菩人丹超微粉对肥胖型T2DM大血管损伤大鼠ET-1、NO、FFAs含量的影响

庞宗然 刘祖涵 苏晓慧 王朝晖 张伯礼

(中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京 100081)

糖尿病大血管病变是指主动脉、冠状动脉、脑基底动脉、肾动脉及周围动脉等动脉粥样硬化(AS)。其特点是内皮破损，中层(平滑肌)细胞增殖而增厚，脂类沉积形成斑块和弹力层的碎裂〔1〕。一氧化氮(NO)与内皮素-1(ET-1)是血管内皮细胞(VEC)合成和分泌的具有拮抗作用的血管活性物质。血栓形成与脂肪酸的动员有关〔2，3〕。依据“养阴清热、益气活瘀”调配而成的菩人丹(PRD)降糖方，具有降糖调脂、改善胰岛素抵抗、有效遏制血管内皮损伤、防止血管病变的作用。本研究通过测定肥胖型2型糖尿病(T2DM)大血管损伤大鼠血清ET-1、NO和游离脂肪酸(FFAs)含量变化，探讨 PRD对 ET-1、NO和FFAs的调节作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级雄性Wistar大鼠，体重(240±20)g，由中国医学科学院放射医学研究所实验动物中心提供。许可证号:SCXK津2005-0001。

1.2 实验药物及试剂 PRD超微粉，河北以岭药业集团有限公司提供;马来酸罗格列酮片，4 mg/片，葛兰素史克(天津)有限公司生产，批号:03110001。链脲佐菌素(STZ)，Sigma公司产品;大鼠ET-1放射免疫分析试剂盒，北京市福瑞生物工程公司提供;NO测试试剂盒，南京聚力生物医学工程研究所产品，批号:010802;FFAs分析试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要仪器 放免γ计量仪(SN-695B型)，上海核所日环光电仪器有限公司;721分光光度计，上海第三分析仪器厂;LD5-2A，北京医用离心机厂。

1.4 方法

1.4.1 脂肪乳的制备 猪油20 g，甲基硫氧嘧啶1 g，胆固醇8 g，谷氨酸钠 1 g，蔗糖 5 g，果糖 5 g，吐温-80 20 ml，丙二醇30 ml，加水定容至100 ml，配成脂肪乳。

1.4.2 肥胖型T2DM大血管损伤大鼠模型的制备 雄性Wistar大鼠，每日灌胃自制的脂肪乳1 ml/100 g，灌胃3 w后，眶静脉取血，离心血清。放免法检测血清胰岛素(Ins)水平;全自动生化检测仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;尾静脉取血，强生血糖仪检测血糖。挑选TC、TG、LDL-C增高，胰岛素敏感指数下降的肥胖大鼠，空腹6 h，尾静脉快速注射STZ 30 mg/kg，1 w后取尾静脉血用强生血糖仪检测血糖，＞16.7 mmol/L的大鼠作为T2DM模型大鼠。成模后，随机抽取15只大鼠杀检，观察胸主动脉弓的病理改变，如电镜下见动脉血管内皮细胞局部损伤严重，内皮细胞与内弹力板连接处空隙增加等，证实T2DM大血管损伤模型复制成功。

1.4.3 实验分组、给药及指标检测 T2DM大血管病变大鼠按血糖结合体重分层随机分为5组:PRD低、中、高剂量组，马来酸罗格列酮组，模型组，另取8只大鼠作为正常对照组。各组动物每日灌胃给药1次，正常对照组和模型组灌胃等剂量自来水，连续给药4 w。实验期间除正常对照组给予普通饲料外，其余各组均给予高脂高热量饲料。4 w后大鼠用30mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，股动脉取血，离心，检测NO、ET-1、FFAs含量。

1.5 统计学分析 计量资料用x±s表示，组间比较采用单因素方差分析，应用SPSS13.0软件进行统计。

2 结果

模型组大鼠血清ET-1、FFAs水平较正常对照组上调，NO水平明显下调(P＜0.01)。PRD中、高剂量组均能显著降低血清ET-1、FFAs的含量(P＜0.01～0.05)，PRD低、中、高剂量组均能显著提高血清NO含量(P＜0.01)。见表1。

表1 PRD对T2DM大鼠血清NO 、ET-1、FFAs的影响(x±s)

3 讨论

T2DM大血管病变以AS为病理基础，AS的启动常发生在损伤和缺损的内皮或功能异常的内皮细胞。高浓度的FFAs可增加AS的危险性。其可能机制为:(1)FFAs直接导致内皮细胞依赖性血管舒张功能受损，而内皮细胞功能异常是AS病理过程的启动因素之一。(2)高FFAs加剧脂代谢紊乱。胰岛素抵抗时脂肪组织中的HSL活性增强，使组织释放大量的FFAs。增高的FFAs刺激肝细胞合成TG、TC及VLDL。(3)FFAs易致凝血纤溶系统改变，诱导局部血栓形成。(4)FFAs水平升高激活IκB/核因子(NF)-κB途径。NF-κB的活化参与许多炎症反应过程，促进T2DM动脉粥样硬化的形成〔2～5〕。

NO与ET-1是VEC合成和分泌的具有拮抗作用的血管活性物质，NO能舒张血管，抑制血小板黏附和聚集，抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移;ET-1是已知最强的缩血管多肽，具有促血管收缩和平滑肌细胞增殖分裂的作用。ET-1可负性调节内皮NO的释放，NO浓度增高可抑制ET的生成，二者的动态平衡维持着正常的血管内皮功能，ET-1升高和NO减少是血管内皮损伤的标志〔6～9〕。

本研究结果显示:肥胖型T2DM大血管损伤大鼠的血清ET-1较正常组上调，NO明显下调，FFAs较正常组上调。提示模型大鼠出现了血管内皮功能损伤和脂代谢异常现象。PRD中、高剂量组均能极显著降低血清ET-1的含量，PRD低、中、高剂量组均能极显著提高血清NO含量，PRD中、高剂量组均能显著降低血清FFAs的含量。提示以益气养阴、化瘀通络为治则的PRD处方，能有效地降低血清FFAs含量，调节异常的脂质代谢，调整血管舒缩功能，保护损伤的血管内皮细胞，进而对防治T2DM大血管病变起重要作用。

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