RP-HPLC法测定虚寒胃痛胶囊中芍药苷的含量

梁 侃 侯 峰

（1 铁岭卫生职业学院，辽宁 铁岭 112008；2 辽宁省食品药品检验所，辽宁 沈阳 110023）

“虚寒胃痛胶囊”是辽宁本溪三药有限公司生产的独家品种，原收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十六册，由白芍、党参等八味中药材精制而成，具有温胃止痛，健脾益气。用于脾虚胃弱，胃脘隐痛，喜温喜按，遇冷或空腹加重，十二指肠球部溃疡，慢性萎缩性胃炎等症。原标准中质量控制项目单一，无含量测定项。本实验建立了对处方中白芍的芍药苷含量测定方法，更为科学合理有效地控制了药品质量，提高了药品质量标准。

1 仪器与试剂

1.1 试验仪器

岛津2010CHT高效液相色谱仪，岛津2010紫外检测器。

1.2 试验试剂

甲醇为色谱纯，水为二次重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取芍药苷对照品12.55mg，精密称定，加甲醇制成每1mL含50.20µg的溶液，即得。

2.2 供试品溶液制备方法考察

2.2.1 提取溶剂选择

A：参考《中国药典》2005年版一部所收载的“虚寒胃痛颗粒”含量测定方法[1]，制定：取10粒本品内容物，混匀，研细，取约0.6g，精密称定，置100mL量瓶中，加水80mL，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。B：参考《中国药典》2005年版一部所收载的“白芍”含量测定方法，制定：取10粒本品内容物，混匀，研细，取约0.6g，精密称定，置100mL量瓶中，加50%乙醇80mL，超声处理（功率250W，频率33kHz）30min，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表1。

表1 提取溶剂考察结果

测定结果表明，试验方法A与B提取效果相近，而且试验方法A较试验方法B所用的试剂更加便宜、环保，因此确定选用试验方法A为虚寒胃痛胶囊含量测定供试品溶液制备方法。

2.2.2 提取时间考察

本试验选用超声处理法制备供试品溶液，对不同提取时间和超声处理条件进行了考察，考察结果见表2。

表2 超声处理时间考察结果

测定结果提示，超声提取30min，样品中芍药苷已基本提取完全，故确立超声处理时间为30min。

2.3 测定波长的选择

图1 芍药苷对照品HPLC图谱

图2 芍药苷阴性HPLC图谱

图3 芍药苷供试品HPLC图谱

表7 芍药苷回收率试验测定结果

经参考有关文献，并经绘制紫外图谱，确定测定波长为230nm。紫外图谱测定条件为：溶剂为甲醇，扫描速度为中速，扫描区间400～200nm。

2.4 方法系统适用性试验考察

色谱柱：资生堂C18（150×4.6mm，5μm）；检测波长为230nm；流速为1.0mL/min；流动相为甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（28∶72）；理论板数按芍药苷峰计算不低于5000；按上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液及阴性液各进样10μL，记录色谱图（见图1、图2、图3）。结果表明在芍药苷对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照溶液在此峰位无吸收，对本品中芍药苷含量测定无干扰，芍药苷峰与其它组分峰分离完全。

2.5 线性范围考察

精密称芍药苷对照品0.00868g，置50mL量瓶中，加入甲醇使溶解，并稀释至刻度。作为对照品溶液A，浓度为C1=0.1703mg/mL，分别进样5μL、10μL、15μL；精密量取15mL，加甲醇定容至50mL，摇匀。作为对照品溶液B，浓度为C2=0.05109mg/mL，分别进样1μL、5μL、10μL；分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，进样量与峰面积关系见表3。

表3 芍药苷线性范围考察结果

以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经线性回归，回归方程为：Y=1404714.6X-4827.7，r=0.9999。由测定结果表明，芍药苷对照品进样量在0.05109～2.5545μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验考察

取本品（批号20080501），精密称取0.6g，按[含量测定]项下方法制备供试液。精密吸取10μL，连续进样6次，测定色谱峰面积，测定结果见表4。

表4 精密度试验考察结果

2.7 稳定性试验考察

取本品（批号20080501），精密称取0.6g，按[含量测定]项下制备供试液，精密吸取10μL，按0、2、4、6、8h时间间隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表5。

表5 稳定性试验考察结果

2.8 重复性试验

取本品（批号20080501），精密称取0.6g，共称取6份，分别按[含量测定]项下方法制备供试液。精密吸取10μL，测定色谱峰面积，计算含量。测定结果见表6。

表6 重复性试验测定结果

2.9 回收率试验

取已知含量的本品（批号200800501，芍药苷含量9.354mg/g），精密称取0.3g，共称取6份，分别精密加入芍药苷对照品溶液（C=0.2960mg/mL）10mL，再加水80mL置100mL容量瓶中，再按[含量测定]项下方法制备供试液。精密吸取10μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰面积，计算回收率，即得。测定结果见表7。

测定结果提示：本方法回收率在95.26%～97.75%，RSD为0.88%，符合有关规定。

2.10 样品含量测定数据

经采用本文2.2项下方法，测定3批样品中芍药苷含量，测定结果见表8。

表8 3批样品芍药苷含量测定结果

根据上述测定结果，参考《中国药典》2005年版一部所收载的“虚寒胃痛颗粒”含量限度及服用量折算，本品含量限度定为：本品每粒含白芍以芍药苷（C23H28O11）计，不得少于1.3mg。

3 讨 论

与传统的紫外比色法及薄层色谱扫描法相比较，本方法操作简便，定量准确，重现性好，可以更有效的控制虚寒胃痛胶囊中君药白芍的含量。

[1]中国药典(一部)[M].2005版.北京:化学工业出版社,2005.