平喘汤对支气管哮喘大鼠肺组织形态学及肺指数的影响

冯高华 朱 虹 孙 峰 贾永良 张翠萍

1扬州大学医学院（江苏扬州225001）2江苏省张家港市中医院（江苏张家港215600）

本研究在建立大鼠支气管哮喘模型的基础上，通过观察临床经验方平喘汤对大鼠支气管和肺组织及肺指数的影响，以探讨其对支气管哮喘组织学的作用机制，为中医药防治支气管哮喘提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康清洁级SD大鼠，48只，雌雄不拘，（225±10.711）g，南京医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（苏）2008-0004。饲养于室温18～22℃环境中，自由饮水饮食1周。

1.2 仪器 WH-1型医用超声雾化器，无锡市第四机床电器厂；莱卡RM 2245切片机。

1.3 药物制备 平喘汤由炙麻黄、杏仁、葶苈子、苏子、莱菔子、白芥子、枳壳、桔梗、地龙、僵蚕、五味子等药物组成。药物均由江苏省苏北人民医院中药房提供，口服液由扬州大学医学院中西医结合研究所制备，药物质量浓度为每毫升含生药2g。药液置于250mL盐水瓶中，4℃保存备用。对照药物博利康尼以生理盐水溶解，备用。

1.4 动物模型制备 参考文献[1]，将模型组及各治疗组大鼠腹腔注射10%卵蛋白1mL和氢氧化铝干粉100mg致敏。2周后予超声雾化吸入1%卵蛋白激发，隔日1次，每次30min，共激发2周，即可观察到大鼠呼吸加快、点头呼吸及站立不稳等表现，示造模成功。正常对照组用生理盐水代替抗原液进行注射和雾化吸入。

1.5 分组与给药 按随机数字法将其分为正常对照组、模型组、平喘汤低剂量组（0.7mL）、平喘汤中剂量组（1.3mL）、平喘汤高剂量组（2.6mL）、阳性药物对照组（0.1mL），每组8只。各组均从实验第3周起灌胃给药，正常组及模型组给予1.3mL生理盐水，每日1次，连续4周。

1.6 标本采集及检测 参考文献[2]方法，准确称取大鼠体质量后，颈椎脱位法处死大鼠，立即打开胸腔，无菌条件下取出肺脏，称湿质量测定肺指数，肺指数=肺脏总湿质量/实验后体质量。取右肺中叶，以10%甲醛固定。把固定好的组织块入梯度酒精脱水，然后常规透明、浸蜡、包埋。将包有组织的蜡块用莱卡切片机切为 5μm的薄片，贴于载玻片上，脱蜡后进行常规 HE染色后镜检、摄片，捷达801图文分析系统分析。

1.7 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件。所有计量资料均用（±s）表示，采用单因素方差分析（LSD检验）比较各组间差异。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 肉眼观察 正常组大鼠肺脏外观正常，颜色淡红，支气管黏膜淡红。模型组大鼠肺脏充血、肿大，其中2只大鼠肺脏颜色深红；模型组大鼠气管切开，可见支气管、细支气管黏膜充血，有较多黏痰，其中1只大鼠支气管中有黏液栓。各治疗组大鼠肺脏、支气管黏膜充血情况均较模型组为轻，支气管中有少许清稀痰液。在实验过程中，所有大鼠均无死亡。

2.2 各组大鼠支气管-肺组织形态学变化 见图1。正常组大鼠肺组织偶见少量炎细胞浸润。模型组大鼠可见支气管壁增厚，杯状细胞及黏膜皱襞增多，大量炎细胞浸润，纤毛上皮细胞脱落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分断裂。平喘汤低剂量组淋巴细胞浸润，纤毛上皮细胞脱落，支气管壁及肺泡壁增厚，气管腔内大量分泌物潴留，肺泡壁增厚，杯状细胞增多。平喘汤中剂量组：淋巴细胞浸润，管腔见炎性分泌物，黏膜皱襞增多，支气管壁及肺泡壁稍增厚。平喘汤高剂量组：淋巴细胞浸润，管腔少量分泌物潴留。与模型组比较，各治疗组淋巴细胞等炎性细胞浸润有不同程度减少，肺组织充血、水肿现象减轻，支气管管壁和肺泡壁增厚程度减轻。平喘汤剂量越高，则支气管腔内分泌物潴留越少。

图1 各组肺组织病理组织图（HE染色）

2.3 平喘汤对哮喘大鼠肺指数的影响 哮喘组及各治疗组大鼠肺指数均高于正常组，差异显著（P＜0.05）；各治疗组大鼠肺指数均低于模型组，有显著差异（P＜0.05）；与阳性药物对照组相比，平喘汤高剂量组大鼠肺指数无差异（P＞0.05）；平喘汤中、低剂量组大鼠肺指数显著高于阳性药物对照组（P＜0.05）。

表1 各组肺指数比较 （±s）

表1 各组肺指数比较 （±s）

与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与阳性药物对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。

组 别 n 肺脏指数（×10-3）正常对照组 8 5.64±0.032模型组 8 8.73±0.115**阳性药物对照组 8 6.49±0.087*△平喘汤高剂量组 8 6.02±0.184*△△平喘汤中剂量组 8 7.93±0.312**△#平喘汤低剂量组 8 8.52±0.143**△##

3 讨 论

支气管哮喘的本质是由多种炎性细胞、多种炎性介质和多种细胞因子参与的慢性气道炎症[3]，气道炎症是气道高反应性（AHR）的重要基础。气道炎症学说是支气管哮喘的的主要发病机制。炎性细胞如淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的激活、浸润在此过程中起着非常重要的作用。气道炎症的形成与Ⅰ型变态反应、上皮损伤以及神经炎症有关。通常情况下，机体内的Th1/Th2处于相对恒定状态，哮喘发作时Th1细胞功能下降，Th2细胞功能上升，因而产生大量的炎性细胞和细胞因子。正常气道上皮为假复程纤毛柱状上皮细胞，其间散在着杯状细胞。气管壁增厚、杯状细胞增多、上皮细胞损伤，是支气管哮喘气道持续性损伤和结构改变即气道重构的病理学特征。本研究应用卵蛋白作为致敏原复制大鼠哮喘模型，致使大鼠出现了气道炎症及气道的高反应性，因此模型组大鼠可见支气管壁增厚，杯状细胞及黏膜皱襞增多，大量炎细胞浸润，纤毛上皮细胞脱落，基底膜暴露，肺泡壁部分增厚，部分断裂。由于致敏原导致大鼠肺部变应性炎症，因此肺脏充血、肿大，湿重增加，而由于气道的高反应性，大鼠吸收障碍，营养不足，故而体质量下降，所以肺指数增高。

中医学认为，支气管哮喘属中医学“哮证”、“喘证”等范畴，其基本病理因素是痰浊内停（即夙根），其发作是因为外邪触动伏痰，痰随气升，气因痰阻，痰气交阻，壅塞气道，肺管因而狭窄所致。平喘汤是以三子养亲汤和三拗汤为基础方，加减而成。三子养亲汤出自《韩氏医通》，由苏子、莱菔子、白芥子组成，《本朝纲目》谓之有“利气豁痰，除寒暖中，消肿止痛”之功效。有研究认为，痰浊内停与支气管哮喘的气道炎症以及相关炎性细胞和细胞因子有关。三子养亲汤化痰实际上就是减轻气道炎症，改善气道高反应性。三拗汤源自《太平惠民和剂局方》，具宣肺解表，止咳平喘之效。平喘汤方中麻黄入肺经，可外开皮毛之郁闭，畅通肺气，善于平喘；杏仁味苦降泻，能肃降兼宣发肺气而能止咳平喘；两药相配，能降泻上逆之肺气，而起到平喘的作用。葶苈子专泄肺中水饮及痰火而平喘；五味子上敛肺气，下滋肾阴，为治疗久咳虚喘的要药。枳壳联合桔梗主治痰滞胸痞，地龙、僵蚕有通络解痉平喘的作用。现代药理研究认为，麻黄含麻黄碱和伪麻黄碱，均有缓解平滑肌痉挛的作用；杏仁含苦杏仁苷，可在下消化道分解后产生少量氢氰酸，能抑制咳嗽中枢，而起到镇咳平喘的作用；僵蚕有抗组胺作用，可抑制气道炎症，降低气道高反应性。全方寒温并用，降气祛痰，止咳平喘。因此以高、中、低剂量平喘汤作用于哮喘大鼠模型后，病理可见各治疗组淋巴细胞等炎性细胞浸润有不同程度减少，肺组织充血、水肿现象减轻，支气管管壁和肺泡壁增厚程度减轻，少量嗜酸粒细胞浸润，支气管腔内分泌物潴留减少，且高剂量组病理变化程度最为明显；各治疗组大鼠肺指数均低于哮喘组，有显著差异，且平喘汤高剂量组低于中、低剂量组。说明应用高剂量的平喘汤对支气管哮喘大鼠在降低气道高反应性、减轻气道炎症以及缓解气道重构等方面有积极的作用。

综上所述，平喘汤尤其是高剂量的平喘汤，在降低气道高反应性、减轻气道炎症等方面有积极的作用，而平喘汤对支气管哮喘发病过程中抑制杯状细胞增殖、减轻气道重构等基于分子水平的作用机制，尚需更进一步研究。

[1]吕国平，崔德健，郭英江，等.介绍一种建立大鼠哮喘模型的实验方法[J].中华结核和呼吸杂志，1995，18（6）：377-378.

[2]王晓红，杨牧祥，于文涛，等.温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠病理形态学的影响及一氧化氮和内皮素的调节作用 [J].中国中西医结合杂志，2009，29（5）：435-438.

[3]钟南山.支气管哮喘—基础与临床[M].北京：人民卫生出版社，2006：249-250，342，438.