吗替麦考酚酯干混悬剂的制备及含量测定

张忠伟，陈一凡

1张家港市第一人民医院药剂科，张家港 215600；2南京易亨制药有限公司，南京 211800

吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil,MMF)是麦考酚酸（mycophenollic acid,MPA）的2-乙基酯类衍生物，在体内脱酯化后形成具有免疫抑制活性的代谢产物。后者通过抑制鸟嘌呤的合成，选择性阻断T和B淋巴细胞的增殖，对移植排异和自身免疫性疾病均有显著疗效。临床上已应用于器官移植和自身免疫性疾病[1]，且副作用少。干混悬剂，适用于不易溶的药物，与片剂和胶囊等口服制剂相比较，尤其是吞咽有困难的儿童和老人来说，具有使用方便的优点；与液体制剂相比较，具有易贮存、好携带的特点。查阅已有的相关文献，未见有关本品干混悬剂的制备工艺和质量研究方面的报道。本文建立了采用HPLC法测定吗替麦考酚酯干混悬剂含量的方法，其操作简便，重复性好，制剂辅料对其测定没有干扰。

1 仪器与试药

LC-10ATVP高效液相色谱仪系统，SPD-10AVP紫外检测器 (日本岛津公司);SB2000超声波清洗器(上海超声清洗仪器厂);奥豪斯AP250D十万分之一天平(上海天平仪器厂)。

吗替麦考酚酯原料(福建科瑞药业有限公司，纯度99.4%)；吗替麦考酚酯对照品(福建科瑞药业有限公司，纯度99.8%)；吗替麦考酚酯干混悬剂(自制,规格：250 mg，批号:040308、040420、040422、040424)；乙腈为色谱纯;三乙胺、磷酸为分析纯;水为重蒸馏水。

2 方法及结果

2.1 样品制备

2.1.1 制剂处方吗替麦考酚酯250g，甘露醇750g，羧甲基纤维素钠5 g，聚维酮K3050 g，磷酸二氢钠5 g，阿斯巴甜5 g，香精适量。

2.1.2 制备工艺取处方量的吗替麦考酚酯原料粉碎，过100目筛，与羧甲基纤维素钠、聚维酮K30、磷酸二氢钠、阿斯巴甜、甘露醇和香精等按等量递增法混合均匀后，过60目筛；干法制粒，过16目筛；测定中间体含量，分装，即得。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱型号为大连依利特Hypersil C8(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-水-三乙胺（50︰40︰0.2）（用磷酸调 pH 值至 3.8）； 检测波长：249 nm；流速:1 mL·min-1；进样量：20 μL。 见图 1。

2.2.2 溶液的制备对照品溶液的制备：精密称取吗替麦考酚酯对照品适量，加流动相溶解制成每1毫升中含吗替麦考酚酯0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：精密称取样品适量（相当于吗替麦考酚酯50 mg），置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5 mL至50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 线性关系考察精密称取吗替麦考酚酯对照品适量 (25.1 mg)，精密称定，置25 mL量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液 0.3、0.5、1.0、1.5、2 mL 分别置 10 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密量取各溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。吗替麦考酚酯的回归方程为：Y=12470X-8927（r=0.9999，n=5）。 吗替麦考酚酯在 30.06～200.40 μg·mL-1范围内有良好的线性关系。

2.2.4 精密度试验取对照品溶液连续进样6次，测定峰面积，吗替麦考酚酯峰面积的RSD为0.3%。

2.2.5 重复性试验取同一批号的样品（040308批）6份，按照“供试品溶液制备”项下同法制备溶液，注入液相色谱仪，依法测定，所测样品含量为99.7%，RSD为0.4%。

2.2.6 稳定性试验取重复性试验样品溶液一份，分别于 0、2、4、6、8 h 进样，测定峰面积，吗替麦考酚酯峰面积的RSD为0.3%。

2.2.7 回收率试验精密称取吗替麦考酚酯对照品约40、50、60 mg各3份，分别置于50 mL量瓶中，按处方比例分别加入空白辅料的各组分，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液5mL至50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按照上述色谱条件测定，计算回收率。结果表明本方法的回收试验良好（见表1）。

2.2.8 样品测定分别取3批样品，照“供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算含量。3批样品的含量测定结果分别为100.1%、99.8%、99.9%。

表1 回收率试验结果（n=9）

3 讨 论

参照吗替麦考酚酯片“标准”[2]中的色谱条件，曾以辛基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-水-三乙胺磷酸缓冲液（取三乙胺10 mL，加水990 mL，混匀，加磷酸约 4.75 mL，调 pH 值至 5.4±0.1）（40︰40︰20），检测波长 249 nm，结果表明主峰出峰时间迟，柱效低，分离效果差。故参照文献[3]调整流动相的比例和pH值，最终确定流动相为：乙腈-水-三乙胺 （50︰40︰0.2）（用磷酸调节 pH值至3.8）。在该流动相下，杂质和空白辅料能够很好的获得分离，对吗替麦考酚酯的测定没有干扰，适用于吗替麦考酚酯干混悬剂的质量控制。

[1] 陈朝生.新型免疫抑制剂麦考酚酸酯[J].中国新药与临床杂志，2000，19(1):51-3.

[2] 国家食品药品监督管理局药品标准 （试行）（YBH08952003）[S].

[3] 徐创莉，陈赞民.HPLC法测定吗替麦考酚酯有关物质并作优化条件评定研究[J].中国热带医学，2006，6(11):1967-8.