原发性肝细胞癌拓扑异构酶Ⅱα表达及其与P53和AFP之间的关系*

陈漫霞,陈思东,陈漫容,姚振江,蔡旭玲

(1.广东药学院公共卫生学院,广州510310;2.广州市中山大学附属第二医院,广州510260)

拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡ alpha,TopoⅡα)是在DNA复制和重组中起重要作用的一种核酶,目前多作为肿瘤多药耐药判断指标及抗肿瘤药物的靶点研究[1]。TopoⅡα所介导的耐药和细胞内药物靶酶活性改变或DNA修复机制有关,称非典型多药耐药(atypical MDR,at-MDR)[2]。有研究发现,TopoⅡα表达与 P53表达异常有关,Sandri等[3]研究发现,野生型P53能下调TopoⅡα基因的表达,而突变型P53能增加TopoⅡα基因的表达,导致肿瘤细胞耐药。本研究采用免疫组织化学S-P法检测原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)组织中 TopoⅡα和P53的表达情况,分析TopoⅡα表达与PHC患者的临床特征和P53表达之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2008年 9月至 2009年8月在广州市某两家三级甲等医院择期行原发性肝癌手术病例125例,其中男性110例,女性15例;年龄19～83岁,平均(49.57±12.1)岁。病例均经术后病理诊断为肝细胞癌。按肝癌临床病理分级分为:高分化33例、中分化 69例、低分化 23例。所有病例术前未接受过任何化疗或放疗。

1.2 试剂 TopoⅡα单克隆抗体、P53单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒、DAB显色剂等试剂(北京中杉生物技术有限公司)。

1.3 方法 组织标本来源于PHC患者手术切除的肝癌组织,根据TopoⅡα的表达,将PHC患者分为TopoⅡα阳性组和TopoⅡα阴性组。根据P53的表达,将PHC患者分为P53阳性组和P53阴性组。肝癌组织经固定、脱水、常规石蜡包埋。将石蜡标本连续切片,进行常规苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学染色。检测方法为免疫组化SP二步法,用柠檬酸盐缓冲液高压抗原修复,操作步骤严格按照SP试剂盒说明书进行。用已知阳性片作阳性对照,用磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)代替第1抗体作阴性对照。

1.4 判断标准及分组 TopoⅡα、P53阳性表达主要位于肝细胞的细胞核,呈黄色颗粒。判断标准参照Faggad的评分方法[4],阳性细胞百分率:0%为 0分,＞0～10%为 1分,＞10%～50%为2分,＞50%～80%为3分,＞80%为 4分;按阳性细胞着色强度分为:无色为0分、浅黄色为 1分、黄色为2分、棕黄色为3分;再将阳性细胞百分率和着色强度的得分相乘,得分小于或等于2分者为阴性,得分大于2分为阳性。

1.5 统计学处理 应用SPSS15.0软件进行统计学数据分析,资料采用 EpiData3.1录入,组间比较采用χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TopoⅡα和P53在PHC组织中的表达 在125例PHC组织中,TopoⅡα和 P53阳性率分别为 48.00%(60/125)、32.80%(41/125)。TopoⅡα阳性率高于P53(χ2=8.805,P＜0.05)。

2.2 PHC组织中TopoⅡα表达与临床特征的关系

表1 PHC组织中TopoⅡα表达与临床特征的关系

由表1可见,随着PHC患者年龄的增长 TopoⅡα阳性率有升高的趋势,但不同年龄段患者TopoⅡα阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)。患者血清AFP水平升高,TopoⅡα阳性率高于血清 AFP正常者,差异有统计学意义(P＜0.05)。HBV感染阳性患者,TopoⅡα阳性率高于HBV感染阴性者,但差异无统计学意义(P＞0.05)。TopoⅡα阳性率与肿瘤大小、肝癌细胞分化程度、血清AST水平、肝硬化、肝癌家族史等因素无关(P＞0.05)。

表2 TopoⅡα表达与P53基因的关系

2.3 TopoⅡα表达与 P53基因的关系 在 P53阳性组中 TopoⅡα阳性率(73.17%)高于 P53阴性组(35.71%),差异有统计学意义(χ2=8.805,P=0.000),TopoⅡα表达与 P53表达有相关关系(r=0.352,P=0.000)。见表2。

3 讨 论

TopoⅡα是在DNA复制和重组中起重要作用的一种核酶,目前多作为肿瘤多药耐药判断指标及抗癌药物的靶点研究[1]。本研究结果显示,原发性肝细胞癌组织中TopoⅡα阳性率为48.00%,与张燕等[5]研究结果中的 TopoⅡα阳性率(53.98%)相近。甲胎蛋白(alpha-fetal protein,AFP)是原发性肝细胞癌的相对特异性标志物,其变化对PHC的早期诊断、治疗疗效具有重要作用[6],AFP值的增高常常提示PHC的进展[7]。有研究发现,肝细胞癌患者可表现出血清AFP水平升高,且其水平的高低与肝细胞癌病程具有相关性[8]。本研究结果发现,血清 AFP水平升高者的TopoⅡα阳性率高于AFP水平正常者,差异有统计学意义,说明血清AFP水平与 TopoⅡα表达关系密切。有研究发现,PHC组织中TopoⅡα表达与肿瘤细胞分化程度有关,肿瘤细胞分化程度越低,TopoⅡα表达越高[9-10]。但也有研究认为,TopoⅡα表达与其肿瘤细胞分化程度无关[11]。本研究结果显示,TopoⅡα阳性率与肝癌细胞分化程度无关。随着PHC患者年龄增加,TopoⅡα阳性率有增加的趋势,但不同年龄段TopoⅡα表达差异无统计学意义。TopoⅡα表达与肿瘤大小、血清天门冬酸氨基转移酶水平等因素无关,与文献[11-12]报道相似。

P53是重要的抑癌基因,是目前与化疗敏感性关联最高的基因,不仅与凋亡和DNA修复有关,而且在恶性肿瘤中突变率最高[13]。Sandri等[3]研究发现,野生型 P53能下调 TopoⅡα基因的表达,而突变型P53能增加TopoⅡα基因的表达。但也有学者研究认为在细胞中野生型P53可刺激M DR1启动子,而突变型 P53则无此作用[14]。本研究结果显示,在P53阳性组中TopoⅡα阳性率明显高于P53阴性组,表明了P53基因表达异常与TopoⅡα阳性表达有关,即携带突变型P53基因的PHC组织中TopoⅡα阳性率高于野生型P53者,由此推测TopoⅡα表达可能与P53基因突变的诱导有关。但在P53阴性组中仍有部分PHC病例 TopoⅡα基因阳性表达,这提示除突变型P53基因外还有其他机制调控这个多药耐药基因的表达。

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