苍术中β-桉叶油醇和茅术醇的分离制备研究

2011-07-25 06:37甄毕贤
亚太传统医药 2011年12期
关键词:石油醚苍术乙酸乙酯

甄毕贤,才 谦

(辽宁中医药大学,辽宁 大连 116600)

中药苍术为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.或北苍术Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.的干燥根茎。始载于《神农本草经》,具有燥湿健脾、祛风散寒、明目的功效,用于湿阻中焦、脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气痿躄、风湿痹痛、风寒感冒、夜盲、眼目昏涩等症[1]。目前临床上多采用苍术的麸炒品进行应用,但苍术炮制机理并不十分明确。本课题为研究苍术麸炒后挥发性成分的变化,而对挥发油中含量很高且活性较好[2-4]的两个成分茅术醇和β-桉叶油醇进行分离,为炮制机理研究提供对照品。β-桉叶油醇和茅术醇两种成分是一对异构体,二者双键的位置不同,采用普通的硅胶无法将二者分开,本课题采用硅胶-硝酸银硅胶-凝胶相结合的方法,分离得到纯度符合要求的对照品,且方法较简单。

1 仪器、试剂与材料

Bruker-600型核磁共振仪(瑞士Bruker公司);Sephadex LH-20(瑞士pharmacia公司);柱色谱硅胶(100~200目,青岛海洋化工厂);薄层色谱硅胶(HF254,青岛海洋化工厂)。石油醚(60℃~90℃)、环己烷、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等溶剂均为天津科密欧化学试剂公司分析纯产品。Ag-NO3(AR,沈阳市试剂二厂);实验用药材采自湖北英山,经辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为茅苍术Atractylodes lancea(Thunb.)DC.的干燥根茎。25%硝酸银硅胶的制备方法:称取600g柱层析用硅胶(100~200目),将150g AgNO3溶于水中,加入硅胶搅拌均匀,减压回收溶剂,即得。

2 实验与结果

2.1 提取和分离

取苍术干燥根茎5kg,粉碎成粗粉,浸泡后置渗漉桶中,,加80%乙醇进行渗漉,合并渗漉液,减压回收乙醇,浓缩得浓缩液。将浓缩液加二倍量的水稀释,按药液与石油醚(60℃~90℃)的体积比1:1用石油醚(60℃~90℃)进行萃取,萃取3次,合并石油醚萃取液。回收石油醚,并浓缩干燥,制成浸膏,称重225g。

取石油醚层干膏225g进行硅胶柱色谱分离,以不同比例的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,体积比(100:1-1:1),每500mL为一流份,薄层检查合并相同组分,将含有茅术醇,β-桉叶油醇的流份(石油醚-乙酸乙酯=70:1)合为Fr.A,用25%AgNO3硅胶柱,以环己烷-乙酸乙酯系统梯度洗脱(体积比100:1-50:1)每400mL为一流份,薄层检查合并相同组分,将含有茅术醇的流份(环己烷-乙酸乙酯=75:1)合为Fr.a,含有β-桉叶油醇的流份(环己烷-乙酸乙酯=75:1)合为Fr.b,Fr.a和b分别用Sephadex LH-20凝胶柱纯化,氯仿重结晶,得到化合物Ⅰ、Ⅱ。图1为化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分离、纯化工艺流程图。

图1 化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分离、纯化工艺流程

2.2 结构鉴定

化合物 Ⅰ:白色针晶,易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1HNMR(600MHz,CDCl3)δppm:5.32(1H,m,C(7)-H),1.68(3H,d,C(6)-CH3),1.20(6H,s,C(11)-(CH3)2),0.92(3H,d,C(10)-CH3)。13C-NMR(600MHz,CDCl3)δppm:140.02(C-6),121.65(C-7),71.95(C-11),51.38,48.71,36.69,35.67,33.23,28.38,27.97,27.91,27.65,24.16,19.86,16.15。其1H-NMR,13C-NMR数据与文献[5]报道的茅术醇数据一致,所以鉴定为茅术醇。其结构如图2。

图2 茅术醇

化合物 Ⅱ:白色针晶,易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1H-NMR(600MHz,CDCl3)δppm:0.70(3H,s,C(14)-CH3),1.20(6H,s,C(9)-(CH3)2),4.45(1H,d,C-15),4.71(1H,m,C-15)。13C-NMR(600MHz,CDCl)δppm:151.133(C-15),105.31(C-4),72.87(C-11),49.79(C-5),49.44(C-7),41.84(C-9),41.12(C-1),36.89(C-3),35.88(C-10),27.17(C-12),27.12(C-13),25.02(C-6),22.37(C-8),16.29(C-14)。其1H-NMR,13C-NMR数据与文献[5]报道的β-桉叶油醇数据一致,所以鉴定为β-桉叶油醇。其结构如图3。

图3 β-桉叶油醇

3 讨论

本文通过采用硅胶-硝酸银硅胶-凝胶三种柱色谱结合的方法,从苍术80%乙醇提取石油醚萃物中分离得到2个单体化合物,并鉴定了化合物Ⅰ为茅术醇;化合物Ⅱ为β-桉叶油醇。此方法简单,且所得对照品纯度较高,可以为研究麸炒对苍术挥发性成分的影响提供对照品。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].第1部.北京:中国医药科技出版社,2010:150-151.

[2]王金华,薛宝云,梁爱化,等.苍术有效成分β-桉叶醇对小鼠小肠推进功能的影响[J].中国药学杂志,2002,37(4):266.

[3]李伟,郑天珍.苍术对大鼠离体小肠,结肠收缩活动的影响[J].中药药理与临床,2000,16(5):20-27.

[4]周德文,周立勇.术类的药理和药效[J].国外医药-植物药分册,1996,11(3):120-122.

[5]尹洲,赵金华.茅术醇与β-桉叶油醇在苍术提取物中的分离[J].中医临床研究,2010,2(4):63-64.

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