海马龙蛇丸质量标准研究

陈云松

（丹东市中心医院，辽宁丹东 118002）

海马龙蛇丸由马钱子（炙）、全蝎、僵蚕、麻黄、土鳖虫、地龙、穿山甲（炙）、三七、甘草、鸡血藤、木瓜等中药组成，具有祛风除湿，舒筋活络，活血化瘀，消肿定痛之功效，临床用于类风湿性关节炎、风湿性关节炎的治疗。为控制其药品质量，对该处方中的僵蚕、土鳖虫、穿山甲、甘草、鸡血藤、木瓜进行了显微鉴别，对麻黄、三七进行了薄层鉴别以及士的宁的限量检查[1-2]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BH-2电子显微镜（日本Olympus公司）；ZF-1紫外荧光记录分析仪（北京先驱威锋技术开发公司）。

1.2 试药

薄层硅胶G、薄层硅胶GF254（青岛海洋化工厂)；试剂均为分析纯；样品由丹东市康华医院提供；对照品由中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 性状

本品为棕黑色大蜜丸，味苦、气微腥。

2.2 显微鉴别

取本品，置显微镜下观察：体壁碎片棕黄色、绿黄色或黄绿色，有光泽，外表皮表面观呈多角形网格样纹理，表面密布细小颗粒。体壁碎片黄色或棕红色，有圆形毛窝，直径8～24 μm，有的具长短不一的刚毛。菌丝体存在于体壁或淡棕色半透明结晶块中，菌丝近无色、细长、直径1～5 μm，相互盘缠交织。无定形碎块近无色、淡黄色或黄色，大多有大小不一的类圆形、椭圆形或不规则形空洞，碎块边缘凹凸不平或有凹陷。纤维束浅黄色，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。纤维束红棕色、黄棕色、棕色或近无色，周围的细胞中含有草酸钙方晶，形成晶纤维。石细胞多成群，类圆形或类方形层纹明显，孔沟细[3]。

2.3 三七的薄层鉴别

2.3.1 供试品溶液制备 取本品9 g，切碎，加硅藻土3 g，研匀，加乙醚40 ml，超声处理10 min，弃去乙醚液，药渣挥尽乙醚后，加甲醇40 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水25 ml，微热使溶解，加水饱和的正丁醇25 ml振摇提取，取正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25 ml，正丁醇液浓缩至干后加入1 ml甲醇使其溶解，作为供试品溶液。

2.3.2 对照品溶液制备 取三七皂苷R1对照品及人参皂苷Rb1、Rg1对照品，分别加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3.3 空白对照液制备 除去三七药材以外的各味药材适量，按照成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制成空白对照液。

2.3.4 方法 照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，取上述五种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以硫酸乙醇溶液（1→10），立即于110～120℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图1。

2.4 麻黄的薄层鉴别

2.4.1 供试品溶液制备 取本品9 g，切碎加硅藻土3 g，研匀，加浓氨试液5 ml与乙醚40 ml，加热回流1 h，滤过、滤液加盐酸乙醇溶液（1→20）1 ml，摇匀，蒸干，残渣加甲醇 1 ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。

图1 三七TLC图谱（1～2.三七供试品溶液；3.空白对照液；4.人参皂苷 Rb1；5.人参皂苷 Rg1）Fig.1 TLC chromatogram of Panax notoginseng(1-2.Sample of Panax notoginseng;3.Reference substance;4.Ginsenoside Rb1;5.Ginsen oside Rg1)

2.4.2 对照品溶液制备 取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4.3 空白对照液制备 除去麻黄药材以外的各味药材适量，按照成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制成空白对照液[4]。

2.4.4 方法 照薄层色谱法（《中国药典》2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-乙醚-浓氨试液（10∶2∶1∶0.2）为展开剂，置用展开剂饱和10 min的层析缸内，展开，取出，晾干。在105℃加热10 min，喷以茚三酮试液，再置105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

图2 麻黄TLC图谱（1～2.麻黄供试品溶液；3.空白对照液；4.盐酸麻黄碱对照品）Fig.2 TLC chromatogram of Ephedrine(1-2.Sample of Ephedrine;3.Blanck reference substance;4.Reference substance of Ephedrine hydrochloride)

2.5 士的宁的限量检查

2.5.1 供试品溶液制备 取本品1丸，切碎，加硅藻土3 g，研匀，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液5 ml使浸润，精密加入氯仿40 ml，轻轻摇匀，称重，于室温放置24 h，再称重，补足氯仿减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取续滤液20 ml，用硫酸溶液（3→100）分次提取 5次，每次20 ml，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液调pH值8～9，用氯仿分次提取5次，每次20 ml，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣加氯仿使溶解，定量转移至5 ml量瓶内，并稀释至刻度、摇匀，作为供试品溶液[5]。

2.5.2 对照品溶液制备 取士的宁对照品，加氯仿制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.5.3 空白对照液制备 除去马钱子（炙）药材以外的各味药材适量，按照成药生产工艺制成空白对照，同“供试品溶液的制备”项下操作，制成空白对照液。

2.5.4 方法 照薄层色谱法（《中国药典》2000年版一部附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液、空白对照液各 4 μl，对照品溶液 2 μl，分别点于同一硅胶GF-254薄层板上，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（16∶12∶1∶4）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（254 nm）下检识。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，样品的斑点颜色不得深于对照品的斑点颜色[6]。

3 讨论

有关海马龙蛇丸含量测定研究较少，本文主要以麻黄、三七及士的宁的限量检查为含量检测指标。本实验表明，在薄层板上应用《中国药典》2005年版条件分离，测定其有效成分和含量，说明本法可为海马龙蛇丸制剂提供质量控制的有效手段[7]。

本研究中的鉴别方法显微特征明显，所用的薄层色谱法鉴别性强且重复性良好，该方法简单易行，因为海马龙蛇丸组方中有马钱子（炙），所以应用了士的宁的限量检查[8]。本研究结果表明，薄层色谱斑点清晰，重复性好，阴性对照无干扰。本品处方组成合理，制备简单，质量控制方法简单易行，该实验对海马龙蛇丸的质量控制有较好效果。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:附录31.

[2]王宝琹.中成药质量标准与标准物质[M].北京:中国医药科技出版社,1994:10.

[3]谢培山.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州:广东科技出版社,1993:58,39,119,127.

[4]王宝.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药科技出版社,1994:195,197,352,422.

[5]张国跃.痰饮丸质量标准研究[J].亚太传统医药,2009,5(5):12-14.

[6]金齐武,张青云,蒲婧哲.HPLC法测定龙胆泻肝丸(水丸)中栀子苷的含量[J].安徽医药,2008,12(7):604-605.

[7]孟祥松,陈雷,蒋磊.胆乐片质量标准的研究[J].安徽医药,2009,13(5):500-502.

[8]李东霖,孙平川,白和平.HPLC法测定肺宁丸中橙皮苷的含量[J].陕西中医,2002,23(10):994.