阿利克仑对尿毒症大鼠的保护作用

位冒冒 申 虎 袁祖贻 孟保福 袁林超 王中群 (安阳市人民医院检验科，河南 安阳 455000)

慢性肾脏疾病 (CKD)是我国最常见的慢性难治性疾病之一。随着病情进展和肾脏损害，CKD最终将发展为终末期慢性肾衰竭 (CRF)-尿毒症〔1〕。CRF患者可出现慢性肾脏结构和功能障碍，并伴有高脂血症、动脉粥样硬化、高血压和肝脂肪变性等。目前，临床上主要使用针对肾素-血管紧张素-醛固酮系统 (RAAS)的阻滞剂控制CRF。鉴于血管紧张素转化酶抑制剂 (ACEI)和血管紧张素受体阻滞剂 (ARB)两类药物不能有效阻止CRF进展且有可能导致血浆肾素活性的反应性增加〔2〕，故此，本实验特在前期研究基础上，观察直接肾素抑制剂阿利克仑对SD大鼠尿毒症及并发症的影响，为拓展RAAS系统拮抗剂的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与仪器 阿利克仑购自北京诺华。Shandon325型切片机，Olympus倒置光学显微镜，Olympus AU21000型全自动生化分析仪。

1.2 方法

1.2.1 尿毒症大鼠模型的构建 参照文献〔1〕的方法建立动物模型，腹腔注射10%水合氯醛(3 ml/kg)麻醉后，将大鼠仰卧位固定，腹部备皮，常规消毒，沿距左脊肋骨1.5 cm处作长约2 cm的斜切口，充分暴露左肾，剥离肾包膜，迅速切除上、下极 (各占肾脏的1/3)，以明胶海绵压迫切面止血，然后分层缝合。术后1 w行第2次手术，完全摘除右肾。对照组仅行麻醉和暴露双肾，不做手术切除。以尿毒症大鼠模型血肌酐 (Scr)和血尿素氮 (BUN)为正常大鼠的2～3倍并出现尿蛋白显著升高为造模成功的标志〔3〕。

1.2.2 实验动物分组 选取清洁级雄性SD大鼠〔由南华大学提供，许可证号SCXK(湘)2004-0009〕30只，体重170～190 g，分笼饲养，不限制进食和饮水，适应环境1 w后开始实验。随机分为对照组、尿毒症组和阿利克仑干预组 (在模型组基础上给予阿利克仑5 mg·kg-1·d-1)，每组10只。三组均连续饲养12 w。

1.2.3 收缩期血压 各组大鼠处死前，采用大鼠尾动脉血压计测量收缩期血压，每只于5 min内测量3次后取平均值，并进行统计学分析。

1.2.4 血生化检测 将禁水禁食过夜的SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3 ml/kg)，麻醉后经心脏取血，4 000 r/min离心15 min取血清。采用全自动生化分析仪测定血脂:甘油三酯 (TG)、总胆固醇 (TC)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C)，血清Scr和BUN含量。

1.2.5 24 h尿蛋白检测 各组大鼠在术后12 w末置于代谢笼，采集24 h尿液，测定24 h尿蛋白量。

1.2.6 病理形态学分析 取大鼠的残余肾脏、肝脏和腹主动脉，磷酸盐缓冲液 (PBS)漂洗3次，常规固定、脱水、透明、石蜡包埋、切片 (厚度5μm)，作HE染色，观察各组织切片的形态学变化。评价肝细胞脂肪变性的量化标准参考文献〔4〕的方法，计算每个肝细胞中所含脂滴数量。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行分析，实验所得数据采用±s表示，组间比较采用方差分析及t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组大鼠血压的比较 手术时各组大鼠的血压无统计学差异。术后第12周，与假手术对照组相比，尿毒症模型组收缩期血压显著升高 (P＜0.05)。阿利克仑干预组大鼠的收缩期血压显著高于对照组，但低于尿毒症模型组 (P＜0.05)。见表1。

2.2 三组血生化指标的比较 术后第12周，尿毒症大鼠模型Scr和BUN高于正常大鼠的2倍，说明造模成功。与对照组相比，尿毒症模型组Scr和BUN显著升高 (P＜0.05);阿利克仑干预组大鼠的Scr和BUN显著低于尿毒症模型组(P＜0.05)。Scr和BUN的显著降低提示阿利克仑可以延缓尿毒症大鼠肾功能损伤进程。与对照组比较，模型组大鼠TG、TC和LDL-C均升高，以TG升高最显著 (P＜0.05)，HDL-C无显著变化;阿利克仑干预组大鼠的TG、LDL-C显著低于尿毒症模型组 (P＜0.05)，两组间的TC、HDL-C无显著性差异。见表1。

2.3 三组24 h尿蛋白的比较 术后第12周，与对照组相比，尿毒症模型组出现显著的蛋白尿 (P＜0.05)。阿利克仑干预组大鼠的24 h尿蛋白定量显著低于尿毒症模型组 (P＜0.05)。见表1。

表1 12 w后三组间血压、Scr、BUN、24 h尿蛋白及血脂水平比较(x ± s，n=10)

2.4 三组肾脏病理学形态的比较 对照组:肾小球及肾小管间质形态及结构正常;尿毒症模型组:肾小球体积缩小、小球细胞减少，肾小管细胞肥大，肾小血管壁增厚、管腔狭窄，肾间质纤维化和炎性细胞浸润;阿利克仑干预组:与尿毒症模型组相比，肾小球体积缩小及小球细胞减少均不明显，肾小管细胞萎缩，小血管壁厚度及狭窄程度较轻，未见肾间质纤维化和炎性细胞浸润。见图1。

2.5 三组腹主动脉病理形态比较 对照组可见主动脉壁内膜光滑，内皮细胞完整，未见脂纹等异常改变;尿毒症模型组可见主动脉管壁内膜增生、中膜显著增厚，高倍镜下可见明显的脂质空泡蓄积，肉眼可见有附壁血栓形成，这提示尿毒症大鼠已经出现了动脉粥样硬化;阿利克仑干预组:与模型组比较，阿利克仑干预组的内膜明显变薄，未见附壁血栓形成。见图2。

2.6 三组肝脏病理形态学的比较 模型组和干预组肝细胞中均出现脂滴空泡，提示尿毒症大鼠出现了肝脂肪变性;对照组:肝细胞形态与结构正常;模型组:弥漫性肝细胞脂肪变性，高倍镜下可见胞浆内出现大量脂滴空泡，发生脂肪变性的肝细胞胞质疏松呈网状，部分核仁被脂滴挤到细胞一边;阿利克仑干预组:肝脂肪变性比模型组显著减轻，细胞内脂滴空泡明显减少，可见正常肝细胞。脂滴量化分析结果:对照组 (0.02±0.00)个，尿毒症模型组 (0.62±0.02)个，阿利克仑干预组 (0.41±0.02)个，三组间比较有显著性差异 (P＜0.05)。见图3。

图1 SD大鼠肾脏病理形态学观察(HE，×200)

图2 SD大鼠腹主动脉病理形态学观察(HE，×200)

图3 SD大鼠肝脏病理形态学观察(HE，×400)

3 讨论

尿毒症是CRF晚期所发生的一系列症状的总称，主要由慢性肾脏病肾脏损害和进行性恶化发展形成。尿毒症患者除了出现慢性肾脏结构和功能损害以外，还可出现高脂血症、动脉粥样硬化、高血压和肝脂肪变性等严重并发症。RAAS系统在大鼠尿毒症的发生及发展过程中起重要作用〔5〕，因此，针对RAAS抑制剂的研究成为了研究热点。临床研究显示，阿利克仑在日本肾功能不全的高血压患者中耐受良好且没有新的安全问题〔6〕，而其对尿毒症及其并发症的影响有待进一步探讨。

本实验结果显示，新型的直接肾素抑制剂阿利克仑具有良好的降压效果，与模型组相比，阿利克仑干预组血压下降了20%;阿利克仑对血压的控制能有效地改善肾血流动力学，降低肾小球血管内压，维护肾小球率过滤，从而有效阻止肾脏进一步损害。这与目前国内外已有的部分相关研究结果一致〔7，8〕。在本实验中，大鼠5/6肾切除12 w后，出现Scr、BUN和24 h尿蛋白显著升高，肾脏出现明显的病理形态学改变。目前一般认为，尿毒症的发生机制主要与尿毒症毒素的毒性作用有关;BUN是尿毒症毒素的重要组成部分，而Scr清除增加意味着尿毒症毒素清除增加〔9〕。阿利克仑治疗后，Scr、BUN和24 h尿蛋白三项指标均显著降低;而且，肾脏HE染色显示受损结构得到改善，如肾小球体积缩小及小球细胞减少均不明显，肾小血管壁厚度及狭窄程度减轻，未见肾间质纤维化和炎性细胞浸润。这些结果提示，阿利克仑能延缓尿毒症大鼠肾功能损伤进程以及改善受损的肾脏结构，对肾脏具有显著的保护作用;阿利克仑很可能在慢性肾衰竭的早中期就已经开始发挥作用了，对其病程进展具有逆转作用，该作用明显优于ACEI和ARB两类药物。

尿毒症可伴发多系统病变，心血管并发症是尿毒症患者的主要死因，尿毒症时主动脉粥样硬化病变发病率比普通人群高20倍。在本实验中观察到，尿毒症模型组出现了血脂紊乱、腹主动脉粥样硬化以及肝脂肪变性。TG、TC和LDL-C均显著升高(P＜0.05)，而阿利克仑对TG和LDL-C有良好的调节作用;腹主动脉粥样硬化可能与高血压和血脂紊乱有关，主动脉壁内膜增厚程度较轻，可能是由于动脉粥样硬化出现在尿毒症病程的中晚期;肝脂肪变性的出现可能与血脂紊乱以及尿毒症毒素的作用有关。本实验结果显示，阿利克仑对腹主动脉粥样硬化和肝脂肪变性均具有良好的疗效，对降低尿毒症个体死亡率具有重要意义。

综上所述，阿利克仑通过增加尿毒症毒素清除、改善受损的肾脏结构，进而起到逆转尿毒症病程和保护肾脏的作用;通过调节血脂、抑制腹主动脉粥样硬化以及肝脂肪变性，阿利克仑很可能会降低尿毒症患者的死亡率。

1 梁萍萍，位红兰，李娣昕，等.γ-氨基丁酸对慢性肾衰竭大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用〔J〕.医药导报，2009;28(9):1120-3.

2 Wiggins KJ，Kelly DJ.Aliskiren:a novel renoprotective agent or simply an alternative to ACE inhibitors〔J〕?Kidney Int，2009;76(1):23-31.

3 Zareie M，De Vriese AS，Hekking LH，et al.Immunopathological changes in a uraemic rat model for peritoneal dialysis〔J〕.Nephrol Dial Transplant，2005;20(7):1350-61.

4 位冒冒，申 虎，杨廷桐，等.阿托伐他汀联用依折麦布对新西兰兔动脉粥样硬化的影响〔J〕.中华老年心脑血管病杂志，2009;11(6):453-6.

5 盛 斌，蔡启德，尹良红.尿毒症心脏损害的机制与研究进展〔J〕.中国病理生理杂志，2003;19(5):712-6.

6 Ito S，Nakura N，Le Breton S，et al.Efficacy and safety of aliskiren in Japanese hypertensive patients with renal dysfunction〔J〕.Hypertens Res，2010;33(1):62-6.

7 Dong YF，Liu L，Kataoka K，et al.Aliskiren prevents cardiovascular complications and pancreatic injury in amouse model of obesity and type2 diabetes〔J〕.Diabetologia，2010;53(1):180-91.

8 Mende CW.Application of direct renin inhibition to chronic kidney disease〔J〕.Cardiovasc Drugs Ther，2010;24(2):139-49.

9 袁江姿，钱家麒，方 炜，等.尿毒症腹透对大鼠腹膜形态和功能的影响〔J〕.上海交通大学学报(医学版)，2007;27(10):1189-92.