大黄蛰虫丸对动脉粥样硬化模型大鼠内皮功能的影响

张艳慧 司秋菊 郭素丽 王艳娜 王鑫国 王贵娟 江玉娟 曹 刚

(河北医科大学中西医结合学院，河北 石家庄 050091)

大黄蛰虫丸出自汉张仲景著《金匮要略·血痹虚劳病脉症并治第六》中，由熟大黄、黄芩、生地黄、蛰虫、水蛭、蛴螬、虻虫、桃仁、杏仁、芍药、干漆、甘草十二味药物组成，具有疏通经络、破瘀生新、缓中补虚之功效。以往该方在临床上主要用于肝炎、肝硬化的治疗，近年来，本着中医异病同治的原则，在防治动脉粥样硬化(AS)中也取得了较好的疗效。本实验主要从大黄蛰虫丸对内皮功能的影响来进一步的探讨其抗AS作用机制，为该药临床疗效提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD雄性大鼠40只，体重220～300 g，普通型，由河北省实验动物中心提供。

1.2 主要药物和试剂 大黄蛰虫丸购自徐州颐海药业有限公司，批号:060402。实验前将药物分别研成粉剂按计量比配制成两个浓度混悬液(0.7 g/kg，1.4 g/kg)以备使用。血脂康胶囊由北京北大维信生物科技有限公司生产，批号:20061211。总胆固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司;内皮素(ET)，一氧化氮(NO)测试盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 动物模型的建立 参照文献方法复制大鼠AS模型〔1〕。饲喂基础饲料的大鼠常规观察1 w随机分5组，对照组、模型组、大黄蛰虫丸高剂量组、大黄蛰虫丸低剂量组、阳性对照组。除对照组给予基础饲料外，其余各组饲喂高脂饲料(配方1%胆固醇、0.35%胆酸、5%炼制猪油、0.1%丙硫氧嘧啶及基础饲料)的大鼠按70万单位维生素D3/kg的总计量分3 d腹腔注射，对照组同时给予等体积的生理盐水腹腔注射，连续观察21 d。对照组、模型组:每天灌胃蒸馏水(1 ml/100 g)，大黄蛰虫丸高剂量组:大黄蛰虫丸混悬液1.4 g生药/kg灌胃，大黄蛰虫丸低剂量组:大黄蛰虫丸混悬液0.7 g生药/kg灌胃，阳性对照组:血脂康胶囊0.3 g/kg灌胃，再观察8 w。

1.3.2 生化指标的检测 实验结束后大鼠断头取血，低温离心，3 000 r/min;15 min分离血清，血脂采用酶法;丙二醇(MDA)采用硫代巴比妥酸比色法;超氧化物歧化酶(SOD)采用黄嘌呤氧化酶法;NO采用硝酸还原法;ET采用放免法。

1.3.3 病理学观察 标本处理及染色:处死大鼠并立即刨取主动脉弓，剥离外膜附着组织，置于10%甲醛固定，固定液固定24 h;70%酒精浸泡过夜;80%酒精浸泡2 h;95%酒精浸泡2次，每次1.5 h;纯酒精浸泡2次，每次1.5 h;二甲苯1浸泡30 min;二甲苯2浸泡40 min;石蜡1，浸蜡30 min;石蜡2，浸蜡90 min;标本包埋;切片，60～70℃烤箱中烤片2 h，待染色。脱蜡至蒸馏水，Harris氏苏木素(HE)染色，10 min;温热流水(自来水)冲洗2～5 min;1%盐酸酒精分化(将切片浸入1～2次);自来水冲洗;0.1%氨水返蓝;自来水充分冲洗;0.5%伊红染2 min;水洗，脱水、透明、树脂封固。显微镜下观察病理变化。

1.4 统计学分析 采用 SPSS1.10统计分析软件进行统计。数据用x±s表示，采用组间对照t检验。

2 结果

2.1 大黄蛰虫丸对大鼠血脂的影响 模型组血清TG，TC，LDL-C含量比对照组明显升高(P＜0.01，P＜0.05)，血清HDLC明显降低(P＜0.01)，表明模型组出现脂代谢紊乱。大黄蛰虫丸低剂量组与模型组对比TG，LDL-C明显降低(P＜0.05);大黄蛰虫丸高剂量组与模型组对比TG，TC，LDL-C明显降低(P＜0.01，P＜0.05)，HDL-C含量明显升高(P ＜0.01)，这表明大黄蛰虫丸高、低剂量均有降血脂的作用。且大黄蛰虫丸高剂量较低剂量作用更明显。血脂康组TG，TC，LDL-1含量较模型组明显降低(P＜0.01，P＜0.05)，与大黄蛰虫丸低剂量组对比TC有显著性差异(P＜0.05)，与大黄蛰虫丸高剂量组对比HDL-C有显著性差异。见表1。

表1 大黄蛰虫丸对大鼠血脂的影响(x ±s，n=8，nmol/L)

2.2 大黄蛰虫丸对大鼠血清NO、ET的影响 结果见表2。模型组血清NO水平较对照组显著降低(P＜0.05)，ET水平明显升高(P＜0.05);大黄蛰虫丸高剂量组与模型组对比NO显著升高，ET水平降低(P＜0.01，P＜0.05);而大黄蛰虫丸低剂量组与模型组对比NO水平升高，ET水平降低但无显著性差异，提示大黄蛰虫丸高剂量组作用更明显。血脂康组与模型组比较NO降低，ET升高有显著性差异(P＜0.05)，与大黄蛰虫丸高、低剂量组对比均无显著性差异，其作用趋势优于大黄蛰虫丸低剂量组，比大黄蛰虫丸高剂量作用稍差。

表2 大黄蛰虫丸对血清NO，ET的影响(x ± s，n=8)

2.3 主动脉病理检查 正常对照组:各层结构规整，内膜无脂质沉积改变，含少量胶原纤维和平滑肌纤维，弹力纤维分布均匀，未见异常改变。模型组:主动脉壁内膜显著增厚向管腔突起，病灶表面由纤维细胞、胶原纤维构成纤维帽，其下方有脂质、少许炎细胞，可见粥样斑块形成。大黄蛰虫丸低剂量组:主动脉内膜稍有增厚，病灶可见表层纤维帽较薄，其下为大量泡沫细胞。大黄蛰虫丸高剂量组:主动脉内膜无明显增厚，平滑肌细胞排列较规整，但可见轻度水肿。未见胆固醇结晶，亦未见溶解坏死组织。血脂康组:主动脉内膜无明显增厚，弹力纤维形态稍迂曲。未见胆固醇结晶，亦未见溶解坏死组织。

3 讨论

AS是一种与血脂异常及血管壁成分改变有关的动脉疾病。现代研究表明，AS是一个缓慢而复杂的病理过程，各种机制(血脂异常等)导致内皮细胞损伤，使内皮细胞通透性增加，脂质进入内膜与细胞产生的氧自由基相结合，形成脂质过氧化物从而促进脂质过氧化，经氧化修饰的脂蛋白又可以抑制内皮细胞的代谢与增值〔2〕，导致血管内皮细胞氧化损伤，发生脂质的沉积，加速了AS斑块的形成。由动脉粥样硬化所引起的疾病表现类似于中医的胸痹、心痛、眩晕、中风等病证。中医学认为七情内伤、气机不畅、气滞血瘀或饮食失节损伤脾胃，运化失调，津液化为痰浊，而致AS病症的形成。可见血瘀痰阻、气滞血瘀为AS形成的主要病机。

血管内皮是覆盖于所有血管内侧表面的单层扁平细胞，以往一直被认为仅起血管内壁机械屏障作用，并表现为半透膜的功能。至今已被证实的内皮功能包括调控血管张力及血液流动，参与血液与组织间的物质交换，防止单核细胞与血管内皮细胞(EC)发生黏附以及脂质过氧化等。最近，人们更把EC看作是一个内分泌组织及激素反应组织，它可以产生多种生物活性物质并发挥作用。不仅如此，EC还有多种激素的受体，这些受体除了具有将激素输送至内皮下的功能外，还参与了激素在细胞内的信号传递过程〔3〕。

ET和NO是血管内皮细胞分泌的一对最强的血管收缩和舒张因子，它们相互影响，相互制约，共同参与血管的正常舒缩，其水平异常或平衡失调与血管内皮功能损伤有关。

ET是内皮细胞合成的血管活性物质，属内皮依赖性收缩因子，是至今发现的最强的缩血管物质〔4〕。ET在正常人循环血浆水平很低，内皮细胞主要向壁侧分泌ET，作用于局部平滑肌。除具有强大的收缩血管的作用，ET还具有促进平滑肌细胞增殖等多方面的功能，加速了AS形成。高脂血症和动脉粥样硬化时，内皮受损，可使ETmRNA的表达增强，ET的释放增加，促进动脉粥样硬化斑块进一步增大。NO是内皮细胞合成的生物活性物质，属内皮依赖性舒张因子(EDRF)〔5〕。它是由L-精氨酸在NO合成酶催化下而生成。除具有强大的扩张血管作用，还具有防止血小板黏附、聚集，阻止单核细胞对血管内皮的趋化，抑制平滑肌细胞增殖等作用。当内皮细胞受损时，NO合成减少，导致血管的舒张功能障碍，加速血小板的黏附和聚集，脂质更易沉积和氧化，单核巨噬细胞对脂质的吞噬作用增强，泡沫细胞形成增加，加速了动脉粥样硬化的形成。现在已把内皮细胞释放NO的能力作为判定内皮功能的指标。

本实验研究通过喂养法复制动脉粥样硬化模型。大黄蛰虫丸组方严谨，用药精当，是我国历史悠久的验方，本实验挖掘中医的潜力，光大经方的作用，研究结果显示该方可降低TC、TG、LDL，升高HDL。同时升高血清NO含量，降低ET含量，说明其可调节血脂异常，改善内皮细胞功能，保护血管内皮，从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。

1 温进坤，韩 梅，杜玮南，等.一种快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的实验方法〔J〕.中国老年学杂志，2001;21(1):50.

2 刘 飞，常 红，谢镇远.氧化修饰低密度脂蛋白对血管内皮细胞氧化损伤的研究〔J〕.卫生研究，2004;33(1):89-91.

3 Harrison DG，Ohara Y.Physiologic consequences of increased vascular oxidantstresses in hypercholersterolemia and atherosclerosis implication for impaired vasomotion〔J〕.Am JCardiol，1995;75:75B-81B.

4 Anderson TJ，Meredith IT，Yeung AG，et al.The effecty of cholesterol lowering and antioxident therapy on endothelium dependent coronary vasomotion〔J〕.N EnglJMed，1995;332:488-93.

5 Yao SK，Akhtar S，Charru A，et al.Endogenous andexogenous nitrc oxide protect against intracoronary thrombosis and reoc-clusion after thrombolysis〔J〕.Circulation，1995;92(4):1005-10.