高效液相色谱法测定肾炎灵片中栀子苷含量

李 岩

（吉林通化市人民医院药剂科，吉林 通化 134001）

肾炎灵胶囊收载于《中华人民共和国卫生部药品标准. 中药成方制剂（第十三册）》。通化金马药业集团股份有限公司按照国家药品监督管理局颁布的“药品注册管理办法”中中药注册分类8“改变国内已上市销售药品剂型”将胶囊剂改为片剂，对其进行研制和生产。由旱莲草、女贞子、栀子、地黄等十七味中药组成，具有清热凉血，滋阴养肾的功效。用于慢性肾小球肾炎。 原标准未制定含量测定的方法，为有效控制药品质量，笔者用HPLC法对栀子中栀子苷进行了含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；BS124S十万分之一电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；AE240型分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（15:85）；流速：0.8mL/min；检测波长为238nm；柱温：25℃。理论板数按栀子苷峰计应不小于2000。

2.2 溶液的制备

精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，摇匀，即得。

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，混匀，取细粉约1g，精密称定，置具塞瓶中，精密加入甲醇50mL，超声（250W，233KHz）处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，即得。[1]

2.3 方法学考察

阴性对照试验：取不含栀子的阴性样品，按样品的含量测定方法制备阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样测定，得样品、对照品、阴性样品色谱图（图1）。结果在HPLC图谱上，在与栀子苷对照品峰相同位置，样品有色谱峰出现，色谱峰与其相邻峰能完全达到基线分离。阴性样品在栀子苷峰相应位置上无干扰。

线性关系考察：精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含56μg的溶液，分别精密吸取1、4、8、12、18μl按上述条件测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，作图，结果呈良好的线性关系，回归方程为：回归方程 Y＝806152.4163X－2926.1005 γ＝0.99997，结果表明，栀子苷进样量在0.056～1.008μg范围内线性关系良好。

精密度试验： 精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，测定栀子苷峰面积积分值。其结果的RSD=0.24%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验： 取同一对照品及供试品溶液分别进样，于0、4、8、12、24h测甘草酸峰面积。其结果的RSD为1.35%，表明供试品溶液在24h内稳定。

加样回收试验： 精密量取6份已知栀子苷含量的样品0.5g，分别精密加入栀子苷对照品溶液适量，按样品溶液制备项下的方法提取、测定，计算回收率。结果见表1。

平均回收率为100.93%，RSD=1.16%（n=6），表明本法准确可行。

2.4 样品含量测定

根据上述色谱条件，依法测定样品3批，每批测定2次，结果3批样品中栀子苷的含量分别为0.875 mg/片，0.917 mg/片，0.885 mg/片。（n=2）。

3 讨 论

3.1 提取方法的选择：采用超声和回流两种方法进行提取，结果表明，超声提取20min即可将样品中栀子苷提取完全，且杂质较回流提取少。

3.2 测定波长的选择：取栀子苷对照品的甲醇溶液，在波长200～400nm范围内扫描，栀子苷在238nm波长处有最大吸收。参考《2005年版药典》栀子的含量测定，规定测定波长为238nm。

表1 加样回收率试验结果

3.3 本试验结果表明，HPLC法测定肾炎灵片中栀子苷的含量，方法简便、灵敏、重现性好，适宜生产中应用。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M]..北京:化学工业出版社,2005:173.