CCR7-PI3K/Akt信号传导通路与结肠癌发生发展及浸润转移的关系

王怀志，赵国强，石献洲，张 建

(武警河南总队医院，郑州450052)

趋化因子受体CCR7是一种可以特异地结合趋化因子的G蛋白偶联受体，目前已有多项研究证实其在多种实体瘤中存在过表达［1，2］。磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号途径，是与肿瘤细胞生长、增殖及分化等密切相关的信号转导途径，在促进肿瘤细胞生长、抑制肿瘤细胞凋亡及维持细胞生存等机制中具有重要作用［3］。为了初步研究CCR7促进结肠癌侵袭转移可能存在的分子机制，2003年5月～2008年2月我们检测了40例结肠癌组织及15例正常结肠黏膜组织中CCR7与PI3K、Akt的表达，观察CCR7与PI3K/Akt信号转导通路中关键靶酶的相关性，以期探讨PI3K/Akt信号转导途径与结肠癌之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 40例结肠癌手术切除标本取自武警河南总队医院。其中男23例、女17例，年龄32～77岁，所有病例术前无化疗、放疗及免疫治疗史。

1.2 检测方法 40例标本分别取自无明显坏死癌灶及＞5cm的远端正常黏膜组织，均经40 g/L多聚甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6 μm，分别用于HE及免疫组化染色。40例标本经两位病理学医师同时诊断并证实为腺癌。其中TNM分期Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期14例，Ⅳ期9例;伴淋巴结转移者18例，无淋巴结转移者22例。鼠抗人CCR7单克隆抗体购自美国Santa cruz公司，PI3K(P85α亚型，sc-423)为兔抗人浓缩型多克隆抗体;Akt1/2(sc-1619)为羊抗人浓缩型多克隆抗体;PI3K、Akt及SP免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学采用S-P法，CCR7、PI3K、Akt单抗稀释，稀释倍数均为 1∶100，DAB显色，苏木素复染。染色步骤严格按说明书进行，以PBS液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断标准 每例标本均于高倍镜下随机选取10个视野。评分方法:①按切片中细胞着色深浅评分:0分为细胞无显色;1分为浅黄色;2分为棕黄色;3分为棕褐色。②按阳性细胞数占同类细胞数的百分比评分:＜30%为1分，30% ～70%为2分，＞70%为3分。取①、②两项评分的乘积作为总积分，0～1分为阴性(－)，＞1分为阳性(+)。

1.4 统计学方法 应用SPSS11.0软件进行统计学处理，行χ2检验。以P≤0.05为有统计学差异。

2 结果

2.1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表达 CCR7蛋白阳性表达主要位于肿瘤细胞的胞膜及胞质中，呈浅黄色至深黄色，PI3K、Akt蛋白阳性表达均主要位于肿瘤细胞的胞质中，为浅黄色或深黄色颗粒。正常黏膜组织中CCR7及PI3K、Akt的蛋白表达分别为2例(13.3%)、3 例(20.0%)和 2 例(13.3%)，结肠癌组织中分别为26例(65.0%)、25例(62.5%)和22 例(55.0%)，χ2值分别为9.677、6.276 和6.100，P 值分别为 0.002、0.012 和 0.014。不同组织中CCR7及PI3K、Akt蛋白表达见表1。

2.2 与临床病理因素的关系 CCR7及PI3K、Akt蛋白表达与结肠癌临床病理因素的关系见表1。

表1 CCR7及PI3K、Akt蛋白表达与结肠癌临床病理因素的关系［例(%)］

2.3 相关性分析 CCR7与PI3K、Akt蛋白表达均呈正相关关系(r分别为 0.406、0.390，P 值分别为0.009、0.013)。

3 讨论

CCR7是CC类趋化因子受体家族成员之一，新近的研究结果显示，CCR7主要高表达于某些肿瘤细胞，其配体CCL21、CCL19主要表达在淋巴结、非淋巴组织的内皮淋巴导管、T细胞区等。配体对受体的吸引可以促进CCR7表达阳性的肿瘤细胞循配体浓度梯度定向转移［3］，而且配体与受体结合后可引起细胞内肌动蛋白的聚合，促进肿瘤细胞的伪足形成，进而导致肿瘤细胞浸润转移［4］。

PI3K/Akt信号传导通路与包括肿瘤细胞的生长、增殖、分化、黏附及迁移等密切相关。各种癌基因酪氨酸激酶受体，例如 Src、Ras、Rac、Abl、v-Crk 等均可活化 PI3K［5］。PI3K/Akt通路是 PI3K主要介导的下游信号传导通路，而Akt是PI3K下游最直接的靶蛋白之一。PI3K的活化底物PIP3作为第二信使，与Akt的PH区结合并可使之激活。活化的Akt即磷酸化Akt可以通过磷酸化作用激活其诸多的下游分子，如GSK-3、p70S6k、Bad、caspase-9 等，从而调节细胞的分裂、分化、黏附、迁移以及凋亡等生物学行为［6］。

在本研究中我们发现，结肠癌中CCR7、PI3K及Akt蛋白表达均显著高于正常黏膜对照组，CCR7、PI3K蛋白表达与结肠癌的TNM分期及淋巴结转移密切相关，Akt蛋白表达与淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移者表达增高，这就提示其过表达可能与结肠癌的发生、发展有关。同时，经相关分析，CCR7与PI3K、Akt蛋白表达均呈正相关关系，提示CCR7、PI3K、Akt对结肠癌的发生起正调控作用，CCR7可能上调PI3K、Akt的表达并参与肿瘤进展中Akt的激活。

综上所述，在结肠腺癌侵袭及转移过程中，CCR7的表达调控有可能与PI3K/Akt信号途径有相关性，可能是与Akt磷酸化活性相关。PI3K/Akt信号通路的激活可能参与了CCR7介导的结肠癌的浸润、转移过程。因此，对CCR7和PI3K/Akt通路的深入研究有可能为结肠腺癌新治疗靶点提供一定的理论依据。

［1］Wang J，Seethala RR，Zhang Q，et al.Autocrine and paracrine chemokine receptor 7 activation in head and neck cancer:implications for therapy［J］.J Natl Cancer Inst，2008，100(7):502-512.

［2］Kabashima K，Shiraishi N，Sugita K，et al.CXCL12-CXCR4 engagement is required for migration of cutaneous dendritic cells［J］.Am J Pathol，2007，171(4):1249-1257.

［3］Anis MM，Fulton SA，Reba SM，et al.Modulation of pulmonary dendritic cell function during mycobacterial infection［J］.Infect Immun，2008，76(2):671-677.

［4］Yan C，Zhu ZG，Yu YY，et al.Expression of vascular endothelial growth factor C and chemokine receptor CCR7 in gastric carcinoma and their values in predicting lymnodemetastasis［J］.World J Gastroenterol，2004，10(6):783-790.

［5］Dong Z，Huang C，Ma WY.PI-3 kinase in signal transduction，cell transformation，and as a target for chemoprevention of cancer［J］.Anticancer Res，2001，19(5A):3743-3747.

［6］Chang F，Lee JT，Navolanic PM，et al.Involvement of PI3K/Akt pathway in cell cycle progression，apoptosis，and neoplastic transformation:a target for cancer chemotherapy［J］.Leukemia，2003，17(3):590-603.