高效液相色谱法测定肌醇烟酸脂及其制剂的有关物质

王宪忠 王丹彧 李东伟 张椿影 陈笑强

1.吉林省四平市食品药品检验所，吉林四平 136000；2.黑龙江省齐齐哈尔市第一医院，黑龙江齐齐哈尔161005

肌醇烟酸脂是降血脂药，具有降低胆固醇及扩张末梢血管的作用。用于高胆固醇血症、动脉粥样硬化及末梢血管障碍性疾病等的辅助治疗。目前肌醇烟酸脂收载于《卫生部药品标准》化学药品及制剂第1册[1]，有关物质检查为薄层色谱法；随着部颁标准转为国家标准，杂质方法检查应该修订；本研究根据试验结果，建立了高效液相色谱法测定肌醇烟酸脂的有关物质，使质量标准更加完善。

1 仪器与试药

Ajient1100液相色谱仪，WVD检测器，1100工作站。KQ-1000型超声波机（昆山市超声仪器有限公司，200W）。乙晴、四氢呋喃均为色谱纯，水为二次蒸馏的纯化水；肌醇烟酸脂对照品（齐齐哈尔鼎恒升药业，20100623）；供试品肌醇烟酸脂片（北京赛科药业有限公司，0903023；临汾宝珠制药有限公司，0906022；山西威奇达药业有限公司，0904011），规格0.2 g。

2 试验方法与结果

2.1 色谱条件和系统使用性试验[2]

使用色谱柱为 Diamonsil-C18（150 mm×4.6 mm，5μm），流动相[3]：水-甲醇-四氢呋喃（45∶45∶10）；检测波长262 nm；流速1.0 mL/min；柱温28℃，进样量10μL。理论塔板数按肌醇烟酸脂峰计为3 800。系统适用性试验溶液的配制：取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）适量，温水浴10 min，振摇溶解，冷却至室温，再加水-四氢呋喃（50∶50）至量瓶刻度，摇匀，量取10μL注入其中液相色谱仪，并调节其灵敏度，使主成分色谱峰的峰高达到满量程，色谱图中肌醇烟酸脂与降解产物的分离度不小于1.5。

2.2 溶液制备

2.2.1 供试品溶液 取肌醇烟酸脂25 mg，加置25 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）适量，温水浴10 min，振摇溶解，冷却至室温，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液 取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）适量，温水浴10 min，振摇溶解，冷却至室温，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，摇匀，作为储备液；精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3 方法专属性考察

2.3.1 碱破坏性试验 取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L氢氧化钠[水-四氢呋喃（50∶50）]溶液10 mL，置60℃水浴中加热4 h，放冷后以1 mol/L盐酸溶液调pH至中性，再加水-四氢呋喃（50∶50）溶解至刻度，依法测定，记录色谱图。见图1-A。

2.3.2 光破坏性试验 取“2.2”相下的供试品日光下照射8 h，依法测定，记录色谱图。见图1-B。

2.3.3 热破坏性试验 精密量取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，水浴中加热4 h，放冷至室温，另取肌醇烟酸脂对照品适量置120℃烤箱中加热4 h后，精密量取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加水-四氢呋喃（50∶50）适量，温水浴10 min，振摇溶解，冷却至室温，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，摇匀，分别依法测定，记录色谱图。见图1-C。

2.3.4 酸性破坏性试验 取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸（水-四氢呋喃（50∶50）10mL，置60℃水浴中加热4 h，加水-四氢呋喃（50∶50）10 mL溶解，放冷后加0.1 mol/L氢氧化钠调节至中性，再加水-四氢呋喃（50∶50）10 mL溶解至刻度，依法测定，记录色谱图。见图1-D。

2.3.5 氧化破坏性试验 取肌醇烟酸脂对照品25 mg，置25 mL量瓶中，加0.5%过氧化氢溶液10 mL，置60℃加热4 h后煮沸2 h，放冷，加水-四氢呋喃（50∶50）至刻度，依法测定，记录色谱图。见图1-E。

2.3.6 溶剂干扰试验 本品溶液制备以水-四氢呋喃（50∶50）为溶剂，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。见图1-H。

图1 HPLC方法专属性考察图谱

2.4 最低检测限试验

对照品溶液经过逐渐稀释后开始测定，最低检测限以信噪比3∶1时的峰高为准，测得肌醇烟酸脂的最低检出量为0.001 ng。

2.5 精密度试验

按照“2.2”项下的方法，取同一批样品，分别配制出6份供试品溶液，记录这6份供试品溶液的进样色谱图，6份样品中，测得的最大单一杂质的含量平均值为0.16，RSD为0.86%，测得杂质总和的平均值为0.42，RSD为1.21%，精密度表现良好。

2.6 稳定性试验

分别在 0、2、4、8、12、24 h 依法测定“2.2”项下的对照溶液和供试溶液，对照溶液和供试溶液的主峰面积RSD为分别为0.21和0.89，其中在供试溶液中测得最大单一杂质含量平均值为0.18%，杂志总和的平均值为0.36%，RSD为0.78%，表明24 h内两种溶液基本稳定。

2.7 线性关系考察

精密称取肌醇烟酸脂25 mg，置25 mL量瓶中，用在以水-四氢呋喃（50∶50）10 mL溶解至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备在以水-四氢呋喃（50：50）稀释成浓度为 0.1、0.25、0.5、0.75、1.0 mg/mL 的系列溶液（约相当于杂质0.1%～3.0%），分别精密量取上述溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；以肌醇烟酸脂的浓度为横坐标（X），以相对应的峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，回归方程为Y=306.96X－0.93，r＝0.9998（n=6），结果表明肌醇烟酸脂在1～30 mg/L浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.8 样品的有关物质测定

取3个厂家样品，按“2.2”项下配制供试品、对照品溶液，精密量取对照品溶液10μL注入色谱仪，调节检测灵敏度使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%，在量取“2.2”项下的供试品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。量取个杂质峰面积，按主成分自身对照法计算杂质量。供试品溶液色谱中如有杂质峰，个杂质峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积。样品有关杂质测定结果见表1、图1-F。

表1 样品测定结果（%）

3 讨论

近年来我国心脑血管疾病发病率不断升高，高脂血症在中老年疾病中十分常见，血脂水平异常是引起动脉粥样硬化的一个主要因素，肌醇烟酸脂作为降血脂药，本研究主要对肌醇烟酸脂及其制剂的有关物质通过高效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法（HPLC）在药品理化的鉴定上应用比较广泛，其优势在于迅速、敏捷、分离效能相对较高等，应用高效液相色谱法鉴定时，将待检测成分予以分离后，通过紫外检测器或色谱检测器对其进行结构及定量等相关方面分析，根据检测结果对待检药物质量做出合理评价[1-2]。

与原药品标准方法的比较，原标准肌醇烟酸脂收录了杂志检查，其方法是薄层色谱法；其制剂没有杂志检查项，本研究通过对制剂杂质检查能够更好的控制制剂质量。本研究应用HPLC法测定肌醇烟酸脂中的有关物质。通过对精密度回收率的考察说明，本实验提出的方法简便、灵敏、准确，适用于肌醇烟酸脂及其制剂的质量控制。采用本法后排出了溶剂的干扰，由色谱图明显看出灵敏度相对于薄层色谱法显著提高。

[1]卫生部.药品标准化学药品及制剂（第1册）[M].北京：人民卫生出版社，1989：44.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：5.

[3]李文治，杨连生，黄强.反相高效液相色谱法检测肌醇烟酸酯片[J].药物分析杂志，2003，23（5）：376-378.

[4]何昔远.浅谈高效液相色谱法在假劣中药检验中的应用[J].中外健康文摘，2011，8（18）：45.

[5]李凤兰，曾卫华.脂必妥与烟酸肌醇酯治疗高脂血症的比较[J].农垦医学，2002，24（3）：198.