高 峰, 李防震, 王 珺,董骝焕
(1.山东经济学院计算机科学与技术学院∥山东省数字媒体技术重点实验室,山东 济南 250014;2.中国科学院-马普学会计算生物学伙伴研究所,上海 200031)
蛋白质多序列比对是蛋白质组学研究中的一项重要而具有基础性的研究课题,在整个生物信息学和系统生物学研究中亦是至关重要的一步。比对算法的好坏直接影响到其它生物信息学研究结果的准确性,低质量的比对算法甚至会给相关研究带来导致错误结论的危险。因此,研究对蛋白质多序列比对算法的评估方法就显得尤为重要。
目前,蛋白质多序列比对算法的打分方法有很多[1-2],比如:WSP(weighted sum-of-pairs),最大似然,最小熵等等。现在最流行的打分方法是WSP,但是在使用CluatalW,Tcoffee等方法的比对测试中,63%的比对都比正确的比对有较高的WSP值,也就是说WSP分数与比对质量之间的对应是比较差的。后来Thompson等[3]引入两种计分来比较多序列比对:列分数和SPS (sum-of-pairs score)。
列分数是计算参考比对与待检验比对序列中相同列的个数。这种衡量反映了程序正确比对所有序列的能力,所以任何一条序列的比对错误既可导致比对得分为零。SPS计算待检验比对与参考比对间相同的残基对的比例。后来,Karplus等[4]进一步修改了这种打分方法,给它赋予了权值。Lassmann等则对SPS方法做了另外的修改,提出了交叠分数(overlap score)法。该方法把参考比对中的所有残基对及待检验比对中的所有残基对分别存入两个集合中,然后计算这两个集合的交与并的比值。所有这些评估算法都基于序列比对结果的局部性质,因而都存在着易受数据噪声影响的缺陷。
通常情况下,研究者得到的DNA和氨基酸序列数据总是含有噪声的。噪声主要来源于测序过程,目前的DNA和氨基酸测序技术还难以达到100%的准确度;另外,测序后的序列数据在存储和传输过程中也有可能引入误差,例如,由于操作人员的粗心导致的字母输入错误。因此,对序列数据的处理程序,需要有一定的容错能力和抗噪声能力。
本文提出了一种蛋白质多序列比对算法的性能评估新方法,即置换距离法。由于置换距离法仅关注于不同蛋白质-蛋白质进化距离之间的相对次序,而不考虑这些进化距离之间的细微差异,因而具有更强的鲁棒性。它能够克服氨基酸序列数据中噪声的影响,对多种蛋白质序列比对算法做出客观公正的评价。
另外用最长公共子序法度量置换距离,能够比较准确的反映出置换距离之间的差异性。基于该算法,我们对Dialign, Tcoffee, ClustalW和Muscle多序列比对算法进行了比较评估。
1.1.1 BALIBASE数据库数据 BALIBASE(Benchmark Alignment Database)是针对多序列比对问题而设计的数据资源,它提供的所有多序列比对都是来源于三维结构的叠加,是目前用作多序列比对结果比较的标准平台,我们应用BALIBASE作为我们的数据源。BALIBASE包含了八个等级的参考系列,由于其中的RV6-RV8还不成熟,所以我们只应用了RV1-RV5共142组多序列进行测试。
1.1.2 ROSE软件生成的数据 ROSE软件可以生成蛋白质序列进化的概率模型。通过进化树,可以经过插入、删除和替换,从同一祖先生成具有一定相似性的序列。在人工的进化过程中,我们可以指定序列长度,进化距离,进化祖先等多项参数,来产生具有一定生物意义的序列。ROSE生成的序列适合于多序列比对,也广泛应用于生物进化关系的预测。我们将其作为另一个数据源。
本文选取Dialign,Tcoffee,ClustalW和Muscle这四种目前比较流行的蛋白质多序列比对算法进行性能评估,从而验证我们算法的有效性。
Dialign是最近几年才发展起来的一个多序列比对算法[5]。它注重于寻找多条序列中相似的区域,是一种基于段的渐进比对算法。它对于非全局相关,只是局部相似的序列非常有效。在序列比对软件当中,它的准确性是非常高的,但是运行时间很长。而且输出格式不够灵活,使得比对比较耗时,并需要进一步处理比对后的结果。
Tcoffee是一个多序列比对包[6]。给定一组蛋白质或者DNA序列,它便可以生成多序列比对。Tcoffee可以连接多序列或者一对序列,也可以连接全局比对序列或者局部比对序列到一条序列中。不论数据源来自哪里,它都能通过剩余的部分来判断得出每个位置与新序列联系的紧密性。这种紧密型通常是序列比对准确性的指示器。另外,它也提供多种格式的输出结果。
Clustal W可以进行蛋白质与核酸的多序列比较[7],分析不同序列之间的相似性关系,还可以绘制进化树。由于其灵活的输入输出格式、方便的参数设定和选择以及良好的可移植性,使得ClustalW在蛋白质与核酸的序列分析中得到了广泛应用。它可以用来发现特征序列,进行蛋白分类,证明序列间的同源性,帮助预测新序列二级结构与三级结构,确定PCR引物,以及用于分子进化分析。
Muscle在比对过程中采取了两次迭代过程来提高比对的精度[8]。对于一对序列Muscle提供了两种距离测量方法:一种针对未比对序列的kmer距离和一种针对已比对序列的Kimura距离。Muscle算法会首先进行一次渐进式比对,然后利用迭代精细法对多序列比对结果进行进一步的优化。Muscle采用的是基于进化树的分组迭代法。
设Ω为n个自然数构成的集合,即Ω={1,2,3,…,n}。集合Ω到其自身上的一一映射叫做Ω上的一个置换[9]。集合Ω上的所有置换构成置换群,共有n!个元素。
例1: 集合Ω={1,2,3}共有3!=6个置换,分别为{1,2,3},{1,3,2},{2,1,3},{2,3,1},{3,1,2},{3,2,1}。 其中{1,2,3}称为恒等置换。
本文中置换的生成过程如下:从数据库中提取一组序列数据,设含有m个氨基酸序列。由于数据库自身已给出各组序列的参考比对,我们可基于这m个序列的参考比对生成任意一对序列之间的进化距离。显然,m条序列共有n=m(m-1)/2个两两组合(称为二元组),构成一个n维的距离向量。我们把这n个距离由小到大进行排序,并分别给予编号1~n,得到n个自然数(构成集合Ω)的恒等置换π0={1,2,...,n},同时得到这m条序列的n维二元组集合到自然数集合Ω上的一一映射。
选取一个待考察的比对算法,如Dialign, 对这组序列重新进行比对。然后按与前面相同的过程,基于此比对结果生成n维的进化距离向量,并把这n个距离由小到大进行排序。需要注意的是,这里得到的n个二元组的排列顺序与前面是不一样的。我们把这n个二元组按与前面相同的映射关系映射到集合Ω中,即得到集合Ω的对应于该比对算法的置换π1={π(1),π(2),...,π(n)}。
因此,对于每个比对算法,我们都可得到n个自然数集合Ω关于这个算法的置换。
例2:假设从数据库中提取一组氨基酸序列,含有3条序列a,b和c。3条序列共有3×(3-1)/2=3个两两组合,其进化距离分别记为D(a,b),D(b,c),D(c,a)。
按照数据库给出的参考比对得到的进化距离排序设为:D(a,b) 接着使用某个比对算法得到的距离排序设为:D(c,a) 这样,通过进一步测量不同置换之间距离的大小,就提供了一种评价各种多序列比对算法性能的有效方法。采用该方法,数据的细节差异性被排序后的数字所隐藏了,我们关心的已不再是原始的数据,而是置换后的数字串。因而,置换距离法仅关注于不同蛋白质-蛋白质进化距离之间的相对次序,而不考虑这些进化距离之间的细微差异,因而具有更强的鲁棒性。 关于置换的距离问题,人们已发展了多种度量方法,我们采用最长公共子序(Longest Common Subsequence, LCS)法度量置换之间的距离。子序即子序列,是与原字符串具有相同出现顺序的字符的子集。本文所处理的字符串是由自然数组成的数字串。 例3:[3,5,7]是[1,2,3,4,5,6,7]的子序。 两条串所共有的最长子序的长度可用来衡量两条串的相似性[10]。设原串长度都为n,则当两条串完全相同时,其最长公共子序长度达到最大值n;当两条串字符顺序完全相反时,其最长公共子序长度达到最小值1。我们定义最长公共子序距离为n减去最长公共子序的长度,用dlcs表示,那么dlcs的范围就是:[0,n-1]。 规范化的最长公共子序距离为最长公共子序与n-1的比值,即 (1) 最长公共子序可以通过一种动态规划方法实现[11],算法复杂度为O(n2)。首先介绍LCS相似度[12]:字符串a和b的LCS相似度是a和b间的最大相同子序的长度,记为LCS(a,b)。显然LCS(a,b)越大,a,b越相似。LCS(a,b)的动态规划计算公式为 (2) 其中i和j分别为字符串a和b中字符位置的标记,LCS(i,j)表示两条子串[a1,...,ai]和[b1,...bj]的最长公共子序,则LCS(a,b)就是字符串a和b的最长公共子序。然后,基于LCS(a,b)可计算得两条串a,b间的最长公共子序距离dlcs,为 dlcs(a,b)=n-LCS(a,b) (3) 使用最长公共子序的方法来比较两个置换,比较灵敏准确。由于它面对的处理数据是数字串,而传统的比较方法面对的处理数据是比对过的氨基酸序列。相对来说,最长公共子序所对应的数据量比较小,因而可以达到比较快的速度。 1.5.1 序列比对 BALIBASE数据库数据和ROSE生成的数据均是fasta格式的序列,这是蛋白质序列信息的通用存储格式。从BALIBASE数据库的物种类别中,我们得到了142组数据。使用ROSE软件,我们又生成了3 721组序列,指定序列长度范围:[50,650],步长为10;进化距离范围:[0,300],步长为5。所有序列数据都已给出了参考比对。对于两部分数据,我们分别使用 Dialign,Tcoffee,ClustalW和Muscle 这4种多序列比对算法比对各组序列。从而每组序列数据都可以生成5种比对结果(包括参考比对)。比对后的序列,可以显示出一些相似的区域以及差异较大的区域,反映了序列在进化上的保守区和非保守区。 1.5.2 计算距离矩阵 使用phylip 3.69程序包中的protdist.exe程序可以基于比对后的每组序列分别生成进化距离矩阵[13]。protdist.exe程序提供了多达5种基于比对序列计算进化距离的模型,本文采用其缺省设置Jones-Taylor-Thornton (JTT)模型[14]。对于含m条序列的分组(各组的m值可能是不同的),得到的进化距离矩阵是m×m维的,每个元素对应一个序列对。显然,这个矩阵是对称的,且对角线元素为0,因而只有m(m-1)/2个独立的非零元素,对应m条序列的m(m-1)/2个两两组合。这样,每组序列都可以利用protdist.exe程序产生5个距离矩阵,分别为参考比对距离矩阵、Dialign距离矩阵、Tcoffee距离矩阵、ClustalW距离矩阵和Muscle距离矩阵。 1.5.3 排序并生成置换 每个m×m维的进化距离矩阵可提取出一个n=m(m-1)/2维的二元组向量,其元素为序列的两两组合。按前面所介绍的过程对每个二元组向量进行排序和映射,即得到每组序列数据在自然数集合Ω={1,2,...,n}的5种置换,分别记为: 参考比对产生的置换π0={1,2,...,n},为恒等置换; Dialign产生的置换πd={πd(1),πd(2),...,πd(n)}; Tcoffee产生的置换πt={πt(1),πt(2),...,πt(n)}; ClustalW产生的置换πc={πc(1),πc(2), ...,πc(n)}; Muscle产生的置换πm={πm(1),πm(2), ...,πm(n)}。 图1表示在BALIBASE数据库的六类数据中,各比对算法表现出最优的比例。可以看出在所有6种类别的数据中,Tcoffee方法的表现都是最优的,Dialign次之,且这两个算法的获胜比例远远超过ClustalW和Muscle。在该图中, Dialign和Tcoffee占了绝对优势,Muscle和ClustalW的表现只局限于很小的数据范围。 图1 BALIBASE数据库数据处理的最优比例图 图2为4种算法在各类别数据上的置换距离数值统计图,注意图中较小的数值对应着算法较好的性能表现。可以看出,Tcoffee和Dialign的数值相近,前者略优于后者,Muscle和ClustalW的表现差不多,Tcoffee和Dialign的数值显著小于Muscle和ClustalW,这些结论与图1也都是一致的。这些结果与其它评价方法所得结果是一致的[8]。 图2 BALIBASE数据库数据处理的各算法置换距离图 我们使用ROSE软件生成的数据进行实验,结果见图3和图4。图3为获胜算法的分布示意图,其中横坐标为ROSE软件的序列长度参数,纵坐标为进化距离参数。由图3可以看出,在所有区间Dialign方法的最优比例都是最高的,Muscle,ClustalW和Tcoffee的比例都比较小。 图3 基于ROSE数据的各算法获胜分布示意图 图4为基于ROSE数据得到的置换距离统计图。可以看出Dialign算法表现最好,显著超过其它几种算法。ClustalW算法、Muscle算法与Tcoffee算法表现差不多,它们的置换距离数值都处于较高的水平,这些结论与图3也是一致的。 图4 ROSE生成数据的各算法置换距离统计图 在蛋白质多序列比对算法的性能评估方法的研究中,我们提出了置换距离法。置换距离法能够克服氨基酸序列数据中噪声的影响,对多种蛋白质多序列比对算法进行了客观公正的评价;用最长公共子序法度量置换距离比较准确的反映出了不同置换之间的差异性。计算结果与其它序列比对评价算法所得结果是一致的[8],另外,计算结果表明各算法的性能表现与处理的实际数据有关,不同算法具有不同的数据偏好。 我们分别用2个数据库评价4种算法,得到的结论不尽一致。综合来看,在BALIBASE数据库上Dialign和Tcoffee表现较好,但Dialign又稍逊于Tcoffee;在ROSE数据上Dialign占绝对优势,其它3种算法表现差不多都处于较低的数据范围内。但需要指出的是,由图2和图4可以看出,实验结果具有显著的标准差。考虑这个因素之后,我们认为,总的来看,在这4个多序列比对算法中,Dialign表现出最佳的性能。 分析Dialign在BALIBASE上的表现稍差的原因,可能与Dialign属于概率模型有关。BALIBASE数据来自真实的生物学实验,而ROSE数据是根据概率模型人工产生的。因而,同样基于概率模型的Dialign在ROSE数据中会表现更好一些。 本文采用了最长公共子序法来度量置换之间的距离,事实上,目前存在着多种置换距离度量方法。采用其他的置换距离度量方法,如编辑距离,或许也可以达到较好的效果。目前人们发展了大量蛋白质序列比对算法,本文仅选取了其中4种进行评估,计算结果初步证明了我们所采用的置换距离法的可行性。我们希望将来用置换距离法对目前存在着的各种序列比对算法做一个全面系统的性能评价研究,以考察不同比对算法所适用的数据范围,从而对其他研究者在选择序列比对算法时提供参考。另外,本文仅讨论了蛋白质多序列比对算法的评估问题,但置换距离法显然也适用于评估各种DNA多序列比对算法,表明该方法具有广泛的适用性。 参考文献: [1]LASSMANN T, SONNHAMMER E L L. Quality assessment of multiple alignment programs[J]. FEBS, 2002,529:126-130. [2]OSAMU G. Multiple sequence alignment: algorithm and applications[J]. Adv Biophys, 1999,36: 159-206. [3]THOMPSON J D, PLEWNIAK F, POCH O. A comprehensive comparison of multiple sequence alignment programs[J]. Nucleic Acids Res, 1999,27: 2682-2690. [4]KARPLUS K, HU B. Evaluation of protein multiple alignments by SAM-T99 using the BALIBASE multiple alignment test set[J]. Bioinformatics, 2001,17:713-720. [5]MORGENSTERN B. DIALIGN: multiple DNA and protein sequence alignment at BiBiServ[J]. Nucl Acids Res, 2004,32: 33-36. [6]CEDRIC N, DESMOND G H, JAAP H. T-Coffee: a novel method for fast and accurate multiple sequence alignment[J]. J Mol Biol, 2000, 302:205-217. [7]YANG Jing, LI Chengyun, WANG Yunyue, et al. Computational analysis of signal peptide-dependent secreted proteins in saccharomyces cerevisiae[J]. Agricultural Sciences in China, 2006, 5 :221-227. [8]谷俊峰,王希诚,赵金城.多序列渐进式比对算法研究与比较[J]. 生物信息学, 2005, 2:73-76. [9]尚骅.代数运算与自然数[EB/OL].(2002-05-23)[2010-04-12].http://media.open.edu.cn/media_file/rm/ip2/2002_5_23/gdds/gdds2/htm/gdds05.htm. [10]MARC S, KENNETH S. Permutation distance measures for memetic algorithms with population management[C]. The Sixth Metaheuristics International Conference.Vienna, Austria, 2005. [11]HIRSCHBERG D S. A linear space algorithm for computing maximal common subsequences [J]. Communications of the ACM, 1975,18: 341-343. [12]张阳, 李建良,胡正国. News Grouper: 一个自动抽取重要新闻的软件工具[J]. 计算机工程, 2002,28 :83-84. [13]Phylip软件包[EB/OL].[2010-04-12].http://evolution.gs.washington.edu/phylip.html. [14]JONES D T, TAYLOR W R, THORNTON J M. The rapid generation of mutation data matrices from protein sequences[J]. Comput Appl Biosci, 1992,8 :275-282.1.4 置换距离的最长公共子序度量
1.5 处理过程
2 试验结果
2.1 基于BALIBASE数据库的评价结果
2.2 基于ROSE数据的评价结果
3 讨 论