监测，这样就可以动态追踪在实施猪场的净化程序后猪群中野毒阳性率的变化。

③接种时，妊娠母猪于分娩前21～28 d注苗为宜，其所生仔猪的母源抗体可持续21～28 d，此后的乳猪或断乳猪仍需接种；因某些原因而未用本疫苗免疫的母猪，其所生仔猪，可在生后7 d内进行接种，并在断乳后仍需接种。本实验中，4个猪场内未满7日龄的仔猪在7日龄之后统一进行接种，7日龄以上的1次性接种；母猪及妊娠母猪均进行1次性接种。

④这4个猪场在实验阶段均未引进新的种猪，并且将检出的阳性猪均进行了扑杀；实验阶段4个猪场均严格遵守本课题组制定的免疫程序，这或许也是他们没有受到猪伪狂犬病野毒侵袭的原因之一。

⑤对新引进的种猪，要进行严格的检疫，要引进伪狂犬病抗体阴性猪。若引进种猪未进行检疫，则在引到本场后进行隔离饲养，2个月后抽血样检查，抗体或野毒感染抗体为阴性者方可与本场其他猪混群饲养。与其他猪群一样，每隔半年应作一次血清学鉴别检查，对于检测出的野毒感染阳性猪要严格隔离，最好是将其淘汰不作种猪用或进行扑杀。

⑥对健康猪场而言，每3个月应进行1次血清学抽查，同时抽查的母猪数量不得少于25%。如检测出血清学阳性猪，应立即淘汰并给阴性猪注射疫苗，并加强监测。

⑦猪场要进行定期严格的消毒管理措施及灭鼠措施，同时禁止饲养猫狗等其他动物，防止疾病传播；同时严格控制外来人员及车辆进入猪场，避免外来人员和机械传播疾病；同时由于猪伪狂犬病病毒可在空气中传播，对周边猪场最好采取统一的管理措施。