得力生注射液对盐酸多柔比星药动学的影响研究Δ

冯碧敏，叶 云，陈丽娟（泸州医学院附属医院药剂科，泸州市 646000）

盐酸多柔比星（Doxorubicin，DOX）是目前临床常用的抗肿瘤药物，临床上用于白血病、淋巴瘤等的治疗，效果显著，但有骨髓抑制、心脏毒性等不良反应。得力生注射液是斑蝥、蟾酥、人参、黄芪的全成分提取液，是我国第一个获得国家二类新药证书的复方抗癌中药注射剂，具有明显抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化的效应，并具有止痛和提高免疫功能的作用；与抗肿瘤药物联用时，能够保护骨髓细胞免受化疗药物损伤[1]。本文旨在研究盐酸多柔比星与得力生注射液联合用药后对大鼠的药动学影响，为进一步减轻盐酸多柔比星心脏毒性、骨髓毒性及促进其合理用药提供参考和数据支持。

1 仪器与材料

1.1 仪器

DIONEX Ultimate3000型高效液相色谱仪（美国戴安公司）；Kromasystem2000色谱工作站（Bio.Tek Instrument Snl）；TGL16型台式高速冷冻离心机（长沙英泰仪器公司）；AE240电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；YKH-Ⅲ型液体快速混合器（江西医疗器械厂）；pHS-3C型酸度计（成都方舟科技开发公司）。

1.2 试药

盐酸多柔比星注射液（浙江海正药业股份有限公司，批号：091001，规格：10 mg/支）；得力生注射液（北京正邦制药有限公司，批号：080207，规格：10 mL/支）；盐酸多柔比星对照品（批号：130509-200301）、柔红霉素对照品（批号：130559-200501）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇（色谱纯，批号：10071753）、乙腈（色谱纯，批号：10071743）均购自Honeywell Burdick Jackson；水为重蒸馏水，其余试剂均为国产分析纯。

1.3 动物

SD大鼠16只，♀♂兼半，体重（200±20）g，由泸州医学院实验动物中心提供（动物生产许可证号：SCXK（川）2008-17号）。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢铵溶液（pH4.65）-冰醋酸（30∶20∶0.1），经超声清洗器脱气30 min；流速：1.0 mL·min-1；柱温：35 ℃；进样量：20 μL；紫外检测波长：254 nm；进样量：20 µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 盐酸多柔比星对照品溶液的制备 精密称取盐酸多柔比星对照品8.46 mg（97.4%），置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得329.6 mg·L-1的盐酸多柔比星对照品贮备液，并将其稀释配成盐酸多柔比星浓度为0.206、0.515、1.03、2.06、6.87、10.3、20.6 mg·L-1的系列溶液。4 ℃贮藏，备用。

2.2.2 柔红霉素内标溶液（IS）的制备 精密称取柔红霉素对照品2.53 mg（91%），置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得92.1 mg·L-1的柔红霉素对照品内标贮备液，并稀释为3.68 mg·L-1浓度的内标液。4℃贮藏，备用。

2.3 血清样品的处理

精密量取血清样品100 μL，置于10 mL试管内，加入甲醇100 μL、3.68 mg·L-1IS 100 μL、乙酸乙酯1.0 mL，涡旋混合 5 min，5 000 r·min-1离心10 min，移取有机层于尖底离心管中，置30℃水浴中用空气流挥干，残渣用50 μL甲醇溶解，涡旋2 min，取上清液20 μL进样。

2.4 给药方法和样本采集

2.4.1 分组和给药 将SD大鼠随机均分为2组，即Ⅰ组（盐酸多柔比星注射液单用组，单用组）、Ⅱ组（盐酸多柔比星与得力生注射液联合用药组，联用组）。根据临床用药剂量反推大鼠剂量，Ⅰ组：给予盐酸多柔比星注射液6 mg·kg-1；Ⅱ组：给予得力生注射液6.0 mL·kg-1，0.5 h后给予盐酸多柔比星6 mg·kg-1，iv给药。

2.4.2 血清样品采集 于iv盐酸多柔比星后0.083、0.167、0.5、1、3、6、12、24 h时间点采血0.2 mL。取血后血样静置30 min，3 000 r·min-1离心15 min，分取血清，于低温冰箱－20℃存放，待测血药浓度。按“2.3”项下方法操作，测定血药浓度。

2.5 统计学方法和药动学分析

测得的血液浓度-时间数据用中国药理学会编制的DAS（Drug And Statistics ver 2.1.1）药动学程序拟合，并计算主要的药动学参数；各药动学参数采用SPSS 14.0软件，用t检验进行统计学分析。

3 结果

3.1 HPLC的方法学验证

3.1.1 标准曲线的制备 在选定色谱条件下，盐酸多柔比星与内标峰峰形良好，分离完全，空白血清在盐酸多柔比星、内标柔红霉素的保留时间（分别为6.45、11.30 min）处无杂峰出现。血清HPLC见图1。

图1 血清HPLC图A.空白血清；B.空白血清＋盐酸多柔比星＋内标；C.血清样品；1.盐酸多柔比星；2.内标（柔红霉素）Fig1 HPLC chromatograms of serumA.blank serum；B.blank serum+doxorubicin hydrochloride+internal standard；C.serum sample；1.doxorubicin hydrochloride；2.internal standard（daunorubicin）

以测定的样品峰高与内标峰高的比值（Y）为纵坐标，盐酸多柔比星浓度（X）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y＝0.342 9X+0.268 5（r＝0.998 0）。结果表明，盐酸多柔比星检测浓度在0.206～20.600 mg·L-1范围内同样品峰高与内标峰高的比值线性关系良好。

3.1.2 加样回收率试验 于空白大鼠血清中分别加入高、中、低浓度的盐酸多柔比星对照品溶液，照“2.3”项下方法操作，3种浓度平行操作5次，测定，以测得量与加入量之比计算空白加样回收率，结果见表1。

3.1.3 精密度试验 于空白大鼠血清中，分别加入低、中、高浓度的盐酸多柔比星对照品溶液，照“2.3”项下方法操作，每种浓度样品平行配制5份，在1 d内不同时间点测定，进行日内精密度考察；在1周内不同日期测定，进行日间精密度考察，结果见表1。

表1 回收率和精密度试验结果（±s，n＝5）Tab1 Results of recovery and precision test（±s，n＝5）

表1 回收率和精密度试验结果（±s，n＝5）Tab1 Results of recovery and precision test（±s，n＝5）

理论值/mg·L-1测得值/mg·L-1 x 0.486±0.021 5.210±0.113 10.570±0.379/%RSD/%4.41 2.16 3.59回收率/%94.4 101.2 102.6日间精密度测得值/mg·L-1 0.524±0.024 5.204±0.141 10.076±0.2220.515 5.150 10.300 99.4 RSD/%4.55 2.81 2.20日内精密度测得值/mg·L-1 0.493±0.027 5.132±0.174 10.162±0.336 RSD/%5.40 3.40 3.31

3.2 药动学研究

单用、合用盐酸多柔比星药动学参数见表2；盐酸多柔比星单用与合用平均药-时曲线见图2。

表2 单用、合用盐酸多柔比星药动学参数（±s，n＝5）Tab2 Pharmacokinetic parameters of doxorubicin hydrochloride alone or combined with other drug（±s，n＝5）

表2 单用、合用盐酸多柔比星药动学参数（±s，n＝5）Tab2 Pharmacokinetic parameters of doxorubicin hydrochloride alone or combined with other drug（±s，n＝5）

参数 单位t1/2α t1/2β h h Vl C L AUC（0-t）AUC（0-∞）Cmax L·kg-1 L·kg·h-1 mg·h·L-1 mg·h·L-1 mg·L-1单用组0.258±0.029 30.213±5.259 0.346±0.032 0.082±0.027 37.684±3.872 81.867±29.656 15.360±1.503联用组0.266±0.003 35.243±2.590 0.573±0.084 0.143±0.044 23.252±3.651 46.791±18.063 9.593±1.495

图2 盐酸多柔比星单用与合用的平均药-时曲线A.单用组；B.联用组Fig2 Serum concentration-time curves of doxorubicin hydrochloride alone and combined with other drugsA.Stilamin group；B.Coupled group

4 讨论

文献[2，3]采用HPLC法检测盐酸多柔比星血药浓度。由于盐酸多柔比星与抗凝剂会发生反应从而会影响其浓度的测定，故笔者在本研究中采用了血清样本。在血清预处理时选择乙醚、乙酸乙酯和三氯甲烷作为提取溶剂进行比较，结果三氯甲烷的提取回收率较高，但毒性较大，且易乳化；乙醚挥发性较大，容易受温度影响，故最后选择乙酸乙酯作为提取溶剂，回收率较令人满意，测定结果稳定可靠，且灵敏度可以达到要求。

目前有关盐酸多柔比星的临床药动学和药效学的研究多以单一药物为主[4～7]，而与其他药物尤其是中药联合应用的药动学研究国内鲜有报道。笔者首次将得力生注射液与盐酸多柔比星联合应用，研究中药对盐酸多柔比星药动学参数的影响，由药动学数据推测：得力生注射液与盐酸多柔比星联合应用时，盐酸多柔比星的AUC降低了35.08%，最大达峰时间（Cmax）降低了37.8%，消除半衰期（t1/2β）延长了16.6%，差异均有统计学意义（P＜0.05）。表明得力生注射液可影响盐酸多柔比星的吸收参数。笔者认为可能是药物促进了血液循环，使表观分布容积变大，盐酸多柔比星较多地向组织转运，使得血药浓度变低、AUC变小、t1/2β延长，同时也可能减少了药物的毒副作用。

目前，在肿瘤治疗过程中，中西药物联用的情况越来越普遍，它具有增强患者体质，提高患者对手术、放疗、化疗等的耐受力，减轻各种治疗的毒副反应，提高生存质量，延长生存期，预防肿瘤复发等作用，成为肿瘤综合治疗的重要而独特的手段之一。因此，研究联合用药时，药动学参数的变化可以考虑是传统用药可能引起的毒性反应以及联合用药时产生的药物相互作用，这对于调整临床用药方案、提高治疗效果、减少不良反应、实现个体化用药具有极其重要的意义。

[1]陈信义，雒 琳.得力生注射液组方科学依据与临床应用前景分析[J].现代肿瘤医学，2006，14（3）：378.

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