久积膏的定性定量方法研究

黄爱群 何德志

久积膏系由芥子、桂枝、石菖莆、防风、独活、生川乌、生草乌等药研制而成的外用软膏，为医院新制剂。功能祛湿散寒、活络舒筋、行瘀止痛。主治关节肿痛、筋骨不利、寒湿瘀聚。为了有效地控制其内在质量，采用薄层层析法对本品中的芥子、桂枝、石菖蒲进行了薄层鉴别和乌头碱的限量检查;采用水蒸气蒸馏法测定了本品挥发油的含量［1，2］。

1 仪器与试液

ZF-2 g型三用紫外仪(上海市安亭电子仪器厂);桂皮醛对照品(批号:111710-200513)、石菖蒲对照药材(批号:121098-200403)、芥子碱硫氰酸盐对照品(批号:111702-200501)、乌头碱对照品(批号:110720-200410)均由中国药品生物制品检定所提供;化学试剂均为分析纯;久积膏由本院制剂室提供，批号:090315、090318、090321。

2 薄层鉴别［3，4］

2.1 桂枝 取本品50 g，照挥发油测定法(中国药典2005年版一部附录X D甲法)蒸馏，自测定器上端加入乙酸乙酯1 ml，缓缓加热至沸，并保持微沸约2 h，放冷，分取乙酸乙酯层，作为供试品溶液。按处方量称取除芥子外的其他药材，另取桂皮醛对照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1μl的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除桂枝外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺桂枝的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺桂枝的阴性溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取对照品溶液2μl，供试品溶液及阴性样品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。

2.2 石菖蒲 取石菖蒲对照药材0.5 g，按桂枝供试品方法制备成对照药材溶液。按处方量称取除石菖蒲外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺石菖蒲的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺石菖蒲的阴性溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取桂枝鉴别项下的供试品溶液及石菖蒲阴性样品溶液各10μl，对照药材溶液3～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃ ～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。

2.3 芥子 取本品20 g加50%乙醇50 ml，加热回流30 min，取出，立刻冷却，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取芥子碱硫氰酸盐对照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除芥子外的其他药材，按照制备工艺的方法制成缺芥子的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺芥子的阴性溶液。按照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各10～15μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性无干扰。

3 乌头碱的限量检查

3.1 展开剂的选择 选用4种展开系统分别对乌头碱标准品和久积膏进行展开，展开系统分别为:①乙醚-氯仿-甲醇(1∶2∶1)。②氯仿-甲醇-水(65∶15∶10)下层。③甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(5∶2∶1)。④甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)。以上4种展开系统展开后均喷以稀碘化铋钾试液，观察图谱可知，4种展开剂对乌头碱标准品均可顺利展开，但展开剂①、展开剂②、展开剂③中久积膏分离效果不好，展开剂④的分离效果好。

3.2 乌头碱标准检出限量的确定 照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取乌头碱对照品溶液 1、3、5、7、9 μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。3μl橘红色斑点较浅，7μl橘红色斑点较深，所以乌头碱对照品溶液点样量确定为5μl。

3.3 乌头碱限量的确定 取供试品(15 g→2 ml)1、3、5、7、9 μl，与标准品5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。实验结果表明:当点样量增至5μl时，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，小于对照品的斑点，即检出限量在5μg以下。

3.4 乌头碱的限量检查 取本品15 g，加浓氨试液10 ml，搅匀，加甲醇100 ml，加热回流30 min，取出，立即冷却，滤过，容器及滤渣用甲醇30 ml洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加盐酸溶液(4→100)50 ml分次溶解，合并盐酸提取液，滤入分液漏斗中，容器及滤渣用盐酸(4→100)30 ml洗涤，洗液与滤液合并，用浓氨试液调pH至9～10，加入无水乙醚振摇提取3次，20 ml/次，合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取乌头碱对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-二乙胺(14∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上出现的斑点，应小于对照品的斑点，或不出现斑点。

4 挥发油含量测定

按(《中国药典》2005年版一部附录X D甲法)测定，取本品60 g，加水300 ml，蒸馏5 h，计算挥发油的含量，并依法对三批产品进行了测定，结果如下。

表1 久积膏中挥发油的测定

5 讨论

5.1 本品为外用软膏剂，含基质约为80%，所以鉴别时，取样量较大;桂枝、石菖蒲鉴别中采用水蒸气蒸馏法提取挥发油制备供试品，芥子鉴别中用50%乙醇提取制备供试品，能较好的将基质与被鉴定的物质分离。

5.2 本品中有生草乌、生川乌，所含的乌头碱有极强的毒性，口服0.2 mg即出现中毒反应［5］，为有效控制本品的质量并确保其安全用药，我们采用薄层层析法控制成品中乌头碱的限量，经实验确定了最佳的提取方法和薄层展开系统，结果表明方法灵敏，重现性好，无干扰，可以用于控制本品中的乌头碱限量检查。乌头碱属双酯类结构的生物碱不稳定，极易水解，所以乌头碱对照品宜新鲜配制。

5.3 本品为外用制剂，处方中的防风、石菖蒲、丁香、羌活、白芷、独活、乳香、荆芥、桂枝所含挥发油在镇痛、抗炎方面发挥了重要的作用，所以建立了本品挥发油的含量测定方法，经三批样品测定，质量稳定。

［1］ 国家药典委员会.中国药典.1部.化学工业出版社，2005．

［2］ 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社，1994:202．

［3］ 陈德昌，鲁静，王宝琴.中药化学对照品工作手册.北京:中国医药科技出版社，2000:117．

［4］ 吕武清.中成药药材薄层色谱鉴别.人民卫生出版社，1997:98-151，356．

［5］ 王晓晖.关于《中国药典》中乌头碱限量检查法改进.中国现代中药，2006，8(12):11.