HPLC法测定穿龙骨刺胶囊中淫羊藿苷的含量

宾天海 黄健军

1.广西古方药业有限公司，广西 南宁 530221;2.广西中医学院药学院，广西 南宁 530001

穿龙骨刺胶囊由穿山龙、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黄、枸杞子等6味药组成的复方制剂，功能主要用于补肾，健骨，活血，止痛。用于骨质增生，骨刺疼痛等。本方中淫羊藿含淫羊藿苷成分，淫羊藿苷为本方中有效成分之一。因此测定本品中淫羊藿苷的含量，可作为本品质量控制的指标之一。为了更好的控制该制剂的质量，保证药品使用安全、有效，本文采用HPLC法测定了淫羊藿苷的含量。

1 仪器与试药

LC－10AP型高效液相色谱仪 (日本岛津公司);SPD－10Avp紫外－可见检测器;LC－10ATVP7725(i)型手动进样器;威玛龙色谱数据工作站;Aglient 8456紫外可见分光光度计;kh－250db型超声处理器 (昆山禾创超声仪器有限公司)。

淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为:0737－200111(含量测定用 );穿龙骨刺胶囊 (购自A厂，共3批);甲醇、乙腈为色谱纯;其余试剂为分析纯，水为超纯水。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱条件为:色谱柱为Dikma OP－ODS柱 (4.6×250mm，5μm);流动相为乙腈 －水 (30∶70)，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm，进样量为10μl;柱温为室温;理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于5000。在上述色谱条件下，供试品中淫羊藿苷能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠，色谱图见图1。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1ml含淫羊藿苷0.05mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液20ml，具塞，称定重量，超声 (功率250W，频率50kHz)40min。取出，放至室温，称重，用70%乙醇溶液补足损失的重量，用微孔滤膜 (0.45μm)滤过，续滤液作为供试品溶液。

2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，以上述色谱条件测定，根据淫羊藿苷峰面积，以外标法计算供试品中淫羊藿苷含量。

2.5 线性关系考察 取浓度为0.512mg/ml淫羊藿苷对照品溶液，分别精密量取适量，分别加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.01024、0.0256、0.0512、0.0768、0.1024mg/ml的淫羊藿苷对照品溶液，分别进样10μl，按拟定的色谱条件测定，以峰面积积分值为纵坐标、淫羊藿苷进样量为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程:r=9472.1X－6038.4，r=0.9998。结果表明:淫羊藿苷浓度在0.01～0.1mg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取同一供试品溶液，精密量取10μl，连续进样6次，测定淫羊藿苷峰面积，其RSD为1.13%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 (批号:20091001)10μl，分别于0、4、8、12、16、24小时进行测定，其峰面积RSD为1.11%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 阴性对照试验 按处方比例取处方中缺淫羊藿的各味药材，照制法制取缺淫羊藿阴性样品。取阴性样品按供试品溶液提取方法制成阴性对照溶液，测定，在上述色谱条件下，缺淫羊藿阴性对照溶液，在淫羊藿苷色谱峰处无干扰峰出现，表明对被测成分无干扰。

2.9 重复性试验 取供试品10粒，取其内容物，研细，精密称取五份，每份约0.2g，按前述方法制成供试品溶液，按拟定的色谱条件测定峰面积，RSD%=1.31，表明重复性良好。

2.10 加样回收率试验 采用加样回收法，取已知含量的穿龙骨刺胶囊 (20091001)内容物，研细，精密称取6份，每份0.1g，分别添加已配制好的浓度为0.408mg/ml淫羊藿苷对照品溶液1ml，蒸干，按“供试品溶液制备”项下的方法制成供试品溶液。按拟定的色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。

2.11 样品中淫羊藿苷的含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液3批，按上述色谱条件测定，以外标法计算，结果见表2。

表1 淫羊藿苷回收率试验结果

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择 参考文献 ［1］乙腈－水 (27∶73)溶液，乙腈－水 (30∶70)通过比较两者不同配比下的分离效果，最终确定为乙腈－水 (30∶70)，此条件下，从色谱图形分析看，淫羊藿苷拖尾因子较小，样品分离效果好，阴性对照无干扰。

3.2 提取溶剂的选择 以文献［2］甲醇、70%乙醇和80%乙醇为提取溶剂时，都能充分提取样品中的淫羊藿苷，考虑到甲醇的毒性，最终选用70%乙醇溶液为提取溶剂。

［1］刘灿辉，谭浩军.高效液相色谱法测定老年咳喘片中淫羊藿苷含量［J］.中国药业，2009，18(18):36.

［2］喻贵英，刘伟霞，郭平牯，等.穿龙刺骨片质量标准的研究［J］.中国医药杂志，2004，1(6):231－234.