金属硫蛋白在宫颈癌和膀胱癌的表达

甄红霞 伊灵慧 王秀文 薄爱华 (河北省易县县医院妇产科，河北 易县 074200)

有报告认为〔1〕金属硫蛋白(MT)表达的下降将导致细胞内氧化物的堆积，从而引起某些原癌基因的激活或抑癌基因的失活;然而MT异常增多时，与肿瘤的发生、发展及耐药有明显的相关性。然而MT与各类癌瘤组织的生物学特性的关系，看法不一〔2，3〕。本文旨在阐明MT表达与肿瘤细胞的生物学特性的关系，并为临床制定化学治疗方案提供参考资料。

1 材料与方法

1.1 病例资料 选择2006年1月至2008年10月收集易县两个县级医院、河北北方学院附属第一、三医院和解放军251医院，宫颈癌鳞状细胞癌标本70例，膀胱移行细胞癌标本74例，共计144例，其中宫颈鳞状细胞癌患者，年龄37～79岁，平均60岁，中位年龄54.5岁。膀胱移行细胞癌年龄35～74岁，平均57岁，中位年龄51.5岁。

1.2 免疫组织化学染色 Ⅰ抗为鼠抗人金属硫蛋白单克隆抗体，由美国Santa Cruz公司生产。SP免疫组织化学试剂盒和DAB显色剂，均购自北京中山生物技术公司。将新鲜癌标本固定于10%中性甲醛内，常规石蜡包埋，切片厚度5μm，HE染色进行病理诊断和病理组织分类。免疫组化染色程序严格按照试剂盒规程进行操作。首先切片脱蜡至水，微波修复抗原;Ⅰ抗孵育室温过夜;Ⅱ、Ⅲ抗体孵育为37℃，各40 min。阴性对照以PBS代替Ⅰ抗;阳性对照为公司提供的已知MT阳性切片。

1.3 统计学处理 利用SPSS10.0软件进行χ2检验。

2 结果

MT阳性物质呈棕黄色，分布在癌细胞的胞质内。阳性病例的癌细胞胞质呈棕黄色，阴性病例癌细胞胞质不着色。MT在各种癌瘤中的阳性率及其与分化程度、浸润深度的相关性见表1。

表1 MT在宫颈癌及膀胱癌中的阳性表达〔n(%)〕

3 讨论

据研究MT基因广泛存在于人的实质性脏器中，其编码蛋白与金属离子有很强的离子螯合性，尤其是对锌(Zn)、铜(Cu)离子结合能力更强，因此MT与许多微量元素的吸收、转运和代谢有密切关系。据报告MT对自由基的清除能力是谷胱甘肽的38.5倍，尤其是锌结合MT的能力最强〔3〕。另外MT也参与应激反应和细胞凋亡的调节作用〔4〕。由于致癌因子或某些刺激因子(如肿瘤坏死因子、干扰素)的作用，可以诱导(或激活)MT基因从而编码，产生大量MT，因此有报告MT高表达与肿瘤的发生、发展和分化有相关性，在消化管及膀胱正常组织则检测不到MT表达，良性肿瘤中MT的表达很低，复发癌瘤中MT阳性率明显升高，因此，认为MT过表达是患者预后不良的指标之一〔5，6〕。

目前尤其引人关注的是关于MT参与肿瘤耐药机制的问题。有人将MT基因乳头状病毒转染小鼠C127型细胞，使其MT含量为原来的10倍，这种细胞对卡铂、苯丁酸氮芥、左旋苯丙氨酸氮芥等耐药性增加4.4倍〔7〕;凡MT增高者，均显示对顺胺氯铂和烷化剂耐药;MT低表达的细胞，对上述抗癌药物敏感。如果用氯化镉(CdCl2)诱导小鼠胚胎性纤维细胞，使其无MT基因表达，此时该细胞对烷化类抗癌药敏感性提高。有实验表明，MT能隔离药物与靶DNA的作用。当MT与烷化剂等作用时，产生物理和结构上的改变，进而影响细胞内金属离子的分布状况，从而启动多重化学反应，削弱烷化剂的细胞毒性作用。有实验证明，MT含量增高的肿瘤对烷化剂(卡铂、顺铂和亚硝基脲烷化剂等)和环磷酰胺产生耐药，而对5-氟尿嘧啶和长春新碱敏感，其机制有进一步研究。

本实验显示，宫颈癌和膀胱癌中均有高表达现象(即MT含量高)，尤其MT在BTC中的阳性率很高(75.00%)，而且，癌组细胞分化低和浸润深者阳性率更高，尤其是宫颈癌组，表现更为明显，组间有高度差异。有报告〔8，9〕MT在消化管癌、前列腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌等，阳性率50% ～75%，说明MT在许多实体瘤中呈高表达现象，而且MT高表达是癌组织恶性度高和预后不良的指标之一。

目前我国中小型医院由于化验条件的限制，很少检测MT在癌瘤中的表达状况，而在消化管癌、宫颈癌或膀胱癌辅助化疗中采用的复合方案中(如VPB或BOMP方案)都含有铂类药物(卡铂、草酸铂或顺铂等)〔10〕。如果患者癌组织中MT呈高表达状态，对此类药物敏感性下降;对MT阴性患者利用这些药物则能够增加敏感性。本实验提示，如果临床病理能够广泛开展耐药基因蛋白的检测(其中包括MT)，将对提高化疗效果有很大帮助，尤其是对多药耐药基因蛋白的检测，将对提高患者生存率和生活质量有重要意义。

1 张晓丽，薄爱华.金属硫蛋白与肿瘤相关性的研究进展〔J〕.河北北方学院学报(医学版)，2009;26(2):78-80.

2 Yamasaki Y，Smith C，Weisz D，et al.Metallothionein expression as prognostic factor for transitional cell carcinoma of bladder〔J〕.Urology，2006;67(3):530-5.

3 高社全，霍韶军，董海燕，等.金属硫蛋白与膀胱移行细胞癌的相关性研究〔J〕. 疑难病杂志，2009;8(2):102-3.

4 Popiela TJ，Rudnicka-Sosin L，Dutsch-Wicherek M，et al.The metallothionein and RCAS1 expression analysis in breast cancer and adjacent tissue regarding the immune cells presence and their activity〔J〕.Neuro Endocrinol Lett，2006;27(6):786-94.

5 程 琳，郑海军，岳树春，等.检测膀胱癌TopoⅡα和MT对指导化疗药物的选择价值〔J〕.陕西医学杂志，2007;36(1):47-8.

6 Alessendro S，Giacomo LS，Vincenxe A，et al.Metallothionein-1 and metallothionein-2 gene expression and localization in apoptotic cell in Zntreated LEC rat liver〔J〕.Histochem Cell Biol，2003;119(4):301-8.

7 白 岚，周荣祥，李墨农，等.金属硫蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义〔J〕.临床军医杂志，2008;36(6):205-6.

8 张国徽，姬宏宇，薄爱华.耐药标志物TOPOⅡ和 MT在宫颈鳞癌中的表达及意义〔J〕.陕西医学杂志，2005;34(6):697-9.

9 Bo AH，Zhang H，Zhang X，et al.Clinical signification on the expressions of metallothionein in three types cancer of woman〔J〕.Chinese-German JClin Oncol，2008;7(1):59-60.

10 段杨平，濮德敏，李 天，等.金属硫蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义〔J〕.中国妇幼保健，2008;23(17):19-20.