黄芪桂枝五物颗粒对光化学诱导脑血栓形成大鼠的影响试验

2011-06-11 03:38殷小杰李德凤宗桂珍
中国中医基础医学杂志 2011年8期
关键词:五物脑梗塞桂枝

沈 欣,李 文,殷小杰,李德凤,宗桂珍

(中国中医科学院中药研究所,北京 100700)

黄芪桂枝五物汤是《金匮要略》中治疗血痹证的方剂,其所治疗血痹证的基本病机是阳气不足、瘀血阻络。而其益气温经、活血通络治则符合中风病恢复期和后遗症期的基本治法,临床中也有很多报道,因此探讨本方的药效特点,是进一步开发重点工作之一。故此我们观察了本方对光化学诱导脑血栓形成大鼠影响的试验中对梗塞面积、血管损伤区、血小板聚集及血浆t-PA等各项指标的影响变化,以探讨其可能的作用机制。

1 材料

1.1 药物

黄芪桂枝五物颗粒由北京医科大学药学院应用药物研究所提供,为黄棕色粉末(批号010903)。阳性对照药为龙芪溶栓胶囊,山东华能制药厂(批号010215)。

1.2 动物

Wistar大鼠,体重190g±20g,购于北京医科大学动物中心(动物合格证号医动字01-3056),饲养于本所动物饲养中心。

1.3 试剂和仪器

化学诱导剂:化学荧光染料四碘四氯荧光素二钠(rose bengal RB),分子量为1017.60,分析纯(北京化工厂,批号810627)。取RB溶于0.9%生理盐水中,浓度为5.0%,经0.45 μm超滤后遮光低温保存备用。光源采用北京泰克仪器公司生产的光导纤维冷光源。在光导纤维出口加滤光片,使出射光波波长为540±30nm。光导纤维输出口至照射区距离为2mm,光束投射中心直径为0.4cm,光照强度为5.6×105cd/m2。大鼠颅脑定位仪(北京卓立汉光仪器有限公司),t-PA发色底物试剂盒(太阳生物技术公司,批号000901)酶标仪,Bi0-Rad Laboratories,Inc.450。ScanWizard 扫描软件及清华紫光扫描仪。

2 方法

2.1 分组和给药

大鼠72只共分6组,每组12只,模型组、假手术组、阳性药组0.162g·kg-1,黄芪桂枝五物颗粒0.828、0.414、0.207g·kg-13 个剂量组。ig,模型组、假手术组ig给予等量的水溶液,1次/d,连续15 d,容积为 10ml·kg-1。

2.2 手术方法

手术前1 h动物灌胃给药1次后,用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉动物,头顶备皮,常规皮肤消毒,沿头正中切口暴露颅骨,使用眼科异物针,小心剥离右侧附着于顶骨处的软组织及肌肉,电凝止血,完全暴露右侧顶骨,使用自制微型开颅钻(3V、1W),钻头为直径0.5cm平头金钢砂磨钻,以矢状缝右侧0.3cm、冠状缝后0.3cm为中心开直径0.6 cm的颅窗,去除颅骨表层骨板及髓层,保留下层骨板及硬脑膜,磨孔过程中生理盐水反复冲洗创面,消除操作过程中产生的机械热及残骨渣。股iv 5%RB(125mg·kg-1),时间为1min。注射 RB结束后5min,移入光导纤维照射10min,位置为颅窗脑区。整个手术过程中,环境温度保持于25.0℃ ±1.0℃。

2.3 观察指标

动物于光照结束后10min,假手术组于注射RB结束后25min,右侧眼眶取血共 2mL,测定 t-PA、红细胞压积及血浆纤维蛋白原含量。取血后立刻经舌下静脉注射1%Evans Blue(Fluka,分析纯)1mL,1h后断头取脑,去除小脑及嗅球,采用 ScanWizard扫描软件及清华紫光扫描仪,将脑部图像扫描输入计算机。用图像分析软件计算梗塞灶(红染区)及VIP(蓝染区)的范围(占右半脑相对面积的百分比)。血小板聚集的测定:因本实验动物注射RB染料,无法采用常规光密度法测定。经腹主动脉采枸橼酸钠(3.8%,1∶9)抗凝血后,用显微观察法评价ADP诱导的血小板聚集。显微镜放大倍数为150,ADP诱导富血小板血浆的终浓度为0.7μmol·mL-1。记分标准定为视野内无聚集为0,所见最大聚集体中血小板数 <5记为 1,5~10记为 2,10~20为 3,>20为4。

2.4 统计学处理

各组间方差齐性检验采用F检验,各组间均数比较采用t检验。指标间的线性相关性用Spearman及双侧显著性检验。

3 结果

表1 黄芪桂枝五物颗粒对大鼠脑梗塞及血管损伤血小板聚集的影响(s,n=12)

表1 黄芪桂枝五物颗粒对大鼠脑梗塞及血管损伤血小板聚集的影响(s,n=12)

注:与模型组比较:1)P<0.05,2)P<0.01

组 别 剂量g·kg-1梗塞面积红区占右半脑%血管损伤区面积蓝区占右半脑%血小板聚集记分“模 型 组 —16.8±3.28 20.4±4.97 2.17±0.94假手术 组 — 无梗塞 无损伤 0.75±0.622)龙芪溶栓组 0.162 14.8±3.13 17.9±3.62 1.58±1.00芪桂颗粒组 0.828 12.2±2.502)18.0±2.84 1.25±0.971)0.414 13.1±2.142)16.9±2.501) 1.25±1.061)0.207 11.5±2.192)18.8±3.041)1.33±1.07

表2 黄芪桂枝五物颗粒对大鼠脑梗塞各项血流变指标的管影响(s,n=12)

表2 黄芪桂枝五物颗粒对大鼠脑梗塞各项血流变指标的管影响(s,n=12)

组 别 剂量g·kg-1血浆t-PA活性IU·ml-1红细胞压积%纤维蛋白原mg·dl -1- 0.40±0.24 45.3±4.81 105±33假 手 术 组 - 0.74±0.42 45.2±4.88 140±331)龙芪溶栓组 0.162 0.57±0.37 45.8±4.09 136±47芪桂颗粒组 0.828 0.79±0.372)45.7±4.03 139±431)0.414 0.75±0.461) 45.3±2.72 142±52模型组0.207 0.51±0.28 44.7±3.28 136±42

以上结果显示,模型组与假手术组之间,除红细胞压积无差异外,其他各项指标均有显著性差异,说明大鼠脑梗塞和血管损伤模型成功。黄芪桂枝五物颗粒能明显减少模型大鼠的脑梗塞面积,抑制血小板聚集,并维持纤维蛋白原含量在较高水平。

4 讨论

在中风病的恢复期和后遗症期,多是虚实夹杂,既有阳气不足又见瘀血阻络。根据此期的病机特点,在治疗上宜扶正祛邪、益气活血为常用之法。黄芪桂枝五物汤能益气温经、和经通痹,其中黄芪为君药,大补元气,使血行表固;赤芍为臣药,活血化瘀、通络止痛。与黄芪配伍,一方面可以共奏益气活血之功,另一方面使黄芪补益而无呆滞之虞,赤芍活血而无伤正之虑。佐桂枝以温经通阳,助黄芪、赤芍通达经络而运行气血,佐生姜以宣发阳气,气行而血不滞;大枣益脾,以助气血生化之源。诸药合用,可以益气温经、活血通络,符合中风病恢复期和后遗症期的基本治法。在我们试验中发现,本药对于脑梗塞的发生有相当显著的抑制作用,对于血管损伤的发生也有一定抑制作用,表现为蓝区面积的减小。黄芪桂枝五物颗粒对于血小板聚集有明显抑制作用,纤维蛋白原含量也较模型组为高。因此,黄芪桂枝五物颗粒的抗血小板聚集作用可能是其抗脑梗塞和血管损伤的主要机制,从而使给药组血栓形成的程度低于模型组。此外,黄芪桂枝五物颗粒使t-PA维持正常水平,也是限制血栓发展的重要因素。

[1]张仲景.伤寒论[M].上海:上海科技出版社,1970:121.

[2]韩 东,廖福龙,李 文,等.冷光源光化学诱导局灶性脑梗塞及血管损伤半暗带大鼠模型[J].中国微循环杂志,2002,15(1):71.

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