反相离子对高效液相色谱法测定复方苯海拉明滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量

刘炜，曾蔚欣，刘礼斌，唐宛晨，孙路路（首都医科大学附属北京世纪坛医院，北京市 100038）

复方苯海拉明滴鼻液为北京中医药大学附属护国寺中医医院的传统制剂，其质量标准中无主要成分的含量测定方法。为更好地控制该制剂质量，本研究采用反相离子对高效液相色谱（HPLC）法，同时测定复方苯海拉明滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量。结果表明，该方法专属性强，结果准确、可靠，可用于测定复方苯海拉明滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100 HPLC仪、紫外-可见分光光度仪（美国安捷伦科技有限公司）。

1.2 试药

盐酸苯海拉明对照品（中国药品生物制品检定所，批号:110728-200806，含量:99.9%）；盐酸苯海拉明原料药（辽源市百康药业有限公司，批号:100401，含量:99.5%）；盐酸麻黄碱原料药及对照品（赤峰艾克制药科技股份有限公司，批号:081027，含量:99.2%）；硫酸卡那霉素注射液（天津药业焦作有限公司，批号:10030521，规格:0.5 g∶2mL）；羟苯乙酯（台山新宁制药有限公司，批号:20100304）；氯化钠原料药（江苏省勤奋药业有限公司，批号:20091207）；复方苯海拉明滴鼻液（北京中医药大学附属护国寺中医医院，批号:20110314、20110517、20110520，含量:盐酸苯海拉明0.125%、盐酸麻黄碱1%、硫酸卡那霉素0.5%）；水为纯化水，乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（150mm×4.6mm，0.5 μm）；流动相:0.02 mol·L－1十二烷基硫酸钠水溶液（用85%磷酸溶液调节pH值至2.85）-甲醇-三乙胺＝52∶48∶0.5，流速:1.0mL·min－1；紫外检测波长:256 nm；柱温:30 ℃；进样量:20μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 盐酸苯海拉明对照品贮备液。精密称定盐酸苯海拉明对照品约24.9mg置于100mL容量瓶中，加水适量，完全溶解后，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 盐酸麻黄碱对照品贮备液。精密称定盐酸麻黄碱约200mg置于100mL容量瓶中，加水适量，完全溶解后，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 盐酸苯海拉明与盐酸麻黄碱混合贮备液。分别精密称定盐酸苯海拉明对照品约25mg、盐酸麻黄碱约200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水适量，完全溶解后，加水至刻度，摇匀，即得。

2.2.4 空白样品溶液。按处方制备不含盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的空白样品溶液100mL，备测。

2.2.5 供试品溶液。按处方制备样品100mL。精密吸取样品溶液2.0mL，置于25mL容量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性考察

分别精密吸取“2.2”项下制备的所有溶液，进样分析，比较保留时间（tR），确定色谱峰的专属性，结果见图1。

图1 高效液相色谱图A.盐酸麻黄碱对照品；B.盐酸苯海拉明对照品；C.盐酸苯海拉明+盐酸麻黄碱；D.空白样品；E.供试品；1.盐酸麻黄碱；2.盐酸苯海拉明；3.杂质（羟苯乙酯）Fig 1 HPLC chromatogramsA.ephedrine hydrochloride control；B.diphenhydramine hydrochloride control；C.ephedrine hydrochloride+diphenhydramine hydrochloride；D.blank sample；E.test sample；1.ephedrine hydrochloride；2.diphenhydramine hydrochloride；3.impurity（ethylparaben）

图1结果表明，盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱及其他成分之间分离良好，空白样品溶液在各对照品溶液相应的保留时间处无吸收峰，说明盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱的检测不受干扰。按盐酸麻黄碱色谱峰计，理论板数均值5355，RSD为1.8%（n＝6）；按盐酸苯海拉明色谱峰计，理论板数均值10646，RSD＝1.4%（n＝6）。

2.4 标准曲线的制备

精密量取“2.2.3”项下盐酸苯海拉明与盐酸麻黄碱混合贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于5mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得一系列浓度溶液。过滤后，分别取20μL进样、测定。以峰面积（y）为纵坐标，进样量（x）为横坐标，绘制标准曲线，拟合回归方程，得盐酸苯海拉明回归方程y＝96.591x+8.1007（r＝0.9998，n＝6）；盐酸麻黄碱回归方程y＝954.667x+234.12（r＝0.9994，n＝6）。结果表明，盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱进样量线性范围分别为0.5002～5.0020、4.0058～40.0580μg。

2.5 重复性试验

精密吸取“2.2.3”项下盐酸苯海拉明与盐酸麻黄碱混合贮备液1.0mL，置于5mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，过滤。取滤液20μL，重复进样6次，测定。结果，盐酸苯海拉明含量的RSD＝1.3%，盐酸麻黄碱含量的RSD＝1.1%，说明方法重复性良好。

2.6 回收率试验

分别精密称定盐酸苯海拉明对照品约25mg、盐酸麻黄碱对照品约200mg，置于同一100mL容量瓶中，加水适量，完全溶解后，加水至刻度，摇匀。精密吸取2.0mL至5mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，作为回收率试验待测溶液。同法制备9份，滤过后，分别取20μL进样，测定，外标法以峰面积计算回收率，每份样品测3次，回收率试验结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

2.7 样品含量测定

精密吸取样品2.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取对照品混合溶液（每1mL含盐酸苯海拉明0.1mg、含盐酸麻黄碱0.8mg），分别经0.45 μm微孔滤膜过滤后，各精密量取20μL注入色谱仪，记录色谱。按外标法，分别以盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱色谱峰面积计算含量。3批样品（批号:20110314、20110517、20110520）含量测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 讨论

反相离子对色谱系统中流动相的pH值对峰的保留时间有明显影响[1]。有文献[2]报道，当调节流动相pH值为4.0时，盐酸麻黄碱出峰时间为4min，盐酸苯海拉明出峰时间为9min左右。但笔者在试验中发现，当pH≥3时，盐酸苯海拉明出峰时间延长至11min；当pH低于2.8时，出峰时间虽然缩短，但峰形不好，拖尾严重。在参考文献[3，4]基础上曾选用0.02 mol·L－1十二烷基硫酸钠水溶液-甲醇-三乙胺体系（52∶48∶0.5，用磷酸调pH至5.0）为流动相，结果盐酸麻黄碱在2.67min左右出峰，盐酸苯海拉明出峰时间约为17.741min，虽然其他成分对测定不干扰，但盐酸苯海拉明出峰时间太晚。故最终选择0.02 mol·L－1十二烷基硫酸钠水溶液（用85%磷酸溶液调节pH值至2.85）-甲醇-三乙胺（52∶48∶0.5）为流动相，结果表明该流动相可行。

本品处方含有羟苯乙酯及其他辅料，均在256 nm波长处有吸收，尤其羟苯乙酯吸收较强。在本文色谱条件下（见图1D、E），羟苯乙酯色谱峰（tR为2.6min）与盐酸麻黄碱基线分离（分离度R＝9.13），说明羟苯乙酯及其他辅料完全不干扰盐酸麻黄碱的测定。

盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明均有胺基侧链，显碱性，在水溶液中为阳离子，而当流动相中加入十二烷基硫酸钠（阴离子）后，可以与之形成离子对，从而达到改变保留时间、改善峰形、提高分离度的作用。但要严格控制其浓度，当低于0.02 mol·L－1时峰形不好；浓度过高，又会损害色谱柱[4]。

原标准中并未对本品的主成分进行含量控制，而用本法可以同时测定盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明的含量，且结果准确、可靠，可用于复方苯海拉明滴鼻液的质量控制。

[1]傅若农主编.色谱分析概论[M].第1版.北京:化学工业出版社，2000:176-178.

[2]程辉跃.HPLC法同时测定百喘朋中盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明的含量 [J].中国药房，2001，12（10）:622.

[3]颜 挺.反相离子对高效液相色谱法测定中药橡胶膏中盐酸苯海拉明的含量[J].药物分析杂志，2008，28（3）:437.

[4]张 涛.HPLC法测定复方苯海拉明麻黄碱糖浆麻黄碱、苯海拉明的含量[J].中国医药导报，2009，6（21）:42.