恩施自治州不同产地鱼腥草中总黄酮含量测定

李华强，徐外兰，柯 威，文德鉴

1.湖北民族学院医学院(湖北恩施445000)

2.湖北民族学院科技学院(湖北 恩施445000)

鱼腥草中黄酮类化合物为其主要活性成分之一，具有抗病毒、降血脂、抗炎、抗氧化、抗过敏等作用［1，2］。目前针对恩施鱼腥草总黄酮的研究大多是提取工艺的比较及改进，对其成分的地域性区别深入研究较少，本实验采用紫外分光光度法测定恩施不同产地鱼腥草中的总黄酮含量，为恩施自治州鱼腥草药材的种植与开发利用提供依据。

1 材料与仪器

1.1 药材与试剂 鱼腥草分别为2010年10月采自恩施、利川、巴东、来凤、宣恩、建始、鹤峰、咸丰8县(市)。经湖北民族学院医学院文德鉴副教授鉴定为三白草科植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb)的全草;芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号100080－200707)，其它试剂均为分析纯。

1.2 仪器 Tu－1901双光束紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);BS224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 取120℃干燥至恒重的芦丁对照品50 mg，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10 ml置于100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1 ml含芦丁0.2 mg)。

2.2 最大吸收波长的测定 取对照品溶液适量，置25 ml量瓶中，加水至6 ml，再加5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置 15 min，加 10% 硝酸铝溶液 1 ml，摇匀，放置15 min，照紫外－可见分光光度法(2010版《中国药典》附录VA)，在400～600 nm波长段进行扫描，测得在500 nm处有最大吸收值，与文献［4］报道的510 nm有一定差异。

2.3 标准曲线的制备 量取对照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 ml，分别置 25 ml量瓶中，按“2.2”项下制备，以相关试剂溶液为空白，在500 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:y=0.0011x－0.0003，R2=0.9997。结果见表1。

表1 不同浓度芦丁对照品的吸光度值

2.4 供试品溶液的制备 分别取恩施自治州8个县(市)的药材粗粉1 g(各5份)，精密称定，置索式提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。加甲醇90 ml，加热回流至提取液无色，转移至100 ml量瓶中，用少量甲醇洗涤容器，洗液转移至量瓶中，继续加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10 ml置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液，备用。

2.5 精密度试验 用移液管移取供试品溶液2 ml于25 ml量瓶中，精密量取，以相关试剂溶液为空白对照，按2.2项下自“加水至6 ml”起分别依法测定吸光度。重复5次，经计算，相对标准偏差RSD=1.14%。

2.6 稳定性试验 用移液管移取供试品溶液2 ml于25 ml量瓶中，精密量取，以相关试剂溶液为空白对照，按2.2项下自“加水至6 ml”起分别依法测定吸光度。经计算，在30 min内的相对标准偏差RSD=2.24%，在35 min内的相对标准偏差RSD=3.30%，故在30min内测定总黄酮的含量是稳定的。

2.7 重复性试验 对采自恩施市的药材按照供试品溶液的制备方法依法制备5份，分别供试品溶液2 ml于25 ml量瓶中，以相关试剂溶液为空白对照，按2.2项下自“加水至6 ml”起分别依法测定吸光度。经计算，5份的相对标准偏差RSD=2.16%。

2.8 回收率试验 取采自恩施市的药材(已知含量为46.00%)5份，每份1 g，精密称定，分别添加8 mg精密称定的芦丁对照品。按供试品溶液的制备方法制备。分别精密量取2 ml置25 ml量瓶中，以相关试剂溶液为空白对照，按2.2项下自“加水至6 ml”起分别依法测定吸光度。得平均加样回收率为102.4%，相对标准偏差 RSD=1.47%。

2.9 含量测定 分别精密量取2.4项下供试品溶液2 ml，以相关试剂溶液为空白对照，按2.2项下自“加水至6 ml”起分别依法测定吸光度。平行测量5次，计算总黄酮含量。结果见表2。

表2 恩施地区不同产地鱼腥草中总黄酮的含量(n=5)

3 结论

恩施自治州产鱼腥草中总黄酮含量相对四川雅安(GAP基地)较高［3］，可能与本地区独特的土壤、气候等条件有关，为恩施自治州发展鱼腥草的规模化种植提供了依据。本次测定结果也表明恩施自治州不同产地鱼腥草总黄酮含量也存在较大差异，从分布特征看，以恩施市为中心，包括相距较近的周边县市(如宣恩县、建始县、利川市)含量较高，这为种植区域的选择指明了方向。鱼腥草作为药材市场需求量巨大，而且在恩施自治州有将鱼腥草的鲜嫩根茎经过凉拌后直接食用的习俗，这为恩施自治州发展鱼腥草产业提供了非常广阔的市场开发和应用前景。

［1］龚乃超，干信.鱼腥草黄酮类化合物的研究进展［J］.微量元素与健康研究，2008，25(3):61－64.

［2］邱江匀，杨亚玲，杨国荣，等.鱼腥草总黄酮提取及其抗过敏活性的研究［J］.云南大学学报(自然科学版)，20005，27(3):239－244.

［3］宗晓萍，董小萍.鱼腥草中总黄酮的含量测定研究［J］.陕西中医学院学报，2008，31(3):61－62.