胶体金免疫层析技术在水产品快速检测中的应用

杜红梅

（常德市畜牧兽医水产局，湖南 常德 415000）

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，是由Faulk和Taytor发明的一种免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用，现已应用到电镜、光镜、凝集试验、体外诊断、斑点渗滤及免疫层析等方面。胶体金免疫层析技术以其独特的优势，成为现今快速、灵敏、方便的免疫学检测技术之一，并开始逐渐应用于水产养殖业的多个领域。

1 胶体金免疫层析技术概述

1.1 基本原理

氯金酸在还原剂如鞣酸、枸橼酸钠、白磷、抗坏血酸等作用下，会聚合成一定大小的金颗粒，并在静电作用下形成稳定的胶体溶液。该胶体溶液疏水，带负电，被称为胶体金。胶体金粒子对蛋白质有很强的吸附功能，在弱碱环境下可与蛋白质分子的正电荷基团牢固结合。牛血清白蛋白多肽缀合物、葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、抗生素、激素、毒素、酶等都能与胶体金进行非共价结合，因而是基础研究和临床试验中非常有用的工具。胶体金的物理性状与结合物的免疫学和生物学特性，使其广泛应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

胶体金免疫层析技术是胶体金标记技术结合抗原抗体反应的一种应用形式。先将特异性的抗原或抗体呈条带状固定在试纸膜上；然后将胶体金标记试剂（通常是一些抗体或单克隆抗体）吸附在试纸膜的结合垫上；当待检样本添加到试纸膜一端的样本垫之后，样本在毛细作用下向前移动，先与结合垫上的胶体金标记试剂相互结合，再带动待检样本与金标试剂的结合物移动至特异性的抗原或抗体区域，结合物与抗原或抗体发生特异结合而被截留在固定的位置，显示在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。

1.2 特 点

与其他标记技术相比，胶体金免疫层析技术有以下特点：易制备，成本低；可同时检测多种物质；对组织细胞的非特异性吸附作用小，具有高度特异性和高敏感性；不仅可用于光镜，也可用于透射电镜和扫描电镜；检测结果直接用颜色显示，肉眼判断直观可靠；操作简单，耗时少。胶体金免疫层析技术实现了检测技术的“快速、简便、特异、敏感”，因此广泛应用到生物学的各个领域。

1.3 分 类

1.3.1 双抗体夹心法 主要用于检测生物大分子及颗粒性抗原（蛋白质、病毒、细菌等）。大分子抗原一般有多个抗原结合位点，可同时检测多种抗体，一般采取单抗和多抗配对或单抗和单抗配对的形式进行检测。

1.3.2 双抗原夹心法 其特别之处在于：（1）被包被和标记的均为抗原，检测时样品首先与被标记的抗原结合，再与被包被的抗原结合；（2）检测的是总抗体，即IgG、IgM、IgA等特异性抗体均可作为搭桥抗体而产生阳性结果；（3）同一种检测试剂检测不同种属的抗体，既可检测人血清抗体，亦可检测动物血清抗体，对人兽共患病的检测非常方便；（4）特异性和敏感度易于控制，检测精确度高。

1.3.3 捕获法 主要用于感染人体后病原微生物产生的特异性抗体的检测，因为这些病原微生物主要寄生于细胞内，难于直接检测其特异性抗原，例如艾滋病毒、风疹病毒、乙脑病毒、丙肝病毒、麻疹等。对于标本较难采集的病原体，也可采用此方法检测。

1.3.4 竞争抑制法 主要用于小分子物质的检测，因小分子通常只有一个抗原结合位点，不能同时结合两个抗体，所以不能采用双抗体夹心法检测。目前对体液中小分子肽、农药残留、滥用药物的检测等均采用此方法。

2 胶体金免疫层析技术在水产品检测中的应用

我国是一个水产品生产和消费大国。目前，我国水产品质量虽然已有了明显的提高，但随着经济的发展和人口的增长，水产品赖以生存的土壤、水质等遭受不同程度的污染，导致水产品受到危害，影响其质量。另外在水产养殖业生产及加工的过程中，鱼药、饲料及添加剂，特别是明令禁止药物的违规使用，再加上国内水产品质量标准体系建设的滞后，致使水产品质量安全存在着严重的问题。因此，运用现代化检测手段，加强水产养殖业的质量监督，具有非常重要的现实意义。

近年来，随着免疫学、分子生物学和仪器自动化的飞速发展，各种检测的新技术、新方法不断涌现，如高效液相色谱法、气相色谱法、液质联用等色谱分析法；酶联免疫吸附法、免疫磁珠技术等免疫学检测技术；聚合酶链式反应、荧光定量聚合酶链式反应等分子生物学检测技术等。但是，这些检测方法成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的局限性。因此，“快速、简便、特异、敏感”的胶体金免疫层析技术便成为研究的热点。

应用胶体金免疫层析技术检测水产品中的霍乱弧菌已有报道。另外，采用胶体金免疫层析技术对水产品中的四环素类、磺胺甲噁唑、氯霉素、孔雀石绿等药物残留的检测研究表明，该方法操作简单，结果判定不需要仪器，成本较低，可用于基层单位的初筛定性检测。

3 胶体金免疫层析技术的发展趋势

由于胶体金免疫层析技术是基于抗原抗体特异性反应进行的检测，所以在检测实际样本时，由于待检样品种类繁多，成分复杂，容易影响抗原抗体反应以及胶体金颗粒与蛋白的吸附，造成假阳性结果。因此，要针对这个不足之处继续研究胶体金免疫层析技术在水产品检测中的应用，以提高检测的灵敏度，提高质量，实现检测的半定量和定量化。

综上所述，胶体金免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术，将会逐步完善与发展，在水产品的快速检测中具有很好的应用前景。

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