蛇床子配方颗粒质量标准研究

陈培胜 廖彩震 张文惠 朱月信

蛇床子为伞形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果实，具有燥湿祛风，杀虫止痒，温肾壮阳的功能，用于阴痒带下，湿疹瘙痒，湿痹腰痛、肾虚阳痿，宫冷不孕。蛇床子配方颗粒由蛇床子提取、浓缩、干燥、制粒而成，为有效地控制蛇床子配方颗粒的质量，安徽省中药配方颗粒工程技术研究中心按照国家食品药品监督管理局颁发的《中药配方颗粒管理暂行规定》通知要求[1]，借鉴中国药典[2]蛇床子项下的鉴别和含量测定方法及配方颗粒薄层色谱鉴别方法研究[3]，采用薄层色谱法对蛇床子配方颗粒进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对蛇床子配方颗粒的主要活性成分蛇床子素进行定量分析。结果表明，该方法简便可行，灵敏度高、重复性好，能有效地控制蛇床子配方颗粒的质量，保证配方颗粒在不具备中药饮片外形后临床用药的安全有效。

1 仪器、试剂与样品

Agilent1200色谱系统(G1611A型四元泵，G1329A型自动进样器，G1314B型VWD检测器，Agilent化学工作站)；BT25S型电子分析天平(德国赛特利斯)；FA2104SN型电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；UV-8三用紫外仪(无锡科达仪器厂)；Hu-10260B型超声清洗器(天津恒奥科技发展有限公司)；硅胶GF254薄层板(青岛海洋化工厂)。

乙腈(色谱纯，天津市四友精细化学品有限公司)；乙醇(分析纯，郑州派尼试剂厂)；纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司)；其余试剂均为分析纯。

蛇床子素对照品(供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110822-200305)；蛇床子对照药材，购自安徽亳州中药材市场，经鉴定为伞形科植物蛇床子[Cnidiummonnieri(L.) Cuss]的干燥成熟果实(由安徽中医学院生药教研室俞年军教授鉴定)；蛇床子配方颗粒(安徽济人药业有限公司、安徽中药配方颗粒工程技术研究中心提供)。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

取蛇床子配方颗粒粉末0.3 g，加乙醇5 ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。另取蛇床子对照药材4 g，加水100 ml，煮沸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇5 ml，同法制成对照药材溶液。再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各6 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G 薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—正己烷(3∶3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图1。

图1 蛇床子配方颗粒薄层色谱图(365 nm)

2.2 蛇床子素含量测定

2.2.1 色谱条件 Agilent HC-C18色谱柱(4.6×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈—水(65：35)；检测波长：322 nm；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；理论板数按蛇床子素峰计算应不低于3000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取恒重的蛇床子素对照品适量，加乙醇制成每l ml中含20 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取蛇床子配方颗粒约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 ml，密塞，称定重量，放置2小时，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30分钟，自然冷却，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量。精密量取上清液5 ml，置10 ml的量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 测定法 分别精密吸取蛇床子素对照品溶液、供试品溶液各5 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见图2。

(a)蛇床子素对照品

(b)蛇床子配方颗粒供试品

2.2.5 线性关系与范围的考察 精密吸取蛇床子素对照品溶液0.5、1、2、3、5 μl进行色谱测定，按上述2.2.1色谱条件测定峰面积，以蛇床子素含量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程为Y=29.632X+0.295,相关系数r=0.99999，结果表明在2.0～20.0 μg/ml范围内蛇床子素浓度与峰面积积分值有良好的线性关系。

2.2.6 稳定性试验 取同一蛇床子素对照品溶液与蛇床子配方颗粒供试品溶液，分别测定5次，每次间隔1小时，结果表明蛇床子素对照品与蛇床子配方颗粒供试品溶液在4小时内稳定，稳定性良好，峰面积RSD值分别为0.13%和0.31%。

2.2.7 精密度试验 取蛇床子素对照品溶液，连续5次重复进样，得到峰面积积分值并计算其RSD为0.23%，结果表明仪器精密度良好。

2.2.8 重复性试验 取同一供试品5份，按供试品制备与测定方法进行重复性试验样品制备并测定，得到供试品的蛇床子素含量为1.53 mg/g，RSD为1.77%，结果表明该方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 称取已知含量的样品共5份，分别精密加入蛇床子素对照品溶液各0.1 ml，按供试品制备与测定方法进行回收率试验样品溶液的制备并测定，结果见表1。得到的蛇床子素回收率在98%～102.2%之间，说明样品制备方法和检测方法均可行。

表1 回收率试验结果

2.2.10 样品含量测定

精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μl，分别注入液相色谱仪，测定，外标法计算，结果见表2。

表2 10批样品中蛇床子素含量测定结果

批号含量(mg/g) 批号 含量(mg/g) 0812411.7980812461.8380812421.9030812471.8940812431.8550812481.8880812441.9130901011.8260812451.8610901021.797

3 讨论

蛇床子化学成分主要包括挥发油及香豆素类化合物等[4]，其中香豆素类化合物蛇床子素为其主要活性成分，故本实验以蛇床子素含量作为控制指标。

蛇床子配方颗粒为单味中药浓缩颗粒，根据《中药配方颗粒质量标准起草说明的编写要求》，鉴别方法尽量保持与药典的一致性[1]。本试验薄层色谱鉴别和含量测定方法依据中国药典一部蛇床子药材鉴别和含量测定项下方法进行，为了与配方颗粒的制备工艺一致,对照药材溶液的制备采取水煮提取,水提液蒸干再用乙醇提取的方法。得到的薄层色谱图斑点清晰、背景干扰少，灵敏度高、重现性好；液相色谱图蛇床子素的对称性、分离度良好。蛇床子配方颗粒质量标准研究未见文献报道，该研究经过反复实验，最终确定以药典药材鉴别方法建立蛇床子配方颗粒鉴别方法，取得较好的效果，对中药配方颗粒质量标准规范化研究具有示范意义。

根据蛇床子药材含量测定结果10批蛇床子配方颗粒含测结果、中试生产投料量、出膏率等指标，可暂定蛇床子配方颗粒每袋装0.6 g，相当于10 g饮片，每袋含蛇床子素不得少于0.75 mg。

[1] 国家药品监督管理局.关于印发《中药配方颗粒管理暂行规定》的通知(国药监注[2001]325号).2001-07-05.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社，2005：219-220,295-266.

[3] 陈培胜，廖彩震，成守玲,等.白花蛇舌草配方颗粒薄层色谱鉴别方法研究.环球中医药，2010,3(5)：347-348.

[4] 郑虎占，董泽宏，佘靖. 中药现代研究与应用[M]. 北京：学苑出版社，1997: 4133.