原子吸收分光光度法测定骨碎补药材中的重金属＊

王永来，熊明玲，陈红军

(广州中医药大学附属深圳市中医院药学部，广东 深圳 518033)

骨碎补(Rhizoma Drynariae)为水龙骨科植物槲厥 Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm的干燥根茎，具有补肾强骨、续伤止痛的功效，是我国名贵中草药之一。随着中医中药的快速发展，国际需求的日益增加，以及我国绿色中药材的兴起，建立中药材中重金属残留限量检测方法、制定合适标准，已成为紧迫工作[1]。在中药材重金属残留检测方面，我国规定的有铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)等元素。骨碎补是我院传统制剂滋肾降糖丸的君药，2009年深圳市科技计划立项完善其质量标准。笔者参考文献[2]采用原子吸收分光光度法和原子荧光光谱法对10批不同产地的骨碎补药材进行上述5种元素的重金属残留量分析，旨在了解市售骨碎补的安全性，为药材的质量控制提供科学依据。现报道如下。

1 仪器与试药

消解罐为XK96-A型快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司);Hitachi 180-80型原子分光光度仪(日立);AFS-820型双道原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司)。铅、镉、砷、汞、铜单元素标准溶液(广东省药品检验所提供);骨碎补药材，购自药材市场或采自中药材基地;硝酸(色谱纯)，高氯酸(色谱纯)，盐酸，硫脲(分析纯)和抗坏血酸(分析纯)，购自汕头化学试剂厂。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

本试验应用硝酸-高氯酸进行湿法消化，有效消除了有机成分对测定结果的影响[3]。精密称取骨碎补样品粉末2 g，置100 mL锥形瓶中，加入15 mL硝酸和3 mL高氯酸，用小漏斗盖住瓶口，浸泡24 h后，置消解罐上，调节温度至120℃，消解至硝酸挥发完毕(即红棕色气体挥发完毕，此过程中温度不能超过140℃)，再将温度升高至170℃，使高氯酸分解、挥发，待锥形瓶中酸液挥发完毕，用3%盐酸溶解剩余物，并冲洗锥形瓶合并洗液，定容至25 mL，静置，使溶液自然沉淀澄清，上清液即为测定用的供试品溶液。

2.2 方法学考察

线性关系考察:将各单元素标准溶液用3%盐酸溶液分别稀释成一定浓度的标准贮备液，并按2005年版《中国药典(一部)》附录[4]规定的方法进行稀释(分别作6个以上的测定浓度)，分别测定各自的吸光度(A)并绘制标准曲线，结果铅(Pb)、镉(Cd)、铜(Cu)、砷(As)、汞(Hg)分别在 0 ～40.0 μg/mL，0 ～32.0 μg/mL，0 ～80.0 μg/mL，0 ～40.0 μg/mL，0～60.0 μg/mL 质量浓度范围内与吸光度线性关系良好，标准曲线方程分别为 APb=0.0072CPb+0.005 6(r=0.998 6)，ACd=0.002 3CCd+0.002 9(r=0.996 6)，ACu=0.006 9 CCu+0.009 3(r=0.998 6)，AAs=0.001 9CAs+0.002 5(r=0.996 7)，AHg=0.003 2CHg+0.005 1(r=0.996 9)。

检测限确定:分别对已消化处理的空白溶液进行20次重复测定，以空白信号标准偏差(S)的3倍计算其检测限。结果铜、镉、铜、砷、汞的检测限分别为 0.000 7，0.000 9，0.000 6，0.0005，0.000 8 μg/mL。

精密度试验:分别精密量取线性关系考察项下的铅、镉、铜、砷和汞标准液各10.0 μg/mL，分别在各自最佳测定条件测定吸光度。结果铅、镉、铜、砷和汞精密度的 RSD分别为1.2%，0.6%，1.4% ，0.7%，0.8%(n=5)。

重现性试验:取同一批(广东河源)样品，依法平行制备5份供试品溶液并测定吸光度。结果铅、镉、铜、砷和汞的 RSD分别为1.7% ，1.5%，1.6%，1.3% ，1.4%(n=5)。

稳定性试验:精密量取线性关系考察项下的铅、镉、铜、砷和泵的标准液各 10.0 μg/mL，分别于各自最佳测定条件下的 0，1，2，4，8，10 h时测定吸光度。结果铅、镉、铜、砷和泵的 RSD分别为0.7%，0.9%，0.8%，0.6%，0.5%(n=6)，表明溶液在10 h内稳定。

加样回收试验:精密取已知铅、镉含量的同一批样品(广东河源骨碎补)适量，分别精密加入高、中、低3个量级的铅、镉标准液各2份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定。结果见表1。同法对广东河源骨碎补分别加铜、坤、汞高、中、低3个量级标准溶液各2份，依法测定。结果铜的平均回收率为98.22%，RSD=1.67%;砷的平均回收率为97.63%，RSD=1.66%;汞的平均回收率为98.06%，RSD=1.92%。

表1 铅、镉加样回收试验结果(n=6)

2.3 样品含量测定

采用原子吸收分光光度法测定样品中铜、铅、镉的含量，采用原子荧光光谱法测定样品中砷、汞的含量，经试验选择的最佳测定条件见表2和表3。按线性关系考察项下方法测定，每个样品10次重复，利用标准曲线方程，根据所测吸光度得供试品溶液质量浓度，再换算得所测中药中铜、铅、镉的含量[5]，结果见表4。取2.1项下供试品液2 mL，置10 mL试管内，加入1 mL还原剂(2.5 g硫脲+2.5 g抗坏血酸，用超纯水定容50 mL，现用现配)，再加入7 mL 3%的盐酸溶液，用震荡混匀器混匀，作为供试品溶液。按砷、汞标准曲线制备方法测定，每种样品均重复3次测定，取均值作为测定结果。结果见表4。可见，10批骨碎补中重金属残留量测定结果铜为 2.687 5～8.521 7 mg/kg，镉为 0.200 6～0.270 8 mg/kg，铅为 0.250 4～1.000 mg/kg，汞为 0.003 4～0.029 4 mg/kg，砷为0.006 6～0.053 3 mg/kg。

表2 原子吸收法测定铜、铅、镉的最佳测定条件

表3 双道原子荧光光谱法测定砷、汞的最佳测定条件

表4 10批骨碎补中重金属残留量(mg/kg)

3 讨论

2005年版《中国药典(一部)》和香港《中成药注册申请手册》有关重金属标准规定:铅(Pb)≤5.0 mg/kg，镉(Cd)≤0.3 mg/kg，汞(Hg)≤0.2 mg/kg，砷(As)≤2.0 mg/kg，铜(Cu)≤20.0 mg/kg。本研究结果显示，由全国各地收集的10批骨碎补药材样品中，5种重金属的残留量均符合此规定[2]，且比阚连娣等[6]用同一方法对瓜蒌中铅、镉和汞的含量测定更全面，更能反映所测中药材中的重金属残留量。

2005年版《中国药典(一部)》首次对西洋参、白芍、甘草、丹参、金银花、黄芪等提出了重金属和有害元素的限量要求，而其他药材尚未涉及，还需进一步完善。根据本研究结果，建议对骨碎补提出重金属限量要求:铜(Cu)≤9.00 mg/kg，铅(Pb)≤1.00 mg/kg，镉(Cd)≤0.30 mg/kg，汞(Hg)≤0.03 mg/kg，砷(As)≤0.06 mg/kg。

中药材重金属残留来自内源和外源，中药内源的重金属是植物吸收来自土壤、水源的重金属，外源污染主要来自药材加工、运输和生产过程，控制中药材重金属残留要从这两方面因素着手。

[1]张春盛，吴舜芳，林炳国.西洋参等8种中药中重金属检测[J].中国药业，2009，18(17):20.

[2]赵德华，李居安，杨天寿.原子吸收分光光度法测定复方甘草片中重金属的含量[J].中国药房，2010，21(48):4 599-4 600.

[3]韩丽琴，董顺福，刘建华.中药柴胡中K、Ca、Zn、Fe和Mn含量测定及清除自由基机制分析[J].光谱实验室，2007，24(2):78-80.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:43-44.

[5]王新平.火焰原子吸收光谱法测定中草药刨花中的8种微量元素[J].光谱学与光谱分析，2005，25(2):293.

[6]阚连娣，巢志茂.原子吸收分光光度法对瓜蒌中铅、镉和汞的含量测定[J]. 中国中药杂志，2007，32(12):1 238.