应用ASE－LC－ESI－MS法快速筛选肿节风的化学成分

罗永东，林培玲，吴水生，梁一池

（福建中医药大学 药学院，福建 福州 350108）

肿节风（Sarcandrae herba）为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai的干燥全草，性苦、辛、平，归心、肝经，具有清热凉血、活血消斑、袪风通络的功效，可用于血热发斑发疹，风湿痹痛，跌打损伤［1］。现代药理研究表明，肿节风具有抗肿瘤、广谱抗菌、提高免疫、抗疲劳、延长寿命、抗寒、治疗胃溃疡、镇痛和促进骨折愈合等药理作用［2］，临床应用广泛。肿节风药材含有多种化学成分，主要类型有有机酸、挥发油、倍半萜、黄酮苷及香豆素类化合物等［3］，但其功效成分并不明确。综合运用相似度评价、系统聚类和主成分分析等模式识别技术对肿节风药材进行HPLC指纹图谱研究［4］，提供了一种全面、准确和快速的质量评价模式，但液相色谱法在缺乏标准品对照的条件下难以对色谱峰提供准确的信息，其共有峰的选择，有一定的随意性，不一定能反映药材的内在质量。液相色谱－质谱联用技术通过对各组分峰紫外吸收光谱和质谱中的准分子离子峰及碎片离子分析，能快速鉴定化学成分，对全面了解药材中各化学成分的存在情况具有独特优势。因此，为更为合理地进行肿节风药材的指纹图谱研究，以及后续的肿节风谱效关系研究，本文建立了一种快速的ASE－LC－PADESI－MS分析方法定性分析肿节风药材的化学成分。

1 仪器与试剂

Waters Quattro Micro液质联用仪（美国，Waters公司），配有ESI（电喷雾电离）离子源，Masslynx 4.02工作站；one PSE快速压力溶剂萃取仪（美国，Applied Separations，Inc）；Milli－Q纯水机（美国，Millipore 公 司 ），SartoriusBP211D型十万分之一电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；甲醇、乙腈均为色谱纯（德国，MERCK公司）。

反丁烯二酸对照品（fumaric acid，分子式：C4H4O4分子量：116.07；批号：1541－20001），购自中国药品生物制品检定所；异嗪皮啶对照品（isofraxidin，分子式：C11H10O5分子量：222.19；批号：071011）和迷迭香酸对照品（rosmarinic acid，分子式：C18H16O8，分子量：360.33；批号：100209）均购自上海宏达商贸有限公司；4－羟基－3－甲氧基苯甲酸（vanillic acid，分子式：C8H8O4分子量：168.19）、4－羟基－3，5－二甲氧基苯甲酸（syringic acid，分子式：C9H10O5，分子量：198.18）、3，4－二羟基苯甲酸（3，4－dihydroxybenzonic acid，分子式：C7H6O4分子量：154.12）、绿原酸（Chlorogenic acid，分子式：C16H18O9分子量：354.3087）、咖啡酸（Cafferic acid，分子式：C9H7O4，分子量：179.15）和依斯坦布林 A（istanbulin A，分子式：C15H20O4，分子量：264.32）为江西中医学院罗永明教授友情赠予，纯度经HPLC（面积归一法）检测大于98.0%。肿节风药材于2011年3月份采于福建三明吉口采育场，经梁一池教授鉴定为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandraglabra（Thunb.）Nakai的干燥全草。

2 方法

2.1 PSE萃取方法制备样品

肿节风药材适当粉碎，取粗粉4.0g（不小于20目），置于one PSE快速压力溶剂萃取仪萃取釜中，萃取釜底部提前加入过滤膜，将萃取釜放在萃取釜固定装置上，关闭萃取釜门。选择30%乙醇作为提取溶剂，设定PSE萃取方法参数（预热平衡时间5min，静态萃取温度100℃，压力56bar，静态萃取时间10min，冲洗体积60%萃取釜体积，提取次数1次，载气吹脱时间100s）。启动one PSE快速压力溶剂萃取仪，提取完成后自动停止。所得萃取液转移至50mL容量瓶中，加30%乙醇定容，即得供试品。进样前过0.22μm滤膜。

2.2 色谱条件

Waters XTerra MS C18色谱柱（2.1mm×150mm，5μm），柱温40℃，流速0.3mL／min，流动相：乙腈（A）－0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脱程序：A：0～25min，15%；25～30min，15%～45%；30～50min，45%；50～55min，45%～100%；55～69min，100%。进样量5μL，全波长扫描。

2.3 质谱条件

离子化方式：电喷雾离子化（ESI）。正离子模式：毛细管电压，2.97kV；锥孔电压70.00V。负离子模式：毛细管电压，2.50kV；锥孔电压50.00V。其它二级锥孔电压3.00V，六级杆透镜电压0.3V，离子源温度120℃，脱溶剂气温度200℃，锥孔气的流量50L／Hr，脱溶剂气流量350L／Hr，选择质核比范围（Mass range）：100～1500m／z。数据由Masslynx 4.00（Waters公司）获得和处理。

3 结果和讨论

图1为样品正负离子模式下全扫描图。提取离子流（EIC）：［M＋H］＋，［M＋Na］＋，［2M＋Na］＋，［M－H］－，［M＋HCOO］－，［2M－H］－等特征准分子离子峰，同时根据化合物液相色谱行为，推断出22种化合物的分子量。并通过与对照品的质谱行为对照和相关文献分析［5－7］，鉴定了肿节风药材9个主要化学成分，结果见表1。

表1 肿节风药材各色谱峰分析

图1 样品的总离子流（TIC）

PSE（Pressurized solvent EXtraction）提取方法为快速溶剂萃取ASE（Accelerated Solvent Extraction）的一种。快速溶剂萃取（ASE，Accelerated Solvent Extraction）是一种在较高的温度（50℃～150℃）和压力（60～130bar）下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖样品前处理方法，具有萃取时间短、溶剂用量少、提取率高、溶剂回收率高、所得产品品质好等优点，在它推出的很短时间内就被美国国家环保局批准为EPA3545号标准方法［8］。因one PSE快速压力溶剂萃取仪自身带有压力过滤功能，本实验所制得样品非常干净，无常用的超声萃取方法所得萃取物放置一段时间后产生的沉淀物，对色谱柱影响小。同时，机器操作所带来的实验误差小，重现性好。

本文建立了一种快速溶剂萃取结合液质联用技术对肿节风药材化学成分进行快速分析的方法。通过对照品和相关文献分析，准确地鉴定了肿节风药材所含的9种化学成分，为肿节风药材的化学成分的快速筛选提供了一种方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版［S］.北京：化学工业出版社，2010：208－209.

［2］张园，吕圭源，俞静静.肿节风研究进展［J］.青岛医药卫生，2006，38（5）：360－362.

［3］付菊琴，曲玮，梁敬钰.草珊瑚属植物的研究进展［J］.海峡药学，2011，23（1）：1－6.

［4］陈根顺，徐丽芳，李鹏.草珊瑚的HPLC指纹图谱研究［J］.中草药，2009，42（2）：293－296.

［5］曾爱华，罗永明.草珊瑚化学成分研究［J］.中药材，2005，28（4）：292－293.

［6］朱丽萍，李媛，杨敬芝，等.草珊瑚的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2009，33（2）：155－157.

［7］段营辉，戴毅，高昊，等.草珊瑚的化学成分研究［J］.中草药，2005，41（1）：29－32.

［8］刘 静.ASE快速溶剂萃取——解决固体、半固体样品前处理的新技术［J］.现代科学仪器，2002，3（7）：59－61.