健儿消食口服液澄清工艺的实验研究

李 静， 王晓义， 蒲宇红， 高晓黎

(1.石河子大学医学院第一附属医院，新疆石河子 832008;2.新疆医科大学药学院药剂教研室，新疆 乌鲁木齐 830054)

目前中药口服液的研究大多集中净化措施对有效成分含量以及对口服液澄明度的影响［1］，中药口服液放置后易产生沉淀，影响产品的质量。本课题参照《卫生部药品标准中药成方制剂》第五册中健儿消食口服液处方，研制健儿消食口服液。本实验分别考察了5种澄清工艺对健儿消食口服液中总多糖含量、黄芩苷含量、水浸出物量的影响，为确定健儿消食口服液的澄清工艺提供实验依据。

1 试药与仪器

1.1 仪器 SCL－10AVP型高效液相色谱仪(日本岛津);UV－2401紫外可见分光光度计(日本岛津);BP211D精密天平(德国 sartorius);XYJ80－离心机(金坛市恒丰仪器厂);SENCOW50－1恒温水浴锅(上海申生科技有限公司);TGL－16C高速离心机(上海弗鲁克机电设备有限公司);ZF－I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)。

1.2 试药 黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110715－200514);葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批 号:0833－9501);蒽 酮 (中 国 联 化 工 厂，批 号:20030316)。甲醇〔色谱纯，fisher公司〕，其他试剂均为分析纯。健儿消食口服液(新疆特丰药业股份有限公司研制，批号:20060426)。

2 实验与结果

2.1 考察指标及测定方法 从中药化学成分角度分析，水煎液中既含有极性较大的皂苷类又含有水溶性的多糖类，在运用各种澄清技术时必须考虑这些成分的含量，同时也要考虑每种澄清方法的水浸出物量，达到精制的目的。因此指标拟采用总多糖含量、黄芩苷含量和水浸出物量为指标对澄清工艺进行综合评价(权重系数为0.4、0.4、0.2)。

综合评分=(总多糖含量/最大总多糖含量)×40+(黄芩苷含量/最大黄芩苷含量)×40+(最小水浸出物量/水浸出物量)×20

2.1.1 水浸出物量的测定 精密吸取药液50 mL，置于干燥至恒重并称重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃烘箱干燥3 h至恒重，取出，迅速置干燥器中冷却，称重，计算水浸出物量。水浸出物量(%)=(干浸膏重量/药材重量)×100%

2.1.2 总多糖的测定(采用硫酸－蒽酮法［2］)

葡萄糖对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品15.21 mg，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含葡萄糖对照品0.304 mg)。

标准曲线的建立 精密吸取上述对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于 25 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液2 mL于10 mL具塞刻度试管中，将试管置冰浴中，精密加入2‰硫酸蒽酮溶液(取蒽酮0.2 g，溶于水5 mL与硫酸95 mL的混合液中，振摇溶解，放冷，临用新配)8 mL，摇匀，于90℃水浴中加热10 min，取出，立即置于冰浴中，放置10 min，以第一份为空白对照液，在400～800 nm波长下进行扫描，得最大吸收波长为627 nm。照分光光度法(2005年版一部附录V)，以第一份为空白对照液，在627 nm波长处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。经回归得线性回归方程为:A=0.046 3C －0.013 7，r=0.999 2，在2.4 ～14.6 μg/mL范围内，线性关系良好。

样品测定 精密吸取样品液1.0 mL于1 000 mL瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。再精密吸取上述溶液2.0 mL于10 mL具塞试管中，照标准曲线项下自“精密加入2‰硫酸蒽酮溶液”起，随行空白，依法在627 nm波长处测定吸光度，根据回归方程计算总多糖含量。

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2.1.3 黄芩苷的含量测定 采用高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。

色谱条件 ODS色谱柱(Phenomenex 4.6 mm×150 mm，5 μm);甲醇－水－磷酸(47 ∶53 ∶0.2)为流动相;检测波长为280 nm;流速为1 mL/min;柱温为40℃。

对照品溶液的制备 精密称取黄芩苷对照品10.05 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得贮备液(0.201 mg/mL)。再精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含40 μg黄芩苷对照品溶液，作为对照品溶液。

标准曲线的建立 精密吸取上述对照品贮备液(0.201 mg/mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为20.1、40.2、60.3、80.4、100.5、120.6 μg/mL的对照品系列溶液。从中分别精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标进行直线回归，得线性回归方程为:A=689 74C－110 328，r=0.999 9。以上结果表明，在20.1～120.6 μg/mL范围内，黄芩苷峰面积与进样浓度具有良好的线性关系。

供试品溶液的制备 精密吸取样品1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇适量，超声10 min，放冷，再用甲醇稀释至刻度，摇匀。取适量于具塞离心管中，离心10 min(3 000 r/min)，取上清液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。

测定方法 分别精密吸取对照品溶液，供试品溶液各20 μL，按上述方法和色谱条件进行测定，用外标一点法计算黄芩苷含量。

2.2 水提取液制备 称取处方量药材，按照上述优化提取工艺所确定条件制得提取液并减压浓缩为3 000 mL(1 mL药液相当于0.3 g生药)。

2.3 不同澄清工艺样品的制备

2.3.1 自然沉降法 精密吸取水提液100 mL置烧杯中自然沉降，静置24 h，滤过，定容，测定结果见表1。

2.3.2 高速离心法

2.3.2.1 离心转速考察 精密吸取提取液100 mL 3份，分别按10 000 r/min、12 000 r/min、14 000 r/min转速离心 15 min，取上清液，加水定容至500 mL，测定结果见表1。

2.3.2.2 离心时间考察 精密吸取提取液100 mL 3份，在14 000 r/min 下，分别离心15 min、30 min、45 min，取上清液，加水定容至500 mL，测定结果见表1。

2.3.3 乙醇沉淀法［2］精密吸取提取液100 mL 5份，加一定量乙醇使含醇量达到30%、40%、50%、60%、70%，静置24 h，滤过，并用相应浓度的乙醇清洗容器壁上残留药液，滤液统一定容至500 mL，测定结果见表1。

2.3.4 ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清剂法

2.3.4.1 澄清剂的配制

A组分溶液:称取5.0 g A组分细粉，先用少量水搅拌成糊状，再加水至500 mL，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。

B组分溶液:称取5.0 g B组分细粉，用少量1%乙酸溶液，搅拌成糊状，再加1%乙酸至500 mL，溶胀24 h，搅拌，双层纱布滤过，即得1%粘胶液。

2.3.4.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保温20 min，缓慢细流加入B组分，边加边搅拌，再缓慢细流加入A组分，搅匀，置60～70℃水浴中保温30 min，然后4℃静置24 h，滤过，滤液定容至500 mL，测定结果见表1。

2.3.5 壳聚糖澄清剂法［4］

2.3.5.1 澄清剂的配制 称取1.0 g壳聚糖细粉，用少量1%乙酸溶液搅拌成糊状，再用1%乙酸溶液加至100 mL，溶胀24 h，搅拌，即得1%粘胶液。

2.3.5.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保温10 min，缓慢细流加入1%壳聚糖澄清剂5、8、10 mL，边加边搅拌，搅匀后，静置24 h，滤过，滤液定容至500 mL，测定结果见表1。

3 讨论

健儿消食口服液由黄芩、黄芪、白术、陈皮、麦冬等七味药材组成，是儿童天然胃动力药，具有促进胃肠运动的功能。水煎液中既含有极性较大的皂苷类又含有水溶性的多糖类，其中多糖类成分则具有较强的免疫调节作用［5］，同时固体物析出越多澄明度越好，故实验以总多糖含量、黄芩苷含量及总固体物含量作为评价指标，以此综合考察不同澄清工艺对有效成分含量的影响。

从表1澄清方法综合评分结果［6］得出:自然沉降＞高速离心法＞乙醇沉淀法＞ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清剂法＞壳聚糖澄清剂法。实验中笔者发现，高速离心法保留药液的有效成分最多，但水浸出物量基本接近原液，在存放过程中大分子的杂质聚合产生沉淀;药液中加入ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清剂后黄芩苷含量的损失较大，而浸出物量无明显降低，同时ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清剂法所得溶液经放置72 h有絮状悬浮物;壳聚糖澄清剂也使黄芩苷含量明显下降，对水浸出物量的影响不大，除杂后的溶液放置48 h后，其溶液出现絮状沉淀;乙醇沉淀法与天然澄清剂法相比，随着乙醇浓度的增加黄芩苷含量上升，总多糖含量下降，而澄明度升高，但放置后溶液稳定性良好。

表1澄清方法考察(n=3)

以上实验表明，用乙醇沉淀法除杂，制得的成品澄清度、稳定性更好，对有效成分的保留高于其他澄清剂法，缩短生产周期，降低成本，可以使用乙醇法制备健儿消食口服液。

［1］邱 葵.改善中药口服液澄明度的三点建议［J］.首都医药，2000，7(6):43.

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