产超广谱β-内酰胺酶的革兰阴性杆菌检测及其耐药性研究

吴秋飞

(浙江上虞市中医院检验科，312300)

由于广谱抗生素、第三代头孢菌素等抗菌药物的广泛应用，出现了质粒介导的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药株，能水解头孢噻肟、头孢曲松等三代头孢及氨曲南等抗菌药物，给临床抗感染治疗带来极大困难，成为临床关注的重点［1-3］。本研究收集产ESBLs的革兰阴性杆菌并对其耐药情况进行分析，以求为临床感染性疾病的诊治提供参考依据。

1 材料和方法

1.1 菌株 收集2010年6月至2011年6月我院住院患者中分离的革兰阴性杆菌371株，质控菌株为大肠杆菌 ATCC 25922，铜绿假单胞菌 ATCC 27853。

1.2 仪器与试剂 VITEK-ATB细菌鉴定系统和API细菌鉴定试剂条(法国梅里埃公司);头孢噻肟/克拉维酸(CTX/CA)及头孢他啶/克拉维酸(CAZ/CA)复合纸片(英国OXOID公司);其他药敏纸片(北京天坛公司)。

1.3 方法 采用VITEK32和双纸片法检测ESBLs。双纸片法是先将含酶抑制剂药物阿莫西林/克拉维酸(AMC/CA)纸片贴于MH平板，然后在纸片中心距离25mm处贴上CAZ或CTX底物纸片，接种方法同纸片扩散法，35℃孵育18～24 h，任一底物纸片近AMC/CA端抑菌区加强或双纸片之间出现协同敏感区判定ESBLs阳性。药敏试验应用VITEK32检测MIC，根据NCCLS 2008标准判读结果。

1.4 统计学处理 应用统计软件SPSS13.0，株数计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。以Kappa检验对两种方法进行一致性评价，Kappa≥0.75一致性极好，0.4 ＜Kappa＜0.75 一致性较好，≤0.4一致性差。

2 结果

2.1 临床分离G－杆菌的分布 371株革兰阴性杆菌中，克雷伯菌85株，占G-菌的22.9%(85/371)，大肠杆菌占21.6%(80/371)，铜绿假单胞菌占17.8%(66/371)，鲍曼不动杆菌占12.4%(46/371)，阴沟肠杆菌占8.1%(30/371)，嗜麦芽窄食假单胞菌占7.8%(29/371)，枸橼酸杆菌占2.7%(10/371)，其他 G-杆菌占 6.7%(25/371)。

2.2 VITEK32仪器法和双纸片法检测 ESBLs的比较:两种检测方法检测ESBLs阳性的结果比较见表1，经χ2检验显示两种检测方法对ESBLs的检出率差异有统计学意义(χ2=169.4，P ＜0.01)。两种方法对 ESBLs的检测一致性较好(Kappa值为0.65)。

表1 VITEK32仪器法和双纸片法检测ESBLs的结果比较(株)

2.3 ESBLs阳性株和ESBLs阴性株对抗菌药物耐药率比较 35株大肠杆菌ESBLs阳性菌株对氨苄西林、头孢噻吩、庆大霉素等药物呈高比例耐药，与ESBLs阴性菌株耐药率比较组间差异有统计学意义(P＜0.05)。32株克雷伯菌ESBLs阳性株对氨曲南、头孢呋新、头孢噻肟等耐药率高，与ESBLs阴性菌株组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。本组菌株均对伊米配能较敏感，见表2。

表2 ESBLs阳性菌株和ESBLs阴性菌株耐药率比较(株)

3 讨论

从我院临床分离到的G-杆菌组成看，最为多见的菌种为大肠杆菌和克雷伯菌，这两种细菌对头孢三代和氨曲南等的耐药性与质粒介导ESBLs密切相关，其ESBLs检出率分别为43.8%和37.6%明显高于他国，给临床带来极大的治疗压力，产ESBLs细菌的感染成为临床关注的重点。因此，寻求快速、准确的检测方法，对了解产ESBLs细菌的耐药情况及合理使用抗菌药物具有重要意义［4-5］。

对比VITEK32和双纸片两种ESBLs检测法实验结果显示，按VITEK32仪器法从临床分离到的371株G-杆菌共检出ESBLs菌80株，阳性率21.6%(80/371)，其中大肠杆菌ESBLs检出率43.8%(35/80)高于克雷伯菌37.6%(32/85)。VITEK仪器法ESBLs检出率达99%以上，方法简单、快速、准确，且可以同时发药敏试验和ESBLs结果的报告，在大、中型医院值得推广使用。

本研究结果显示，双纸片法ESBLs检出率低于仪器法，与相关报道结果一致［6-8］。与仪器法相比，由于双纸片法价格便宜，纸片容易购买，在一般实验室应用较广。但双纸片法检测结果易受纸片间距影响，且人工判读结果存在主观性，NCCLS已不提倡使用双纸片法。

两种方法的检测结果一致性较好(Kappa值为0.65)，但两种方法对ESBLs的检出率差异有统计学意义(χ2=169.4，P ＜0.01)，仪器法检出率高，满足临床上快速、准确、敏感的检测要求，是更理想的检测方法。

我们对大肠杆菌ESBLs阳性株做药敏试验，结果表明，ESBLs阳性株对氨苄西林、头孢噻吩、庆大霉素等药物高度耐药，与阴性株比较耐药率组间差异有统计学意义。克雷伯菌ESBLs阴性株对氨曲南、头孢呋新、头孢噻肟等抗菌药物耐药率较低，而ESBLs阳性株对氨曲南、头孢呋新、头孢噻肟等的耐药率明显升高，耐药率组间比较差异有统计学意义。本研究未检测到伊米配能耐药株，但目前伊米配能使用较广，应密切监测其耐药株的出现。

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