云南红药对功能失调性子宫出血模型大鼠血浆血栓烷A2和前列环素含量的影响

吕小波，黄春球，杨东加，邓 林

(云南植物药业有限公司研发中心，云南 昆明 650109)

功能失调性子宫出血(dysfunctional uterine bleeding，DUB)是指下丘脑-垂体-卵巢轴神经内分泌调节机制失常所致的子宫异常出血。国外报道其发病率为22%［1］，云南红药(Yumnan Hongyao)是云南植物药业有限公司生产的特色品种，处方中主要药物为云南特产的民间中草药，主要由三七、重楼、紫金龙、制黄草乌、玉葡萄根和滑叶跌打等10味中药组成，具有止血镇痛、活血散瘀和祛风除湿等功效，对风湿性关节炎、胃溃疡出血和功能性子宫出血等多种病症有显著的疗效。本实验用妊娠大鼠灌胃米非司酮和米索前列醇，造成早孕大鼠不完全流产模型［1-2］，观察云南红药对子宫出血模型大鼠的影响及其对大鼠血浆血栓烷 A2(thromboxane A2，TXA2)和前列环素 (epoprostenol，PGI2)含量的影响，进一步探讨该药物止血的作用机制，为云南红药的临床用药提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物

SD 大鼠，雌性(未孕)，体质量250～300 g，由昆明医学院实验动物中心提供，动物许可证号:SCXK(滇)2005-0008。

1.2 药物与试剂

云南红药胶囊，批号:20080702，购自云南植物药业有限公司;宫血宁胶囊，批号:20090805，购自云南白药集团股份有限公司;米非司酮片，批号:090503;米索前列醇片，批号:100201，均购自浙江仙琚制药股份有限公司;大鼠TXA2酶联免疫分析试剂盒，批号:100301，购自上海希美生物科技有限公司;大鼠前列环素酶联免疫吸附测定试剂盒，批号:E90727Ra，购自武汉优尔生科技股份有限公司。

1.3 仪器

LXJ2I型离心机，上海医用分析仪器厂产品;三用电热恒温水浴箱，北京长安科学仪器厂产品;旋涡混合器，浙江乐城电器厂产品;550酶标仪，美国Bio-Rad公司产品;AT2501/10万电子天平，瑞士Mettler公司产品;AMAX-200型全自动血凝分析仪，德国美创公司产品。

1.4 大鼠功能失调性子宫出血模型的制备

参照文献［1-2］方法将大鼠按雌∶雄2∶1合笼，次晨检查雌鼠阴栓与阴道涂片，以发现阴栓或阴道涂片有精子为妊娠第1天，于怀孕第7天8:00 ig给予米非司酮8.3 mg·kg-1，于18:00时ig给予米索前列醇100 μg·kg-1，造成早孕大鼠不完全流产模型。

1.5 剂量设计

云南红药胶囊的用量为一次2～3粒，一日3次，每粒 0.25 g，则人每天最大用量为 2.25 g，人体质量以60 kg 计，人用剂量为0.0375 g·kg-1，大鼠等效剂量以5.5倍计算(按体表面积换算)，则大鼠剂量为0.206 g·kg-1。所以，本实验云南红药剂量分别为 0.4，0.2 和 0.1 g·kg-1。

宫血宁胶囊的用量为一次1～2粒，一日3次，每粒0.13 g，则人每天最大用量为0.78 g，人体质量以60 kg计，人用剂量为0.013 g·kg-1，大鼠等效剂量以5.5倍计算(按体表面积换算)，则大鼠宫血宁剂量为0.072 g·kg-1。

1.6 药物的配制

称取云南红药胶囊内容物2.0 g，加少量生理盐水使其混悬后，转移至50 ml量瓶，加生理盐水至刻度，摇匀，即得云南红药高剂量混悬液(质量浓度为40 g·L-1);分别称取云南红药胶囊内容物1.0和0.5 g，同法制得云南红药 0.2 和 0.1 g·kg-1混悬液(质量浓度分别为 20 g·L-1和 10 g·L-1)。

1.7 动物分组和给药

将健康未孕的SD雌性大鼠100只与雄性大鼠于17:00时按2∶1比例合笼，次日上午8:00进行阴道检查，以涂片镜检发现精子为妊娠第1天，取受孕大鼠60只，随机分为6组，每组10只，分别为正常对照组，模型组，阳性对照组，云南红药0.4，0.2和0.1 g·kg-1组。除正常对照组外，其余各组动物均按1.4项方法造模。造模成功后，于妊娠第8日各组动物开始ig给药，每天1次，连续7 d。阳性对照组大鼠ig给予宫血宁胶囊0.072 g·kg-1，云南红药组大鼠分别 ig给予云南红药 0.4，0.2和0.1 g·kg-1，正常对照组、模型组 ig给予等量生理盐水。大鼠妊娠第14天，末次给药后1 h，股动脉放血处死大鼠，取血检测各项指标。

1.8 凝血指标的检测

采用全自动血凝分析仪测定凝血酶原时间(prothrombin time，PT)，活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)，凝血酶时间(thrombin time，TT)，血浆纤维蛋白原(fibrinogen，FIB);血浆TXA2和PGI2均采用试剂盒测定，采用固相夹心法酶联免疫吸附法进行检测。

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 云南红药对功能失调性子宫出血模型大鼠凝血指标的影响

如表1所示，与正常对照组相比，模型组大鼠的PT，APTT，TT和FIB有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01);与模型组比较，云南红药 0.4和0.2 g·kg-1组及阳性对照组能明显缩短子宫出血模型大鼠的PT，APTT和TT，能明显增加子宫出血模型大鼠的 FIB(P ＜0.05，P ＜0.01);云南红药0.1 g·kg-1组能明显缩短子宫出血模型大鼠的 PT和TT，(P＜0.05)但对APTT和FIB没有明显影响。云南红药组与阳性对照组相比没有明显差异，云南红药0.4，0.2 和 0.1 g·kg-1组之间呈现一定剂量-效应关系，但组间没有明显差异。

表1 云南红药对功能失调性子宫出血模型大鼠凝血指标的影响Tab.1 Effect of Yunnan Hongyao on thrombin indicators in dysfunctional uterine bleeding rats

2.2 云南红药对子宫出血模型大鼠血浆TXA2和PGI2的影响

与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠在造模后，血浆TXA2的含量明显降低，而PGI2的含量明显升高(P ＜0.01)。云南红药 0.4 和 0.2 g·kg-1组及阳性对照组能明显增加子宫出血模型大鼠血浆TXA2的水平、降低PGI2的水平，与模型组相比有显著差异(P ＜0.01，P ＜0.05)，而云南红药低剂量组无显著差异。与阳性对照组相比，云南红药0.4，0.2和0.1 g·kg-1组没有明显差异。云南红药 0.4 和0.1 g·kg-1之间有显著差异(P ＜0.05)，并呈现明显的剂量-效应关系。结果见表2。

表2 云南红药对功能失调性子宫出血模型大鼠血浆血浆血栓烷A2(TXA2)和前列环素(PGI2)的影响Tab.2 Effect of Hunnan Hongyao on serum thromboxane A2(TXA2)and epoprostenol(PGI2)in dysfunctional uterine bleeding rats

3 讨论

TXA2是由前列环素 H2(prostaglandin H2，PGH2)经血栓素合成酶的作用生成，主要在血小板微粒体合成与释放，亦有报道TXA2的合成来源于血管内皮细胞(vascular endothelial cell，VEC)释放的花生四烯酸(AA)转移至血小板微粒体内合成TXA2再释放出来［3］。TXA2是目前所知体内合成的最强的缩血管物质之一，同时TXA2可抑制血小板膜上的腺苷环化酶，使cAMP的生成减少，促进血小板活化、聚集，促进血栓形成。另一种是PGI2，它是由PGH2在前列环素合酶的作用下生成。PGI2主要由血管内皮细胞产生，能抑制ADP、胶原、AA等诱导的血小板聚集和释放，同时扩张血管。PGI2在防止血小板在血管局部的聚集和血栓形成方面有重要的作用［4］。当血小板活化后释放 TXA2，通过刺激TXA2受体，升高胞内Ca2+离子浓度，产生各种生物学效应:血小板激活与积聚，血细胞黏附、血管收缩等。因此，TXA2和PGI2的平衡维持了适当的冠脉张力和血小板内环境的稳定，对控制正常的止血机制及防止血栓形成具有重要的病理生理意义［5-9］。当TXA2生成增加或PGI2产生减少时，就可导致血小板活化，促进血栓形成，产生止血作用。

本实验结果显示，云南红药对功能失调性子宫出血模型大鼠的凝血指标具有显著作用，充分显示出其止血的功效，其作用机制可能与促进TXA2的合成和抑制PGI2的合成有关。

［1］Chen BH，Giudice LC.Dysfunctional uterine bleeding［J］.West J Med，1998，169(5):280-284.

［2］王晓东，赵军宁，张白嘉，邓治文，彭晓华，董 岷.药物致早孕大鼠子宫出血模型的建立［J］.中国药理学通报，1999，15(2):182-184.

［3］Pfister SL.Role of platelet microparticles in the production of thromboxane by rabbit pulmonary artery［J］.Hypertension，2004，43(2):428-433.

［4］Nieuwenhuys CM，Feijge MA，Offermans RF，Kester AD，Hornstra G，Heemskerk JW.Modulation of rat platelet activation by vessel wall-derived prostaglandin and platelet-derived thromboxane:effects of dietary fish oil on thromboxane-prostaglandin balance［J］.Atherosclerosis，2001，154(2):355-366.

［5］陈 春，杨天伦.TXA2/PGI2与心血管疾病［J］.现代生物医学进展，2008，8(11):2166-2168，2172.

［6］杨 军，奚九一.清营化瘀冲剂对大鼠下肢深静脉血栓TXA2/PGI2的影响［J］.北京中医药，2010，29(10):785-787.

［7］金 鸣.活血化瘀与自由基损伤［J］.中草药，1993，24(5):269-271.

［8］张爱娟，周序斌.血管内皮细胞的损伤及机理的研究进展［J］.中国药理学通报，1993，9(5):326-329.

［9］窦肇华，张远强，郭顺根.免疫细胞学与疾病［M］.北京:中国医药科技出版社，2004:735-799.