CL-BIII残留农药测定仪快速测定蔬菜农残技术

孙民

CL-BIII残留农药测定仪快速测定蔬菜农残技术

孙民

孙民，青海西宁市农产品质量安全检测中心，810008，电话：13709761950，E-mai1：sunmin1994@163.com

我国是农药使用大国，年使用量80万～100万t，居世界首位，由农药残留引起的食物中毒事故屡有发生，主要有在蔬菜、瓜果上使用高毒农药后短时间内采摘和食用所引起的急性中毒和农药残留量超过最高允许限量（MRL值）长期食用引起的慢性中毒2种。由于农药品种结构不合理，加上一些人为的不合理使用，以及农药残留监管力度不够，致使我国农药残留问题比较突出。由于高毒、高残留的有机磷农药，如对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、敌敌畏及甲胺磷等占据了杀虫剂产量的70%以上，造成70%以上的中毒事故由有机磷农药引起，直接影响人民身体健康和农产品在国际市场的竞争力，并已经成为国家领导和社会公众高度重视和广泛关注的问题。随着我国人民物质生活水平的不断提高及市场经济和世界经济贸易一体化的不断推进，农产品的质量安全问题日益突出，尤其是农产品中的农药残留量超标问题，因此，农药残留快速检测技术是保护人民生命安全，提高农产品质量和品牌效应，增强农产品市场竞争力的有效途径。

1 农药残留酶抑制率法的概念

农药残留是农药使用后残存在生物体和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。其含量以mg/kg表示。

酶抑制率法指根据有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用，通过计算待测样品对乙酰胆碱酯酶活性的抑制率，定性判断其中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药及其存在总量的一种快速初筛方法。

2 仪器主要用途和原理

CL-BIII八通道型残留农药测定仪，主要用于测定果蔬中有机磷类与氨基甲酸酯类农药的残留量。

CL-BIII残留农药测定仪和所配套的试剂依据的是中华人民共和国国家标准 GB/T 5009.199－2003 《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》。该标准是根据酶的活性变化程度，定性和半定量地测定果蔬中农药的残留量，并用抑制率来表示残留农药量的多少。若被测样本的酶抑制率＜50%，属于阴性，为安全果蔬；若被测样本的酶抑制率≥50%，属于阳性，为农药残留的毒性超标，建议重复检测2次，如再超标可送有关部门作进一步的化学分析检测。

3 试剂配制

提取液配制：把甲乙粉末倒入大玻璃瓶中，加入510 mL蒸馏水或纯净水溶解。

酶试剂配制：用移液枪取3.1 mL提取液，加入酶试剂瓶中。

显色剂配制：取2.5 mL提取液，倒入棕色显色剂瓶中，重复2次，再往棕色瓶中直接加15 mL提取液，总容积为20 mL。

底物配制：用移液枪取3.1 mL蒸馏水或纯净水，加入底物瓶中。

4 检测分析过程

4.1 开机

接通农药残留检测仪电源，按两次“确定”键，然后按“设置”键，再按“确定”把光标选到“受控”，按“确定”，此时仪器会出现“正处于受控工作模式”字样，表明仪器与电脑已正常连接，打开检测软件。

4.2 正确取样

称样时，蔬菜样品不能剪切得太小，以2 cm×2 cm为好；对于颜色深的蔬菜尽量取茎、叶各一半为好；对于果品，可以顺皮削下一块或取皮下部分；对于有味蔬菜可以使用检测软件的对照标样库来检测；而葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、芫荽、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性，处理这类样品时，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面测定法；对一些叶绿素含量较高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，减少色素的干扰。另外，所测试样的不同部位农药残留情况不同，为准确反映该样品的农药残留情况，取样必须有代表性，不可以点代面。

4.3 提取残留液

用天平称取 1 g果蔬，剪成（1～2） cm×（1～2） cm放入烧杯中，用大移液枪抽取5 mL提取液加入到烧杯中，静置15 min，得到的清液即为样品残留液。再用大移液枪从中抽取2.5 mL浸泡液放入试管中备用，有条件的最好选用振荡器，以消除人为因素的干扰及样品处理的时间。

4.4 空白对照溶液测试

用大移液枪抽取2.5 mL提取液放入试管中，用小移液枪取0.1 mL酶试剂加入试管中，再用小移液枪取0.1 mL显色剂加入试管中，用小移液枪取0.1 mL底物加入试管中，迅速摇匀并倒入比色皿，放入比色池，按“对照”键，等待结束。反应测试时间为3 min，测试时间确定后，样品处理液测试时间与之相同。结果显示对照溶液反应吸光度变化值△A0。

4.5 样品处理液测试

用小移液枪取0.1 mL酶试剂加入有样品残留液的试管中，再用小移液枪取0.1 mL显色剂加入试管中，静置15 min，用小移液枪取0.1 mL底物加入试管中，迅速摇匀并倒入比色皿，放入比色池，按“开始样品分析”键，等待结束。结果显示样品溶液反应吸光度变化值At和其酶抑制率A%。

4.6 结果判定

抑制率（A）计算：A（%）=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%。

结果判定：结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。

5 检测注意事项

①检测仪在每次开机后检测前需先调零，然后放置比色皿开始检测，不可倒置。在测试样品前，都要先做一次对照测试。若对照测量后，有关机重启，则需重新测量对照。

②移液器使用时，必须遵循器具专用原则，吸取酶、显色剂、底物时分别使用不同的移液器。移液器的枪头不能互相污染，都要各自贴上标签，移取试剂时要一一对应使用。禁止混用，以免造成试剂污染。转移或滴加液体要准确，释放液体要彻底。在移液枪将试剂加入检液时，一定要保证枪头垂直于液面，不能将试剂加到试管壁上。

③已配制完的试剂应按照要求，放在冰箱保鲜层中贮存，切勿冻结。使用前摇匀，并恢复至室温。为防止试剂变质失效，配制过的溶液可采取分装制，即取即用。测试时，从任何试剂瓶中吸出的试剂；必须坚持只出不进的原则，禁止再次注射回试剂瓶，防止污染整瓶试剂。

④在加酶试剂显色反应时，对照测量和样品测量加入的量和测试时间一定要一致，且速度尽量快。严格把握对照液配制到入检测仪这段时间的长短。加入底物后立即检测，否则速度太慢会导致偏差。

⑤操作检测仪时，必须注意比色皿通光面不能受到手指或油迹等污染，如有脏物可用擦镜纸擦拭干净。每次放入比色皿必须保持比色皿方向一致，不能反向，放置的位置也应保持一致，紧靠一个定位面，不能歪斜，所有溶液和药品，不能洒在仪器外壳或测量室内。

2011-08-22快速农药残留检测技术是保护人民生命安全，提高农产品质量和品牌效应，增强农产品市场竞争力的有效途径。常用CL-BIII八通道残留农药测定仪测定果蔬中有机磷类与氨基甲酸酯类农药的残留量，为确保结果的准确性，使用该仪器检测时有五点请注意：开机后检测前需先调零；遵循器具专用原则；配的试剂放在冰箱保鲜层中贮存，使用前摇匀并恢复至室温；对照和测样的显色反应保持一致且快速；比色皿通光面不能受到手指或油迹等污染。