磷酸二酯酶选择性抑制剂吡拉米司特抗炎作用的实验研究

许 格，李 军

(四川省广元市第二人民医院药剂科，四川 广元 628017)

磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDF4)抑制剂通过调节细胞内第二信使cAMP及cGMP的水平，对细胞活动起重要调控作用，从而发挥多种生物效应［1］。近年来，选择性PDF抑制剂的潜在价值被重新认识，而具有抗炎和平滑肌舒张活性的磷酸二酯酶Ⅳ(PDF4)抑制剂的治疗用途同样得到学者的重视［2］。本研究采用角叉菜胶诱导小鼠腹腔中性粒细胞聚集及小鼠足趾肿胀模型，观察腹腔灌洗液白细胞总数、中性粒细胞数量，以及足趾肿胀程度，为新一类抗炎免疫调节药物治疗炎症性疾病和哮喘提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 健康ICR小鼠50只，雄性，体重(20±5)g;角叉菜胶(辽宁省约物研究所提供)溶于生理盐水中，配置成10 g/L的溶液，超声2 h;吡拉米司特(相对分子质量381.26，北京昭衍中心，批号:20010411)悬液加入10 g/L羟丙基甲基纤维素溶液中，配成所需悬液;吲哚美辛(SIGMA公司，批号:065K1378)加人10 g/L羟丙基甲基纤维素溶液中，配成所需悬液;羟丙基甲基纤维素(HPMC);肝素(华美生物工程公司，批号:0470);C011型928560光学显微镜(日本OLYmpus公司);Eppendorf高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司);灌洗液:配置含5 IU/L肝素的生理盐水，临用前配置。

1.2 分组与模型的建立 50只小鼠随机分为6组，分别为正常组、模型组、吡拉米司特低、中、高3个剂量组和吲哚美辛组。

1.2.1 小鼠腹腔炎模型 除正常组外，另5组均灌胃给药PDF4(剂量0.2 ml/10 g)，均用角叉菜胶2 mg/kg每只0.5 ml腹腔注射致炎。致炎8 h后用相同剂量再灌胃给PDF4一次。模型组以10 g/L羟丙基甲基纤维素悬液灌胃，吡拉米司特低、中、高3个剂量组分别以吡拉米司特1、3、10 mg/kg悬液灌胃;吲哚美辛组以吲哚美辛悬液2 mg/k灌胃。

1.2.2 小鼠足趾肿胀模型 除正常组外，其余5组均灌胃给药PDF4(剂量0.2 ml/10 g)，均用1%角叉菜胶于右侧足趾皮下注射，每个足趾0.05 ml;生理盐水于左侧足趾皮下注射，每个足趾0.05 ml。于足趾致炎4h后采用颈椎脱臼法处死小鼠，并于膝关节中缝处分别剪下左右足趾，分别称重，比较取其差值(mg)。

1.3 数据观测 ①腹腔致炎24 h后采用颈椎脱位法处死小鼠。每只小鼠腹腔注射灌洗液5 ml，轻揉片刻后吸出腹腔灌洗液。将腹腔灌洗液低温2000 r.min－1离心10 min后，弃去上清液，用移液器打匀后涂片。待涂片在室温下干后，Wright-Giemsa染色10 min。用自来水小心将染料冲洗干净，在光学显微镜40倍镜下进行白细胞分类计数。②足趾肿胀模型组于足趾致炎4 h后采用颈椎脱位处死小鼠并于膝关节中缝处分别剪下左右足趾，分别称重，比较其差值(mg)。

1.4 统计学方法 数据资料以均数±标准差表示，采用SPSS 12.0统计软件处理，t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 吡拉米司特对角叉菜胶诱导小鼠腹腔炎的影响 表1显示，角叉菜胶致炎的模型组与正常组比较，腹腔灌洗液白细胞总数明显升高(P＜0.01)，中性粒细胞数明显上升(P＜0.01)吡拉米司特3及10 mg/kg剂量、吲哚美辛2 mg/kg可明显减少白细胞总数(P＜0.05)和中性粒细胞数(P＜0.01)，但吡拉米司特1 mg/kg剂量组与模型组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。吡拉米司特呈剂量依赖性抑制中性粒细胞数。

表1 吡拉米司特对角叉菜胶诱导小鼠腹腔炎的抑制作用和对角叉菜胶致炎小鼠足趾肿胀的影响

2.2 吡拉米司特对角叉菜胶诱导小鼠足趾肿胀的影响 模型组足趾肿胀程度明显增高，与正常组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。吡拉米司特3和10 mg/kg剂量、吲哚美辛组足趾肿胀程度明显减轻，与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05);吡拉米司特l mg/kg剂量组虽然足趾肿胀程度有所降低，但差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

本实验用角叉菜胶小鼠腹腔注射来建立腹腔炎模型，具有制备方便、模型成熟时间短(白细胞总数和中性粒细胞数量均在24 h后达到高峰)等特点，其主要特点是中性粒细胞数量明显增高(本次实验中中性粒细胞达到了70%的比例)，通过检测中性粒细胞的数量可以有效地评价急性炎症的程度。用角叉菜胶制备足趾肿胀模型是一种常用且较为理想的炎症模型，其肿胀程度在制备4h后最为明显，并且检测方便。为避免因个体差异引起的误差，通过比较足趾肿胀的程度来验证和分析吡拉米司特药效学作用。

孙超渊等［3］报道，吡拉米司特在多种动物模型上能抑制白细胞的数量。本实验证明了吡拉米司特对角叉菜胶诱导的腹腔炎模型，能有效地抑制中性粒细胞的募集，并且对由角叉菜胶诱导的足趾肿胀模型有明显的抑制和治疗作用，证实PDF4抑制剂具有明显抗炎、抗过敏、抗血小板活化作用。有人认为PDF4抑制剂的抗炎仵用仅次于肾上腺皮质激素［4，5］。本实验结果显示，吡拉米司特可以明显呈剂量依赖性降低致炎小鼠的白细胞总数及中性粒细胞数量和比例，可以明显降低致炎小鼠的足趾肿胀程度。因此，吡拉米司特能抑制白细胞的激活与游走和中性粒细胞的募集，对炎症反应有较好的抑制和治疗作用;对角叉菜胶制备的足趾肿胀模型也有较好的抑制作用，具有开发价值。

［1］ Richard FJ.Regulation of meiotic maturation［J］.J Anim Sci，2007，85(13 Suppl):E4-6.

［2］祁红，张勇，陈红专.新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制剂Ariflo对内皮素－1诱发离体人子宫平滑肌收缩的影响［J］.中国临床药理学与治疗学，2004，9(3):299-301.

［3］孙超渊，张莉，程克棣，等.磷酸二酯酶4研究进展［J］.中国药理学通报，.2006，22(10):1161-1166.

［4］Palmer MJ，Bell AS，Fox DN，et al.Design of second generation phosphodiesterase5inhibitors［J］.Curr Top Med Chem，2007，7(4):405-419.

［5］Omori K，Kotera J.Overview of PDEs and their regulation［J］.Circ Res.2007，100(3):309-327.