早期肝硬化患者口服四联活菌片对血浆细胞因子和肠道菌群的影响

陈世川

(海口市秀英区永兴中心卫院消化内科，海南 海口 571152)

肝炎后肝硬化患者均有不同程度的肠道菌群失调，特别是厌氧双歧杆菌、真杆菌以及需氧肠杆菌、酵母样真菌的数量发生改变。研究发现微生态制剂具有营养和改善肝脏、肠道功能、增强免疫作用，对肝硬化有辅助治疗作用〔1〕。本文对早期肝硬化患者在保肝常规治疗的基础上加用四联活菌片(思连康)进行治疗，观察治疗前后患者血浆细胞因子和肠道菌群的变化。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2008年1月至2009年12月在我院消化内科住院治疗，经B超或CT证实的早期肝硬化患者90例，排除肝癌、感染及其他重要器官衰竭的患者;排除在治疗中应用广谱抗菌药物而影响肠道菌群者。男64例，女36例;年龄38～75〔平均(49.5±8.5)〕岁。随机将患者分为治疗组和对照组，每组45例。两组患者在年龄、性别及肝功能等方面无统计学差异(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法 对照组给予肝硬化常规治疗，治疗组在此基础上加服四联活菌片(思连康，主要成分:嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌、蜡样芽胞杆菌、肠球菌，杭州龙达新科生物制药有限公司，规格1.0 g)，1.0 g/次，3次/d口服，疗程均为21 d。两组分别在治疗前后进行血浆细胞因子和肠道菌群的检测。

1.3 检测方法

1.3.1 血浆细胞因子检测 采用酶联免疫法定量测定血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-8的水平。试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免所。严格按试剂盒说明书进行操作。

1.3.2 肠道菌群的检测 取新鲜粪便0.5 g加入4.5 ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，按10倍连续稀释法稀释至10－9。分别取 10－9、10－7、10－5、10－3、10－1稀释液 50 μl，依次接种在选择性培养基上。选择肠道菌群中具有代表性的厌氧菌3种(拟杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌)和需氧菌2种(肠杆菌、肠球菌)及酵母样真菌。厌氧菌采用抽气换气培养法培养48 h，需氧菌置35℃孵箱培养24 h，酵母样真菌置35℃孵箱培养48～72 h。使用ATB半自动微生物鉴定系统(法国生物梅里埃公司)进行细菌鉴定。结果以粪便每克湿重中菌落形成单位的对数值表示(lg cfu/g)〔2〕。

1.4 统计学方法 应用SPSS14.0统计软件进行分析，计量数据用x±s表示，采用t检验。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后血浆细胞因子的变化 两组患者治疗前血浆IL-1β和IL-8水平比较无显著差异(P＞0.05)。对照组患者治疗前后血浆IL-1β和IL-8水平无明显变化(P＞0.05)，治疗组患者治疗后血浆IL-1β和IL-8水平均较治疗前明显下降(P＜0.05)。见表1。

2.2 两组患者治疗前后肠道菌群的变化 两组患者治疗前肠道菌群比较无统计学差异(P＞0.05)。治疗组治疗后双歧杆菌和乳酸杆菌的菌落数量较治疗前明显增加，有统计学意义(P＜0.05);酵母样真菌菌落数较治疗前显著降低，有统计学意义(P＜0.05)。肠球菌和拟杆菌、肠杆菌的菌落数均有不同程度的增加，但无统计学差异(P＞0.05)。见表2。

表1 两组患者治疗前后血浆细胞因子的变化(x±s)

表2 两组患者治疗前后肠道菌群变化(x ± s，lg cfu/g)

3 讨论

肝硬化患者通常存在不同程度的肠道菌群失衡，表现为厌氧的双歧杆菌减少，而需氧的肠球菌、肠杆菌显著增多。文献表明肝硬化患者肠道菌群的变化可能与肠蠕动减慢、延迟，微绒毛损害，肠道清除能力降低，提供过路菌接触、黏附黏膜的机会，消化道运动减弱，消化道对细菌的机械排空作用减弱有关。抗体、溶菌酶、酸碱分泌减少有利于细菌生长，肠腔内pH上升，肠壁局部抵抗力下降，使细菌生长受到变化。口服益生菌，对于恢复正常的肠道菌群具有重要意义。

四联活菌片是一种四联活菌，主要成分为嗜酸乳杆菌、婴儿双歧杆菌、蜡样芽孢杆菌、肠球菌，其中各菌种数量均不低于0.5×106cfu。双歧杆菌、乳酸杆菌及肠球菌是人类肠道内主要益生菌，这些细菌可为机体提供维生素及多种微量元素，通过影响蛋白质、糖和脂肪代谢，促进机体对营养物质的吸收利用〔3〕。双歧杆菌及乳酸杆菌能增强机体的非特异与特异免疫功能，在肠道中对病原微生物产生营养竞争及生物化学抑制作用，阻止致病菌的定植和入侵，抑制致病菌的生长繁殖，促进肠道正常菌群恢复，从而恢复正常胃肠运动及减少胃肠症状。肝硬化患者由于肠蠕动减慢，分泌减少，肠道清除能力降低，使肠道成为潜在致病菌的良好生存场所〔4〕。本研究结果显示两组患者治疗前肠道菌群比较无统计学差异。治疗组双歧杆菌和乳酸杆菌的菌落数量较治疗前明显增加;酵母样真菌菌落数较治疗前显著降低;肠球菌和拟杆菌、肠杆菌的菌落数虽有不同程度的增加，但无统计学差异，表明口服四联活菌片能调节肠道菌群，抑制肠道有害菌的过度繁殖，使肠道有益菌迅速增加，维持肠道微生态平衡。

肝硬化患者释放细胞因子构成一个独特的网络系统，能够参与肝组织的损伤。炎症因子的产生和增加，导致肝硬化患者凝血系统功能紊乱，诱发或加重肝性脑病。肝硬化失代偿可激活巨噬细胞释放各种生物活性因子〔5〕。IL-1β和IL-8是具有炎症介导活性的细胞因子，IL-1β的过度表达是引起肝损伤的重要因素之一，在许多方面与肿瘤坏死因子(TNF)具有相似的生物功能，通过与TNF产生协同作用，提高机体对TNF的敏感性;同时高浓度的IL-1β也能诱导肝脏合成急性期蛋白，引发代谢性消耗;IL-1β也可使T辅助细胞分泌IL-2，进一步促进B细胞与T细胞增殖分化，加重损伤过程。T细胞活化因子及肝细胞刺激因子，可产生大量免疫球蛋白，诱导分泌型IL-2受体(sIL-2R)表达，促进急性期蛋白合成，加重肝细胞坏死。IL-8是一种小分子量活性多肽，有较强的趋化和激活中性粒细胞的作用。本研究两组患者治疗前血浆IL-1β和IL-8水平比较差异不显著，对照组患者治疗前后血浆IL-1β和IL-8水平无明显变化，治疗组患者治疗后血浆IL-1β和IL-8水平均较治疗前明显下降。四联活菌片能显著降低血浆IL-1β和IL-8含量，减弱对肝组织中吞噬细胞的刺激从而对损伤肝脏起到保护作用。

综上所述，口服四联活菌片能降低血浆IL-1β、IL-8水平，调节肠道菌群失调，从而减少对肝组织的损伤，对早期肝硬化有一定的辅助治疗作用。

1 陈晓文，朱德新，张洪钦.思连康对肝硬化患者肠道菌群及血浆内毒素的影响〔J〕.实用医学杂志，2008;24(4):642-3.

2 景丽荣，张洪涛，李 琳.双歧杆菌四联活菌片治疗肝硬化并自发性腹膜炎51例疗效观察〔J〕.中国煤炭工业医学杂志，2009;12(10):1545.

3 李瑞军，杨昭徐.微生态制剂在消化系统疾病中的应用进展〔J〕.中国新药杂志，2003;12(6):416-9.

4 张东绅，黄志华，陈 如.肝硬化患者口服培菲康和妈咪爱对肠道菌群影响的研究〔J〕.中国微生态学杂志，2004;16(2):109-10.

5 吴静黎，温帆渊，朱瑞芳，等.肝硬化患者血清内毒素、TNF-α、IL-6检测的临床意义〔J〕.现代医药卫生，2004;20(8):602-3.