PSCA基因多态性与青海地区藏族胃癌遗传易感性的初步研究

沈国双，赵久达* ，耿排力，王丽娟，曹成珠

(1青海大学附属医院，西宁810000;2青海大学医学院)

前列腺干细胞抗原(PSCA)来源于前列腺，在细胞信号传导，细胞与细胞间黏附，干细胞、祖细胞自我更新(抗凋亡)或增殖等功能方面起重要作用。有报道，PSCA基因多态性与日本弥漫型胃癌易感性相关［1］。中国为胃癌高发区，而青海省在全国发病率最高，其中藏族胃癌发病率明显高于其他民族［2］。2009年1月～2010年12月，我们检测了60例青海藏族胃癌患者PSCA基因rs2976392位点多态性，探讨其与胃癌遗传易感性的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2009～2010年住院、无血缘关系的藏族胃癌患者60例(观察组)，男42例，女18例;年龄(53.2±11.3)岁。均经胃镜或手术病理检查证实诊断;未行放化疗;低分化腺癌48例，高、中分化腺癌12例。另选取青海省海南藏族自治州60例正常藏族个体作为对照组。两组年龄、性别有可比性。标本取材后立即置于液氮中速冻，移至－70℃冰箱保存。

1.2 PSCA基因多态性检测

1.2.1 基因组DNA提取、扩增及鉴定 两组均采集静脉血2 ml，EDTA抗凝，3%明胶吸附红细胞，10%SDS破膜，酚—氯仿法提取白细胞基因组DNA，经纯度鉴定后－20℃保存备用。以PSCA基因组序列为依据，设计PSCA基因rs2976392位点PCR引物。序列为:F5-ctggccatctgtccgcagct-3/R5-cagatggaggaggatggctgga-3，产物长度352 bp。PCR反应体系及扩增条件:PCR反应总体系为25 μl，含100 ng/ml DNA 模板 2 μl，10 × 缓冲液 215 μl，25 mmol/L MgCl22 μl，2.5 mmol/L dNTP 2 μl，10 μmol/L 引物正反向各 1 μl，5 U/μl Taq DNA 聚合酶 0.25 μl。反应在温度梯度PCR仪进行，条件为:94℃预变性3min，95℃变性30 s，72℃延伸45 s，进行35个循环，72℃后延伸10min。PCR产物2 μl行2%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物。

1.4 基因组多态性分析 变性高效液相色谱法(DHPLC)分析基因型:5 μl PCR产物在PCR仪内95℃变性3min，缓慢退火至45℃，以形成异源和同源双链DNA分子混合物样品入进样室。检测温度以WAVEMAKER 4.0软件包和网站http://insertion.stanford.edu/melt.html提供的预测温度为参照，通过预实验获得各位点最适检测温度，洗脱液(A:0.1 mmol/L TEAA 含三乙胺乙酸盐;B:0.1 mmol/L TEAA含25%乙腈)按线性递增方式以0.9 ml/min的流速洗脱，260 nm波长处读取吸光值，形成峰型;采用部分变性法确定PSCA基因rs2976392位点基因型。

1.5 统计学方法 采用用SPSS11.0软件行统计学处理。以χ2检验确定两组间三个位点基因型频数分布的差异。以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组PSCA基因rs2976392位点均为G/G、G/A、A/A三种类型;其频率见表1。由表1可见，胃癌组G/A基因型频率明显高于对照组，提示G/A基因型者胃癌的易感性高于另两型者。

表1 两组PSCA基因型频率比较

3 讨论

PSCA基因cDNA由660 bp组成，编码含123个氨基酸的蛋白，与干细胞抗原-2(SCA-2)有30%的同源性。PSCA基因位于染色体8q 24.2(此区为大多数前列腺癌的等位癌基因扩增区)，严格表达于基底细胞，研究证实，PSCA在多数人类前列腺癌组织中过度表达，是鉴别前列腺切除标本中正常组织与前列腺癌组织重要的标志物［3］。

自2008年千年基因组计划癌症研究组报告PSCA的基因多态性与日本弥漫型胃癌易感性相关之后，研究者在韩国对上述结果进行了验证:研究对象为457例弥漫型胃癌患者、418例肠型胃癌患者和390例对照组，结果显示，PSCA rs2976392和rs2294008与弥漫型胃癌显著相关，与肠型胃癌相关性较弱;PSCA在胃上皮细胞分化过程中表达，体外实验表明其具有细胞增殖抑制作用，但在胃癌细胞中“沉默”。认为该基因的多态性可能参与调节胃上皮细胞增殖，并影响弥漫型胃癌易感性［4］。

本研究表明，青海地区藏族人群胃癌与PSCA基因rs2976392位点基因多态性呈相关性，G/A基因型者患胃癌的危险性较高。PSCA基因影响胃癌的发病可能与其参与调节胃上皮细胞增殖有关，因为研究表明，PSCA mRNA在正常胃黏膜中呈高表达(表达主要位于胃腺体峡部)，而胃癌组织中则检测不到其表达。我们的研究结果与Saeki等的研究一致，提示携带PSCA基因rs2976392位点G/A基因型可能是该地区胃癌的遗传易感因素;PSCA基因可作为该人群胃癌的标记物。目前我们正在进行PSCA基因其它单核苷酸多态性与胃癌遗传易感性及扩大其他人群的研究。

［1］Study Group of Millennium Genome Project for Cancer，Sakamoto H，Yoshimura K，et al.Genetic variation in PSCA is associated with susceptibility to diffuse-type gastric cancer［J］.Nat Genet，2008，40(6):730-740.

［2］赵久达，李豪，曹成珠，等.1962例胃癌流行病学分析［J］.现代预防医学，2008，35(3):439-440.

［3］Elsamman EM，Fukumori T，Tanimoto S，et al.The expression of prostate stem cell antigen in human clear cell renal cell carcinoma.a quantiative reverse transcriptase-polymerase chain reaction analysis［J］.BJU Int，2006，98(3):668-673.

［4］Saeki N，Sakamoto H，Yoshida T.Genome-wide association study of gastric cancer and GeMDBJ database［J］.Nippon Rinsho，2009，67(6):1227-1232.