人巨细胞病毒活动性感染与习惯性流产的关系探讨

宁 琳，贾 卉

1.陕西省妇幼保健院妇科，陕西西安 710003；2.陕西省妇幼保健院医学实验中心，陕西西安 710003

习惯性流产（RSA）为自然流产连续3次以上者，每次流产往往发生在同一妊娠月份。RSA的原因大多与孕妇黄体功能不全、甲状腺功能低下、子宫发育异常、染色体异常、自身免疫等有关。人巨细胞病毒（HCMV）是宫内感染最常见的病原体之一，易导致流产、死产、新生儿畸形、智力低下等[1]。传统的HCMV-DNA检查不能很好的显示病毒的活动状态，本文笔者采用免疫荧光技术检测外周单个核细胞HCMVpp65抗原，探讨HCMV活动性感染与习惯性流产的关系，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2008年5月～2010年5月本院妇产科收治的反复性流产患者40例作为研究组，年龄25～37岁，平均（26.5±3.7）岁；全部孕妇均有不明原因3次及以上自然流产，平均流产（3.5±1.2）次；流产时间为妊娠1～3个月。选择同期体检正常孕妇50例作为对照组，年龄23～35岁，平均（25.7±3.2）岁，妊娠1～3个月。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

两组患者均采集外周静脉血5 ml，离心后分离血浆及外周血有核细胞，无菌PBS洗涤后计数细胞，制作外周血单个核细胞涂片（2×105/片）并固定。采用免疫荧光法（美国DAKO公司试剂盒）检测外周血单个核细胞HCMVpp65抗原，严格按说明书操作。荧光显微镜下观察每片HCMVpp65抗原阳性细胞数≥10个为阳性。采用HCMV-DNA荧光定量PCR试剂盒（中山大学达安基因诊断公司）以及全自动荧光定量PCR显示仪（美国Roche公司），检测外周血HCMV-DNA含量。HCMV-DNA拷贝数≥103/ml为阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，采用spearman相关性检验进行HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA拷贝数的相关性分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率比较

研究组外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率明显高于对照组，两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组HCMVpp65抗原阳性率比较（例）

2.2 研究组不同流产次数孕妇HCMVpp65抗原阳性率比较

研究组中流产次数多的孕妇，HCMVpp65抗原阳性率明显高于流产次数相对较少的孕妇，两组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。说明HCMVpp65抗原阳性率增高孕妇流产的危险性也升高。见表2。

表2 研究组不同流产次数孕妇HCMVpp65抗原阳性率比较（例）

2.3 研究组HCMVpp65抗原与HCMV-DNA检测的一致性

研究组中实时荧光定量PCR检测HCMV-DNA和免疫荧光法检测HCMVpp65抗原的一致性较好，达92.5%（37/40）。见表3。并且每份标本中HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA 拷贝数呈正相关（r=0.647，P<0.05）。

表3 研究组HCMVpp65抗原与HCMV-DNA检测结果比较[n（%）]

3 讨论

HCMV是人类疱疹病毒的一种，有典型的疱疹病毒结构，在人群中广泛传播。程丽平等[2]报道显示，我国成人HCMV感染率可达80%～97%，并且多为隐性感染。HCMV可由唾液、血液、尿液、乳液、精液、子宫分泌物等携带，通过口腔、生殖道、胎盘、出血等途径转移[3]。正常情况下患者无明显临床症状，当机体免疫功能下降时，病毒激活发生显性感染。妊娠期妇女免疫力下降，容易导致病毒激活[4-5]，尤其是妊娠早期，病毒通过胎盘进入胎儿体内，可引起胎儿神经系统、心血管系统等损害而发生流产。

传统的HCMV检测多采用HCMV-DNA及抗HCMV IgM抗体检测，但该方法不能很好地显示病毒的活动状态。近年来孕妇外周血单个核细胞HCMVpp65抗原检测逐渐成为检测HCMV活动性感染的标准[6]。本研究结果显示，HCMVpp65抗原检测与HCMV-DNA定量检测一致性达92.5%，且HCMVpp65抗原阳性细胞数与HCMV-DNA拷贝数呈正相关（r=0.64、P＜0.05），从而证实了 HCMVpp65 抗原检测在判断HCMV活动性感染中的有效性。本研究结果还显示，RSA孕妇外周血有核细胞HCMVpp65抗原阳性率明显高于正常孕妇，并且随着HCMVpp65抗原阳性率的升高，孕妇流产次数增加，提示HCMV活动性感染与孕妇RSA有密切关系。至于HCMV活动性感染导致孕妇流产的具体机制尚需进一步研究证实。

综上所述，HCMV活动性感染与孕妇RSA有密切关系，外周血有核细胞HCMVpp65抗原检测，对判断孕妇HCMV活动性感染，早期预防RSA有较高的应用价值。

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