高效液相色谱法测定小檗碱甲氧苄啶胶囊中甲氧苄啶含量

陈江涛，辛俊衡

(广西壮族自治区梧州食品药品检验所，广西 梧州 543002)

小檗碱甲氧苄啶胶囊(曾用名为增效黄连素胶囊)是由盐酸小檗碱和甲氧苄啶组成的常用复方制剂，主要用于治疗肠炎、细菌性痢疾等疾病。在国家标准[1]中盐酸小檗碱的含量测定方法为高效液相色谱(HPLC)法，而甲氧苄啶的含量测定方法为萃取－紫外分光光度法，方法烦琐。为此，笔者采用高效液相色谱法测定该制剂中甲氧苄啶的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

安捷伦1200型高效液相色谱仪，包括G1311A型四元溶剂洗脱系统，G1329A型全自动进样器，G1314B型紫外检测器，Chemstation色谱工作站;岛津UV－2450型紫外－可见分光光度计;sartorius BP211D型电子天平(d=0.01 mg，80 g)。甲氧苄啶对照品(中国药品生物制品检定所，批号为200304);盐酸小檗碱原料、药用淀粉和小檗碱甲氧苄啶胶囊(批号分别为080311，080317，080321，每粒含甲氧苄啶50 mg)，均由广西梧州三箭制药有限公司提供。甲醇为色谱纯;水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agelent C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(60 ∶40); 检测波长:265 nm;流速:1.0 mL/min;进样量:20 μL;柱温:30℃。

2.2 溶液制备

精密称取甲氧苄啶对照品50 mg，置200 mL量瓶中，加稀醋酸4 mL使溶解，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取贮备液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取胶囊10粒，精密称定内容物，研细，精密称取细粉(约相当于甲氧苄啶12.5 mg)，置50 mL容量瓶中，加稀醋酸1 mL振摇使溶解，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按处方比例称取盐酸小檗碱原料和药用淀粉，同法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

取2.2项下3种溶液，依法进样，按色谱条件分析，得空白对照溶液色谱。结果与对照品溶液色谱和供试品溶液色谱相比较，阴性对照品溶液不影响色谱分析。见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL，分别置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，按色谱条件进行分析。结果甲氧苄啶进样量在0.5～1.5μg范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为 Y=3373 X－52，r=0.9998。

加样回收试验:精密称取批号为080311的胶囊内容物(平均0.2017 g，含甲氧苄啶为标示量的97.7%)，约相当于甲氧苄啶5，6.25，7.5 mg各3份，分别置9个50 mL量瓶中，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，按拟订的色谱条件进行分析，以峰面积外标法计算含量。结果见表1。

表1 甲氧苄啶加样回收试验结果(%，n=9)

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样6次。结果甲氧苄啶峰面积的 RSD为0.8%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，8 h时进样。结果甲氧苄啶峰面积的 RSD为0.8%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

重复性试验:取批号为080311的样品6份，依法配制供试品溶液，以峰面积外标法测定甲氧苄啶的含量为98.3%，97.6%，97.3%，97.7% ，96.9%，96.9%，RSD 为 0.6%(n=6)。

2.4 样品含量测定

取样品 3批，依法制备供试品溶液，以峰面积外标法测定甲氧苄啶的含量。结果见表2。

3 讨论

甲氧苄啶对照品溶液在200～300 nm波长处扫描紫外图谱，结果甲氧苄啶在此范围内均有吸光度。本法选取265 nm作为检测波长。

有关小檗碱甲氧苄啶胶囊含量测定的文献比较多，测定各组分的方法有差示分光光度法[2]、双波长分光光度法[3－4]、一阶导数光谱法[5]、组合光谱法[6]、紫外分光光度法[7]、高效液相色谱法[8－9]等。庄惠清[8]采用C18柱、甲醇－醋酸铵溶液为流动相、检测波长为290 nm、外标法测定双组分，许波等[9]采用C18柱、0.1%十二烷基硫酸钠的甲醇－0.2 mol/mL酒石酸为流动相、检测波长为240 nm、内标法测定双组分。本法尝试单独测定小檗碱甲氧苄啶胶囊中甲氧苄啶的含量，作为本制剂含量测定法研究的补充。标准方法为萃取－照分光光度法，样品处理方法烦琐，容易产生由于样品损失而导致的误差。本法直接溶解样品，可避免这种误差的发生，与标准方法测定样品的结果相近。试验结果表明，本法适用于小檗碱甲氧苄啶胶囊中甲氧苄啶的含量测定。

表2 制剂含量测定结果(标示量%，n=3)

[1]WS－10001－(HD－1062)－2002.国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准(第十一册)[S].

[2]杜福轩.差示分光光度法测定增效黄连素胶囊及其片剂中TMP的含量 [J].西北药学杂志，1994，9(4):152－154.

[3]陈爱年，时卫东.双波长分光光度法测定增效黄连素胶囊的含量 [J].基层中药杂志，1998，12(2):31.

[4]黄金铭.双波长分光光度法测定增效黄连素胶囊中甲氧苄氨嘧啶和盐酸小檗碱的含量 [J].海峡药学，2005，17(2):61－63.

[5]尚秀敏，田 兰，郭 毅.一阶导数光谱法测定增效黄连素胶囊中甲氧苄氨嘧啶的含量 [J].河北医学院学报，1995，16(5):289－290.

[6]王 妹，周二燕.组合光谱法测定增效黄连素胶囊的含量 [J].丹东医药，2002(2):51－52.

[7]陈宁宁，解健博.紫外分光光度法同时测定增效黄连素胶囊中二组分含量 [J].沈阳药学院学报，1994，11(3):168－171.

[8]庄惠清.高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄氨嘧啶的含量 [J].海峡药学，2003，15(3):14－16.

[9]许 波，高良美.高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄啶的含量 [J].药物分析杂志，2001，21(1):21－23.