血清乙酰肝素酶与2型糖尿病代谢性指标的相关性研究

赵 越，余江毅，安晓飞

乙酰肝素酶 (heparanase，HPSE)是一种能特异性水解硫酸乙酰肝素 (heparan sulfate，HS)的内源性糖苷酶［1］，由HS与核心蛋白组成的硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (heparanase sulfate proteoglycan，HSPG)广泛存在于细胞表面、细胞外基质和基底膜中。相关研究表明，HPSE高表达可降解HS［2－3］，破坏细胞外基质和基底膜的完整性［4］，并释放结合在HS上的多种活性分子［5］，与糖尿病 (diabetes mellitus，DM)血管病变尤其是糖尿病肾病 (diabetic nephropathy，DN)蛋白尿的产生关系密切［6］。

最近研究发现，糖尿病患者尿液中HPSE活性较健康者明显升高［7］，高糖状态和氧化应激可能是诱导内皮细胞中HPSE表达及活性升高的重要因素［8］。但目前关于糖尿病代谢异常与血清HPSE表达水平的关系，相关临床研究尚不多见。本研究用酶联免疫吸附法 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定120例2型糖尿病 (type 2 diabetes mellitus，T2DM)患者的血清HPSE水平，分析其与糖尿病代谢指标(血糖、血压、血脂、腰围等)的关系，初步探索T2DM代谢异常对血清HPSE的可能作用。

1 资料与方法

1.1 病例纳入标准 入选标准:(1)符合《中国2型糖尿病防治指南 (2007年版)》T2DM诊断标准［9］;(2)年龄50～75周岁，性别不限;(3)无慢性并发症，或仅有轻度微血管并发症 (尿清蛋白排泄量＜200μg/min或＜300 mg/d;无明显视网膜病变或只有轻度非增生性糖尿病视网膜病变);(4)血压≤140/90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa);(5)体质指数(BMI)≤30 kg/m2。排除标准:(1)空腹血糖 (FBG)≥13.9 mmol/L，或近1个月内出现糖尿病危急重症如酮症酸中毒、糖尿病高渗状态;(2)已有大血管并发症，如冠心病、脑血管意外、下肢血管病变等;(3)具有严重的原发性心、肝、肺、肾、血液系统疾病或影响其生存的严重疾病。

1.2 一般资料 选取2008年3—9月在江苏省中医院内分泌科门诊就诊的T2DM患者120例，其中男58例，女62例;平均年龄 (61.7±6.5)岁;糖尿病病程平均 (6.0±4.5)年。1.3 方法 对纳入的T2DM患者测定其血清HPSE及相关代谢指标水平，分析血清HPSE与各指标间的相关性。参考《中国2型糖尿病防治指南 (2007年版)》中相关代谢性指标的控制目标将各指标分层，比较血清HPSE在分层后不同组别间的差异。

主要观察指标:血清HPSE;腰围、BMI;血糖 ［FBG、餐后血糖 (PBG)］、糖化血红蛋白 (HbA1c);收缩压、舒张压;胆固醇 (TC)、三酰甘油 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL－C)。

血清HPSE检测方法:使用人乙酰肝素酶酶联免疫分析试剂盒 (USCNLIFE;产品编号:E0711h)检测血清HPSE水平，检测方法为ELISA改良双抗体夹心法。

主要检测仪器:HPSE检测采用BIO－RAD Model－1575洗板机、BIO－RAD Model－680酶标仪;生化指标检测采用Olympus－AU2700全自动生化分析仪。

1.4 统计学方法 采用SAS 9.0统计软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料以表示，采用t检验。不符合正态分布时可改用其他统计方法或进行数据转换。相关分析采用Pearson单因素相关分析。采用双侧检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清HPSE与糖尿病代谢指标的相关性 120例T2DM患者血清 HPSE为 (1.32±1.37)U/L，腰围为 (84.3±8.1)cm，BMI为 (24.0±2.7)kg/m2，FBG为 (7.0±1.9)mmol/L，PBG为 (10.3±3.8)mmol/L，HbA1c为 (6.5±1.3)%，收缩压为 (130.0±13.3)mm Hg，舒张压为 (76.8±9.3)mm Hg，TC为 (4.78±0.84)mmol/L，TG为 (1.49±0.94)mmol/L，HDL－C为 (1.28±0.31)mmol/L，LDLC为 (2.86±0.66)mmol/L。血清HPSE与上述代谢指标均无相关性 (P＞0.05，见表1)。

2.2 T2DM患者血清HPSE水平在不同代谢指标分层间的比较FBG≥5.6 mmol/L组患者血清HPSE水平显著高于FBG＜5.6 mmol/L组，差异有统计学意义 (p＜0.05);其余糖尿病代谢指标分层间血清HPSE水平比较，差异均无统计学意义(P＞0.05，见表2)。

表1 120例T2DM患者血清HPSE与糖尿病代谢指标的相关分析结果Table 1 The correlation analysis between serum HPSE and the metabolic index in 120 type 2 diabetic patients

3 讨论

有研究报道，高糖和氧化应激压力增加可使猪主动脉内皮细胞HPSE表达水平和活性明显升高［8］，其机制可能是高糖激活了Sp1、Egr－1、Ets等转录因子导致 HPSE基因转录增加［10］。而糖尿病正是以长期血糖升高为主要表现的一组代谢异常综合征，糖尿病患者高血糖和各种引起氧化应激压力增加的危险因素与HPSE水平之间应具有一定相关性。本研究结果显示，血清HPSE水平与FBG、PBG、HbA1c、腰围、BMI、收缩压、舒张压、血脂均无相关性。而在对各种危险因素进行不同的分层后进一步比较不同组别的HPSE水平时发现，血清HPSE水平在FBG＜5.6 mmol/L组显著低于FBG≥5.6 mmol/L组 〔(0.92±1.25)U/L与 (1.52±1.41)U/L，p＜0.05〕;其余各危险因素分层后比较，血清HPSE水平均未见明显差异。

FBG水平较高的T2DM患者血清HPSE水平也较高，这为血糖调节HPSE高表达从而参与糖尿病血管病变的假设提供了一定的证据，但仍存在以下几点问题:(1)本研究缺乏与正常人群的对照，因此尚不确定糖代谢异常的T2DM患者较正常人群血清HPSE水平是否升高。(2)血清HPSE在FBG以5.6 mmol/L为切点的分层比较有明显差异，而在FBG以6.1 mmol/L为切点的分层比较未见明显差异。由此提示，血糖升高诱导HPSE表达增加是否存在一个激发域值，当血糖高于某个域值时，即可激活转录因子使HPSE表达增加及活性HPSE向细胞外转移增多，而在低于这个域值时，血糖的变化不会引起HPSE的改变，但目前研究尚未见此方面的发现和报道。(3)相关研究显示，30 mmol/L葡萄糖培养内皮细胞1周后，在细胞裂解液中检测到HPSE表达及活性较空白对照组、高糖加胰岛素组明显升高［8］。30 mmol/L葡萄糖是在实验室条件下使用的特殊手段，与本调查中FBG平均 (7.07±2.01)mmol/L、PBG平均 (10.27±3.87)mmol/L的血糖水平有较大差距，是否只有在如此高水平的葡萄糖浓度下才能诱导HPSE转录增加?其他葡萄糖水平对HPSE转录影响如何?表达增加的HPSE是否会从溶酶体释放到血清中?上述问题尚无明确的答案。因此，目前的研究结果尚不能得出血糖升高可调节T2DM患者血清HPSE表达增加的结论，但血糖可能是T2DM患者血清HPSE升高的重要危险因素。

表2 不同糖尿病代谢指标分层间血清HPSE水平比较 (U/L)Table 2 The comparison of serum HPSE in groups divided by different DM metabolic index levels

综上所述，本研究在现有的关于HPSE研究结论的基础上，分析了T2DM患者血清HPSE与血糖、血压、血脂等代谢指标之间的关系，初步探索了血清HPSE受血糖影响的可能依据，若能在后续的研究中克服一些资料和方法学上的局限，采用更为科学、合理的设计，可能会获得更有意义的结果。

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