鱼金注射液被动皮肤过敏试验及对血清IgE的影响

高天红， 朴晋华， 王婷婷 (山西医科大学基础医学院药理教研室， 太原 03000;山西省药品检验所;通讯作者，E-mail:marypiao@6.com)

鱼金注射液是鱼腥草与金银花提取物精制而成的纯中药注射剂，有清热解毒功效，用于热毒内盛而致的上呼吸道感染、支气管肺炎、病毒性肺炎、化脓性疾病、妇科炎症与术后发热［1］。但中药注射剂成分复杂，且多与其他药物联合应用，增加了不良反应的发生率。近年有文献报道静脉滴注鱼金注射液能引起变态反应［2，3］，引发了人们对鱼金注射液安全性再评价的关注。本试验重点考察了鱼金注射液、鱼金蒸馏液及吐温80对大鼠被动皮肤过敏反应与血清IgE的影响，以期确定过敏反应的来源。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物与试剂 鱼金蒸馏液(070511，万荣三九药业有限公司);鱼金注射液(0604032，2 ml/支，万荣三九药业有限公司);吐温80(061219，药用，上海申宇医药化工有限公司)，临用前以氯化钠注射液稀释至所需浓度;牛血清白蛋白(051201，上海伯奥生物科技有限公司);氯化钠注射液(A07011402，山东华鲁制药有限公司);IgE测定试剂盒(美国Bethyl公司)。

1.1.2 仪器 酶标仪(芬兰 Thermo，DENLEY DRAGON Wellscan MK3);洗板机(芬兰 Thermo，Wellwash 4 MK2)。

1.1.3 动物 SD 大鼠，64只，体重200－280 g，北京市海淀兴旺动物养殖场提供，动物合格证号:SCXK(京)2006－0006，使用许可证号:SYXK(晋)2003－0005。所有动物在实验前适应试验室环境至少3 d，期间进行检疫。在适应环境及实验期间，动物分笼群养，给予大鼠颗粒饲料，自由饮水。动物室维持12 h照明，室温17－25℃，相对湿度30% －70%，检疫期间，进行外观及一般临床症状的观察，包括:动物的外形、体形、行动、呼吸、被毛、鼻、口、眼、耳、生殖器、尿、粪便等。

1.2 方法［4，5］

1.2.1 抗血清制备 取雄性大鼠16只，260－280 g，随机分为 8 组:鱼金蒸馏液 2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 组、鱼金注射液 2.67 ml/kg，1.33 ml/kg 组、0.02 ml/kg，0.01 ml/kg吐温80 组、阴性抗原组(0.9%氯化钠注射液0.5 ml/只)、阳性抗原组(牛血清白蛋白0.5 mg/只)，每组2只。分别给大鼠腹腔注射相应剂量的抗原，隔日一次，共4次，末次致敏后14 d，腹主动脉采血，以3 000 r/min离心10 min，取上层血清即得8种抗血清。

1.2.2 被动皮肤致敏 取大鼠48只，雌雄各半，体重200－220 g，随机分为8组:鱼金蒸馏液2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 组，鱼金注射液 2.67 ml/kg，1.33 ml/kg组，0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 吐温 80 组，阴性抗原组(0.9%氯化钠注射液0.5 ml/只)，阳性抗原组(牛血清白蛋白0.5 mg/只)，每组6只。将各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5 cm，各取两点，每点间隔2 cm，面积约1 cm×1 cm，共4点。分别在背部皮肤内注射相应抗血清的4种不同稀释度(1∶2，1∶4，1∶8，1∶16)0.1 ml，进行被动致敏。

1.2.3 激发 被动致敏48 h后，各组尾静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原的1%依文思蓝溶液1 ml/只，进行激发。

1.2.4 结果评价 激发后20 min，各组动物腹主动脉采血，离心取血清测定血清IgE含量，采血后即刻处死动物，剪取背部皮肤，测量皮肤内层的斑点大小，直径大于5 mm者判为阳性。

2 结果

由表1 可见，2.65 ml/kg，1.32 ml/kg 鱼金蒸馏液组，1.33 ml/kg鱼金注射液组，阴性对照组激发20 min后，皮肤内层的蓝色斑点直径均不大于5 mm，未发生过敏反应。2.67 ml/kg鱼金注射液组、0.02 ml/kg，0.01 ml/kg吐温 80 组激发 20 min 后，每组均有动物皮肤内层的蓝色斑点直径大于5 mm，发生过敏反应。阳性组给予5 mg/ml牛血清白蛋白激发后，5只大鼠皮肤内层的蓝色斑点直径大于5 mm，呈阳性反应。鱼金注射液2.67 ml/kg组、吐温80 0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 组和阳性组动物血清IgE含量升高，与阴性对照相比有显著性差异。

3 讨论

鱼金注射液由鱼腥草(4 000 g)、金银花(2 000 g)蒸馏水润湿后，加蒸馏水6－8倍，经水蒸气蒸馏得初馏液，再进行重蒸馏，收集馏液1 000 ml，加入8.5 g氯化钠、8 ml吐温80搅匀、滤过、灌封、灭菌后制得［1］。其中吐温80是中国药典收载的药用辅料，正名为聚山梨酯80，用于药品的增溶、乳化等［6］。在鱼金注射液中用于形成稳定溶胶来提高其澄明度并保留有效成分。避免因中药成分复杂和某些有效成分溶解度小，经加热灭菌或放置一段时间后，药液变色、浑浊和沉淀;同时避免因单纯使用超滤方法净化药液可能丢失注射液有效成分。国外对吐温80的安全性进行了深入研究，已积累了大量资料［7］;国内也有研究证实吐温80可引起犬过敏，并有体温下降，心率增快［8］。但对吐温80引起的被动皮肤过敏反应未见报道。

被动皮肤过敏试验是一种较为敏感的测试特异抗体滴度的方法。将受试物致敏动物的血清予正常动物皮内注射，IgE Fc端与皮肤肥大细胞表面特异受体结合，形成IgE复合物，使肥大细胞致敏。当抗原攻击时，抗原与肥大细胞表面上IgE Fab端结合，导致IgE分子结构改变，引起肥大细胞脱颗粒，释放组胺、慢反应物质等过敏介质，致皮肤局部血管通透性增加，使抗原激发时同时注入的伊文思蓝染料在该皮肤处渗出着色。根据局部皮肤蓝染范围或程度，可判定血管通透性变化的大小，继而判定皮肤过敏反应的程度［4］。IgE是引起Ⅰ型变态反应的主要原因，检测血清或体液中IgE水平对明确是否存在Ⅰ型变态反应和认识药物诱发变态反应机制具有重要意义。

表1 鱼金注射液对SD大鼠被动皮肤过敏反应及血清IgE的影响Tab 1 Results of the passive cutaneous anaphylaxis test for Yujin injection and the influence on serum IgE in SD rats

试验结果显示，鱼金注射液2.67 ml/kg、吐温80 0.02 ml/kg，0.01 ml/kg 剂量组血清 IgE 含量升高(P＜0.05)，致敏反应阳性率分别为33%，50%，33%，表明上述剂量组分别引起了SD大鼠的Ⅰ型变态反应，提示鱼金注射液诱发的过敏阳性反应和血清IgE含量升高可能与吐温80有关。值得注意的是鱼金注射液1.33 ml/kg剂量组所含吐温80剂量与吐温80 0.01 ml/kg剂量组一致，未引起过敏阳性反应。据文献报道，有企业发现同一种中药注射剂使用不同产地的吐温80，其成品溶血性试验差异很大，在生产中须慎重选择［9］。是否不同来源的吐温80对Ⅰ型变态反应的影响同样存在差异，这有待于进一步探讨。

［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十七册［S］.1998:169－170.

［2］ 刘春梅，元彩.静脉滴注鱼金注射液致过敏反应一例［J］.医疗装备，2006，19(10):19.

［3］ 刘云芳，陈华.鱼金注射液致变态反应2例［J］.药物流行病学杂志，2004，13(2):108.

［4］ 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光过敏反应)研究的技术指导原则［S］.2005:5－7，18－19.

［5］ 徐淑云，卞如濂，陈修，等.药理学实验方法［M］.3版.北京:人民卫生出版社，2002:1408.

［6］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:1246－1247.

［7］ 王庆利，彭健.吐温80的安全性研究进展［J］.毒理学杂志，2006，20(4):262 －264.

［8］ 何永亮，易勇，王红星，等.含吐温80中药注射液对犬致过敏的研究［J］.中药药理与临床，2005，21(1):55 －56.

［9］ 费建，军周丽，崔友，等.两种吐温－80的溶血性试验观察［J］.黑龙江医药科学，2001，24(4):40.