高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰片的含量

代 亚，付 涛，俞丽君，陈立萍，王贤广

(浙江海森药业有限公司，浙江 杭州 322104)

自从1985年第1个5－羟色胺再吸收抑制剂(SSRIs)上市以来，其在临床得到了广泛应用。这类药物不产生三环类抗抑郁药的抗副交感神经作用、低血压、认知障碍或镇静等副作用，是一类性能优良的抗抑郁药。草酸艾司西酞普兰(escitalopram oxalate)就是其中的一种，它是消旋体药物西酞普兰(由 R－西酞普兰和 S－西酞普兰按1∶1的比例组成)的 S－西酞普兰，S－西酞普兰药效优于R－西酞普兰[1]。该药是由丹麦的Lundbeck公司首先研究开发，2002年8月首次被美国食品与药物管理局(FDA)批准，主要用于重型抑郁障碍的初始治疗和维持治疗。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定草酸艾司西酞普兰片的含量，按照2010年版《中国药典(二部)》附录中药品质量标准分析方法验证指导原则[2]进行了方法学试验，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 515型高效液相色谱仪;Waters 2487型紫外检测器。草酸艾司西酞普兰对照品(批号为070601R，含量100.38%，浙江海森药业有限公司精制，浙江省食品药品检验所标化);草酸艾司西酞普兰片(浙江海森药业有限公司，批号分别为081226，090104，090105);甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Phenomenex Gemini C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠7.8 g，加水1 000 mL调磷酸溶液 pH 至 3.2 ±0.1)－ 甲醇(51∶49);流速:1.0 mL/min;检测波长:238 nm;进样量:20 μL;柱温:30℃。以峰面积外标法定量。理论板数按艾司西酞普兰峰计算应不低于1 800，分离度符合要求。

2.2 溶液制备

取草酸艾司西酞普兰对照品13 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液使溶解并用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液;取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于艾司西酞普兰10 mg)，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液适量，超声使草酸艾司西酞普兰溶解，加0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液;取空白辅料0.13 g，精密称定，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:在2.1项色谱条件下，对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取草酸艾司西酞普兰对照品80.5 mg(相当于艾司西酞普兰63.0 mg)，置100 mL容量瓶中，加0.1 mol盐酸适量，超声溶解，加0.1mol盐酸定量稀释至刻度，分别取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL 的溶液稀释至 25 mL，摇匀。分取各质量浓度的对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录各峰面积，得艾司西酞普兰对照品质量浓度(C)与峰面积(A)的线性回归方程为A=40 531 C －25 478，r=0.999 9(n=6)。结果表明，艾司西酞普兰质量浓度在25～150 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取对照品溶液，连续进样5次。结果峰面积的 RSD为0.2%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批样品(批号为081226)5份，依法测定。结果含量的 RSD为0.99%(n=5)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取批号为081226的供试品溶液，分别在0，3，5，7，24 h时进样。结果峰面积的 RSD为0.3%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:分别取草酸艾司西酞普兰对照品9，13，17 mg(相当于艾司西酞普兰7，10，13 mg)，各2份，精密称定，分别配制成相当于标示量70%，100%，130% 的模拟溶液，共6份，摇匀。取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取草酸艾司西酞普兰对照品溶液，同法测定峰面积，按外标法以峰面积计算含量。结果见表1。

表1 草酸艾司西酞普兰加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于艾司西酞普兰10 mg)，置100 mL量瓶中，加0.1 mol盐酸适量，超声使草酸艾司西酞普兰溶解，加0.1 mol盐酸稀释至刻度，摇匀，滤过;精密量取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取草酸艾司西酞普兰对照品适量，同法按上述色谱条件测定，按外标法以峰面积计算。结果批号为081226，090104，090105的样品含量分别为97.7%，96.4% ，94.0% 。

3 讨论

依据原料药草酸艾司西酞普兰在甲醇及弱酸性溶液中易溶的特点，选择磷酸缓冲液(pH 3.2±0.1)－甲醇(51 ∶49)为流动相，结果艾司西酞普兰的保留时间为13.8 min主峰与有关物质很好分离，分离度大于1.5，故确定此流动相为样品测定用流动相。

取草酸艾司西酞普兰片流动相溶液，在200～400 nm波长范围进行紫外扫描，结果在238 nm波长处为最大吸收峰，因此，选择了在238 nm波长处作为检测波长。

本品辅料比例较大，用流动相作溶剂，由于甲醇比例较高，过滤时产生挥发，造成偏差较大。而本品主要成分略溶于水，可溶于0.1 mol盐酸。因而采取0.1 mol盐酸作为含量测定的测定溶液，为保证溶解完全，用超声溶解，超声1 min即可达要求。由色谱图1可以看出，阴性对照品溶液在艾司西酞普兰出峰处未出峰，表明其对含量测定无干扰。

[1]司天梅，舒 良.关于新抗抑郁药艾司西酞普兰[J].临床精神医学杂志，2007，17(1):68 －69.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录194－附录195.