大庆市不同产地防风中有效成分含量比较

于春月 ，张特立 ，白玉华，韩成花

1.哈尔滨医科大学大庆校区药学院，黑龙江大庆 163319；2.大庆市人民医院药剂科，黑龙江大庆 163316

防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata（Turcz.）Schischk.未抽花茎植株的干燥根，能解表祛风，胜湿止痉，用于感冒头痛、风湿痹痛、风疹瘙痒及破伤风等症[1]。防风中的化学成分包括色原酮、挥发油、香豆素、杂多糖等类物质，药理实验表明，其具有解热、镇痛、镇静、抗炎、抗过敏、抗惊厥和增强机体非特异性免疫功能的作用[2-3]。《中国药典》2010年版中以防风中的升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷为主要成分进行含量测定，近年来也有人根据实际需要建议测量其中的多种有效成分以完善防风药材的质量控制[4-5]。本文参考《中国药典》2010年版标准，对黑龙江省大庆市不同地区防风中升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量进行对比分析，旨在建立大庆地区的防风质量标准，为防风药材的质量评价及合理使用提供参考依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司），配有紫外检测器，色谱柱为 Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；Model C3860 超声仪（CBL Photoelectron Technology Co.Lid.）；ESJ万分之一电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）。

1.2 试药

升麻苷（批号：111522-201005）及5-O-甲基维斯阿米醇苷（批号：111523-201005）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇为分析纯，水为吉林产娃哈哈纯净水；防风所有样品经哈尔滨医科大学大庆校区药学系刘金杰教授鉴定，均为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata （Turcz.）Schischk.的根。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

流动相：甲醇-水（40∶60），流速：1 ml/min，检测波长：254 nm，进样量：10 μl。理论塔板数按升麻苷计算，不低于2000。按5-O-甲基维斯阿米醇苷计算，不低于2500。

2.2 对照品溶液的制备[6]

精密称取升麻苷对照品4.6 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度；精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品5.5 mg置于10 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取防风药材0.25 g精密称定，置于50 ml圆底烧瓶中，加入甲醇10 ml，称重，水浴回流2 h，甲醇补足失重，过0.45 μm 微孔滤膜，进样 10 μl。

按上述条件分别进样，得升麻苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、防风样品的HPLC色谱图。见图1。

2.4 标准曲线的绘制

分别准确量取升麻苷对照品和5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液各 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml置于同一 5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取10 μl进样，按上述色谱条件进行分析测定，以峰面积Y（mv）为纵坐标，对照品溶液浓度X（mg/ml）为横坐标，进行回归计算。结果得升麻苷的标准曲线为 Y=23659X-3276.6，r=0.9999 （n=6）， 线性范围为 18.4～92.0 μg/ml。5-O-甲基维斯阿米醇苷的标准曲线为 Y=21217X-8217.8，r=0.9998（n=6），线性范围为 22.0～110.0 μg/ml。表明两种成分在检测范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

分别精密量取升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷的对照品溶液各0.5 ml，置于同一5 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，取10 μl进样，重复进样6次，记录峰面积，计算RSD分别为0.87%和1.04%，RSD均小于3%，表明仪器精密度良好。

图1 防风对照品及样品HPLC色谱

2.6 重复性试验

精密称取同一产地的防风药材6份，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液并进行测定，得到相应的峰面积，计算RSD分别为2.67%和2.23%，RSD均小于3%，表明方法的重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，在上述色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、10、12 h测量，结果在 12 h内样品中的升麻苷及 5-O-甲基维斯阿米醇苷的峰面积RSD均小于3%，表明样品在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取6份已知含量的防风药材粉末0.25 g，分别加入对照品溶液适量，按“2.3”项下方法制备供试液并分析，结果显示，样品加样回收率在98.6%～104.3%，RSD小于3.0%。

2.9 样品含量测定

按“2.3”项下方法制备样品，每份样品测量3次，取平均值。见表1。

表1 防风含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 前期处理方法的考察

对比了回流提取法及超声提取法对于有效成分含量的影响，结果表明，回流提取法优于超声提取法，故选择前者作为提取方法。

3.2 色谱条件的建立

流动相的选择：对比了乙腈-水及甲醇-水对于色谱峰的影响，采用乙腈-水为流动相得到的色谱峰杂峰较多，很难实现分离；而采用经典的甲醇-水为流动相得到的色谱峰峰形简洁明了，主要成分分离度高，十分理想，故选用甲醇-水为流动相。

流速的选择：分别考察了0.8、1.0、1.2 ml/min流速下峰形的变化，以1.0 ml/min得到的色谱峰最为理想。

色谱柱的选择：综合考察了安捷伦色谱柱Eclipse XDBC18（4.6mm×150mm，5μm）及岛津色谱柱InertsilODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）的出峰率、分离度等情况，最终选择岛津色谱柱开展实验。

3.3 实验结果的分析

由表1含量测定结果可知，大庆市各个地区所产防风均符合《中国药典》2010年版标准（药典规定升麻苷及5-O-甲基维斯阿米醇苷总含量不得低于0.24%），其中，杜尔伯特及肇源地区所产防风中有效成分总含量偏高，可作为质量参考的依据。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2005:102.

[2]杨震,孙黎,王炜佳.防风成分的药理活性研究进展[J].黑龙江医药,2005,18(1):36-37.

[3]王成章,张崇禧.防风国内外研究进展[J].人参研究,2008,15(1):35.

[4]曾丽君,孙启时,贾凌云.RP-HPLC法同时测定不同产地及不同部位防风中4种有效成分的含量[J].沈阳药科大学学报,2009,26(2):127-130.

[5]马力杰,杨滨,冯学峰,等.野生与栽培防风中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量测定及指纹图谱分析[J].中国中药杂志,2010,35(13):1731-1734.

[6]李悦悦,王慧,陈俊,等.HPLC法测定防风中升麻苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷和亥茅酚苷的含量[J].药学实践杂志,2010,28(6):445-447.