注射用雷贝拉唑钠有关物质的HPLC法优化检测

丁 琛，李晓婷，刘留成

1江苏省中医院药剂科，南京 210029；2江苏奥赛康药业有限公司，南京 211112

雷贝拉唑钠（rabeprazole sodium）为苯并咪唑类化合物[1]，其结构式见图1。

图1 雷贝拉唑钠结构式

它是日本卫材公司发现和开发的一种质子泵抑制剂[2]，代号 E-3810，于 1997年首先在日本上市，1999年本品已在美国和瑞典上市，商品名：Pariet，剂型为肠溶片。用于治疗胃溃疡，十二指肠溃疡，吻合口溃疡，反流对食管炎，卓-艾氏综合症等适应症。雷贝拉唑钠作为新一代质子泵抑制剂，具有较高的pKa值，口服后可在体内快速活化，与质子泵结合发挥抑酸作用[3]。雷贝拉唑钠在抗分泌作用、抗幽门螺杆菌作用、药物的相互作用、药物的安全性及代谢的多态性等方面与第一代质子泵抑制药相比具有明显的优点[4-6]。

现有注射用雷贝拉唑钠有关物质HPLC测定方法灵敏度低、专属性差，当样品经过酸、碱、光照、氧化、加热破坏后，含量有明显降低，而有关物质检测变化不明显，同时该测定方法不能灵敏地检测杂质峰的个数及峰面积。为了提高雷贝拉唑钠有关物质检查的分离度、兼顾峰形和分析时间，建立一个灵敏性高，专属性强，耐用性好的色谱条件是必须的。本实验首先找出雷贝拉唑钠及杂质的最大吸收波长，确定有关物质的检测波长；通过对流动相的摸索，找出准确、可靠、主峰与杂质分离效果好的流动相色谱条件。

注射用雷贝拉唑钠在生产及贮存过程中可能带入或产生有关物质，因此本品须进行有关物质检查。国内常用磷酸盐、乙腈作为流动相，但杂质峰与主峰分离效果不佳，因此在参考国内外文献的基础上，通过大量预实验，采用磷酸盐-乙腈-甲醇做流动相，专属性强，灵敏度高，适用于注射用雷贝拉唑钠中有关物质的检测。

1 仪器、试剂与试药

岛津LC-10A高效液相色谱仪系统，包括LC-10ATvp泵，SPD-10A紫外检测器，C-R8A色谱数据处理仪。

乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾为分析纯。

对照品雷具拉唑钠：由江苏奥赛康药业有限公司提供，批号：20080508，含量：99.97%；供试品：注射用雷贝拉唑钠，规格：20 mg（以C18H21N3O3S计），由江苏奥赛康药业有限公司提供，批号：20080511、20080515、20080519。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Shimadzu C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：(a)磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠1.119 g和磷酸二氢钠0.179 g，加水1000 mL溶解，混匀）-乙腈 （60︰40），(b)0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲溶液(0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液调 pH7.0)-乙腈 （70︰30），(c)0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲溶液-甲醇-乙腈 （50︰30︰20，1.0 mol·L-1氢氧化钾溶液调 pH 7.0）；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：286nm；进样量：20 μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 供试品溶液的制备取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠15 mg），置50 mL量瓶中，加0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.3 mg·mL-1的供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备取雷贝拉唑钠对照品15 mg，精密称定，置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 流动相筛选

[7-9]，注射用雷贝拉唑钠有关物质检查流动相常用的成分有磷酸盐、乙腈、甲醇等，在查阅国内外资料的基础上，通过摸索，本文采用流动相(a)、(b)、(c)对供试品溶液进行检测。由图2结果表明：在流动相(a)、(b)、(c)中，有关物质 2 与主峰 1 之间的分离度分别为1.5、1.5、2.4，有关物质2与主峰1面积百分比分别为0.64%、0.64%、0.65%。即流动相(c)在主峰的保留时间、主峰与杂质峰的分离度方面均优于流动相(a)、(b)。且用流动相(c)进行空白溶剂及辅料干扰性试验，结果溶剂及辅料在主峰及杂质峰出峰位置均无干扰。因此流动相(c)适合注射用雷贝拉唑钠有关物质的检测。

2.4 专属性考察

2.4.1 破坏性试验酸破坏：取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠15 mg），置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1盐酸溶液4 mL，摇匀，于室温条件下放置4 h后，滴加1 mol·L-1氢氧化钠溶液中和，再加0.001 mol·L-1氢氧化钠稀释至刻度。

碱破坏：取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液4 mL，摇匀，于室温条件下放置4 h后，滴加 1 mol·L-1盐酸溶液中和，再加 0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液稀释至刻度。

氧化破坏：取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠15mg），置50mL量瓶中，加30%过氧化氢2mL，摇匀，于室温条件下放置4 h后，加0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液稀释至刻度。

光照破坏：取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，置强光条件下（4500 Lx）放置 4 h 后，取出。

热破坏：取本品内容物50 mg（相当于雷贝拉唑钠 15 mg），置 50 mL 量瓶中，加 0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液使溶解并稀释至刻度，置100℃水浴上加热4h取出，冷却。

取上述5种溶液，采用流动相(c)，按上述色谱条件分别进样，记录色谱图。由图3可见，雷贝拉唑钠在酸、热破坏下不稳定；各破坏条件下均产生数个分解产物峰，各分解产物峰与主峰的分离度达到了1.5以上，各杂质峰之间也能达到较好地分离，此色谱条件能满足本品有关物质检查的需要。

2.4.2 峰纯度检验取“2.2.1”项下供试品溶液，采用流动相（c）色谱条件，但采用二极管阵列检测器检测，结果表明主成分峰雷贝拉唑峰纯度系数大于0.999，为单峰。

2.4.3 理论板数和拖尾因子的测定“2.4.2”项下的理论板数和拖尾因子分别为9668和1.08。

2.4.4 最低检测限和定量限测定取“2.2.2”项下的对照品溶液，用0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液进行适当稀释后，按上述色谱条件进行测试，直至进样所得图谱中雷贝拉唑峰的响应值约为基线噪音的3倍和10倍，根据此时进样浓度算出雷贝拉唑最低检出限与定量限分别为0.6ng和2.0ng。

2.4.5 样品中有关物质的考察取3批样品及对照品，按“2.2”项下的溶解方法和上述色谱条件进行检测，3批样品的测定结果有关物质峰2与峰1的面积比分别为0.65%、0.62%和0.67%，符合《中国药典》中有关要求。

3 讨 论

3.1 检测波长的选择

取本品，加0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液制成每1 mL含雷贝拉唑钠0.012 mg的溶液,照紫外-可见分光光度法测定，在190 nm～450 nm波长范围内绘制吸收曲线图，紫外图谱显示，本品在220 nm与286 nm的波长处有最大吸收，其中在220 nm波长，流动相本身有吸收，干扰主成分测定,故选用286 nm作为有关物质的测定波长。

3.2 从雷贝拉唑钠结构上分析

1H–苯并咪唑钠盐在酸性及加热条件下，极易被氢取代，3-甲氧基丙氧基中的两个醚键也易断开，亚磺酰基链也溶液断开。正如雷贝拉唑钠破坏性试验所示，其在酸性及加热下不稳定。国外的文献资料显示：有关物质2基本上可以确定为亚磺酰基键断裂产物。

3.3 溶剂的选择

本实验用 0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液作溶剂而不用流动相，是因为流动相呈中性，雷贝拉唑钠易分解。实验中用流动相做溶剂，连续进样，图谱中的杂质峰逐渐增多，放置24 h后，溶液由无色变为亮黄色。故选用0.001 mol·L-1氢氧化钠溶液作溶剂。

参考文献

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