2型糖尿病患者外周血淋巴细胞亚群及Treg细胞检测及临床应用

迟 林，李昊淼，许晓风

(首都医科大学附属北京同仁医院，北京100730)

近年来糖尿病(DM)炎症发病学说逐渐形成，认为DM是一种自然免疫和炎症性疾病，是代谢综合征的重要组成。炎症的发生与机体的免疫状态密切相关，已有文献表明2型DM(T2DM)的发病与免疫功能紊乱有关，本研究采用流式细胞测定技术检测T2DM患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及Treg细胞的变化，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2010年3～9月在我院就诊的T2DM患者120例，其中男74例、女56例，年龄35～81岁，均符合1997年美国糖尿病学会诊断标准。经眼科及内科检查，将患者分为有血管病变组68例，男39例、女29例，年龄43～81岁;无血管病变组52例，男30例、女22例，年龄37～68岁;对照组40例为我院健康体检者，男20例、女20例，年龄20～65岁。

1.2 仪器与试剂 美国Beckman Coulter FC500流式细胞仪，CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5，CD16+56-PE/CD3-FITC，同型对照 IgG1mouse FITC/IgG1mouse PE，CD4-PC5，CD25-PE，同型对照IgG2a mouse PE，IgG1mouse PC5，Lysing Solution，PBS均为美国Beckman Coulter公司生产。

1.3 实验方法 所有观察对象空腹取静脉血2 ml于EDTA-K2真空抗凝采血管内，混匀，室温保存。取不同荧光标记抗体各20 μl加入100 μl抗凝外周血中，避光孵育 20min，加入 Lysing Solution 500 μl，避光孵育10min，加入PBS 500 μl避光孵育10min，1 500 r/min离心5min，洗涤2次，加入PBS 1 000 μl，上机检测，记录阳性细胞百分率。

1.4 统计学方法 全部数据经SPSS11.0统计软件处理，数据采以±s表示，两样本均数比较采用t检验，以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

表1 T2DM患者与正常对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果(%，±s)

表1 T2DM患者与正常对照组外周血淋巴细胞亚群检测结果(%，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.05

组别 n CD3+ CD4+/CD3+ CD8+/CD3+ CD4+/CD8+ CD16++CD56+/CD3－CD4+CD25+无血管病变组 52 58.44 ±7.81* 36.56 ±4.56 26.33 ±4.98* 1.31 ±0.44* 19.02 ±6.63* 9.39 ±2.12*伴血管病变组 68 57.65 ±7.35* 36.02 ±4.32 25.47 ±4.26* 1.29 ±0.52* 18.76 ±5.98* 8.99 ±2.03*对照组 40 65.93 ±6.76 37.17 ±5.81 23.66 ±3.66 1.43 ±0.42 22.46 ±6.75 10.43 ±2.07

3 讨论

NK细胞被誉为天然免疫核心细胞，人类NK细胞的特征性表面标志是CD56和CD16分子，不表达CD3分子。NK细胞无需预先致敏直接杀伤靶细胞，有清除病毒感染的生物学活性，活化的NK细胞产生多种细胞因子和趋化因子，如分泌INF、IL-2及TNF等，参与天然免疫和获得性免疫。NK细胞活性降低，直接杀伤靶细胞功能下降，同时，产生的细胞因子减少，减弱了细胞免疫的正调节作用，抑制T细胞的增殖、分化及成熟，使得机体免疫功能降低，对炎症的监视及清除功能减弱。

调节性T细胞是一群具有负调节机体免疫反应的淋巴细胞，起着维持自身耐受和避免免疫过度损伤机体的作用。细胞被认为是天然产生的细胞群，它起源于胸腺，存在于正常机体内。体外实验发现细胞具有低反应性与免疫抑制两大功能［4］，这些抑制功能的发挥是接触式抑制，不是细胞因子依赖性的抑制。它对IL-2、特异性抗原及 APC的刺激呈低反应性，活化的细胞可抑制的T细胞表达IL-2，抑制其的活化与增殖;细胞活化后CTLA-4分子表达增加，影响T细胞介导的免疫调节［5］。IL-2是T细胞生长因子，当IL-2水平降低时，Treg细胞的免疫抑制作用减弱［6］，T细胞增殖受抑制，细胞免疫功能减弱。Salomon等首次证实NOD鼠Treg细胞数目减少和功能缺陷是其进展为DM 的重要因素［7］。

总之，T2DM患者存在细胞免疫功能紊乱。由于免疫功能下降，合并各种感染的机会增加，致残率及病死率增加，DM患者的免疫调节应予重视，加强细胞免疫功能的监测对病情判断、疗效观察有重要意义。

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