Cyr61和HIF-1α在胃癌中的表达及临床意义

武新华,亓玉芹

1.中国人民解放军第 401医院门诊部,山东 青岛 266071;2.青岛市市立医院

肿瘤的侵袭转移过程涉及多分子作用机制和信号传导通路[1]。近年来研究发现,人富含半胱氨酸 61 (cysteine rich61,Cyr61)蛋白。在食管腺癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌等消化系肿瘤侵袭和转移中起重要作用。Cyr61可通过NF-κB与PI3K/mTOR和MAPK依赖的信号通路促进低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducing factor-1α,HIF-1α)蛋白合成增加,从而促进胃癌细胞的侵袭性[2]。但目前国内外有关Cyr61和HIF-1α与胃癌的研究报道较少。本研究应用免疫组化检测不同胃癌组织中Cyr61和HIF-1α的表达,并分析其与临床病理参数之间的关系,旨在进一步明确二者与胃癌侵袭的关系,为胃癌的诊断和治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 标本来源 取青岛市市立医院普外科2008年1月 ～2009年 12月手术切除的标本共 40例,标本均经病理科两位以上的资深医师证实,术前均未接受任何化疗或放疗,且均进行了局部淋巴结的清扫。

40例标本分为 3组,分别为原发性胃癌组、配对癌旁组(距离边缘2 cm)及配对的手术切缘正常组(距离边缘5 cm以上),将胃癌手术切除标本立刻固定10%的甲醛溶液中,石蜡包埋,以备病理检查用。

1.2 主要试剂和仪器 Cyr61和HIF-1α兔多克隆抗体(武汉博士德公司)为一抗,第二抗体试剂:EnVision试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司。染色剂:二氨基联苯胺四盐酸盐(Diamino benzidine,DAB)购于福州迈新生物技术开发公司。

1.3 实验方法和主要步骤 免疫组织化学检测胃癌组织中Cyr61和HIF-1α的表达,采用的是EnVision二步法。主要步骤如下:石蜡切片常规脱蜡水化后,浸于0.01mol/L枸橼酸溶液(pH 6.0),微波中火4min进行抗原修复。操作严格按说明书进行,取已知阳性切片作为阳性对照,用PBS液代替第一抗体试剂作为阴性对照。

1.4 结果判断 Cyr61阳性判断标准:以胞质呈棕黄色为阳性。免疫标志的阳性标准:无阳性细胞为阴性;阳性细胞＜10%为弱阳性;阳性细胞10%～50%为阳性;阳性细胞≥50%为强阳性。HIF-1α参照Zhong等[3]的方法,以细胞核或细胞质内呈棕黄色为阳性,高倍镜下(400×)对每张切片随机选择 5个视野,每个视野计数200个细胞,共计1 000个。0分:无着色; 1分:＜1%的细胞核着色;2分:1%～10%的细胞核着色和(或)胞质弱着色;3分:10%～50%的细胞核着色和(或)胞质明显着色;4分:＞50%的细胞核着色和(或)胞质强着色。评分结果:0～1分定为阴性,2～4分定为阳性。

1.5 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件,Cyr61及HIF-1α的表达以均数±标准差(±s)表示。组间计量资料的比较采用 t检验,计数资料的比较采用 χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Cyr61在各组中表达水平的比较 Cyr61在胃癌细胞的胞浆中呈阳性表达,Cyr61在胃癌中表达的阳性率(95%)高于癌旁组(80%)和正常组(50%),差异有统计学意义(χ2=7.440,P＜0.01;χ2=20.313,P＜0.01);癌旁组与正常组比较有显著性差异(χ2= 7.915,P＜0.01,见图1、表1)。

表1 免疫组化检测Cy r61和H IF-1α表达Tab 1 Expression of Cyr61 and HIF-1αdetected by inm uohistochem istry

2.2 HIF-1α在各组中表达水平的比较 HIF-α在胃癌细胞的胞浆中呈阳性表达,HIF-1α在胃癌中表达的阳性率(90%),高于癌旁组(35%)和正常组(2.5%),差异有统计学意义(χ2=25.813,P＜0.01;χ2= 61.596,P＜0.01),癌旁组的表达高于正常组(χ2= 13.867,P＜0.01,见图2、表 1)。

2.3 胃癌中Cyr61和HIF-1α的表达及其与胃癌临床病理参数的关系 对40例胃癌患者按照性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期进行分组,观察Cyr61和HIF-1α蛋白在胃癌组织中的表达情况(见表2)。Cyr61和HIF-1α蛋白的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及肿瘤分期密切相关,差异具有统计学意义(P均＜0.05),与胃癌患者的性别、年龄及肿瘤大小无关,差异无统计学意义(P＞0.05)。

表2 Cyr61和H IF-1α在胃癌中的表达及与临床病理参数的关系Tab 2 Relationship of expression of Cyr61 and H IF-1αwith clinicopathologic characteristics in gastric cancer

图1 Cy r61在胃癌中的阳性表达(SP 200×);图2 H IF-1α在胃癌中的阳性表达(SP 200×)Fig 1 The positiveexpression of Cyr61 in gastric cancer(SP 200×);Fig 2 The positiveexpression of HIF-1αin gastric cancer(SP 200×)

3 讨论

Cyr61作为CCN(Cyr61/CTGF/NOV)蛋白家族成员可调控内皮细胞和成纤维细胞的黏附、迁移与增殖,分泌细胞外基质、诱导血管生成,参与多种重要的生理、病理过程。在多种肿瘤的发生、发展过程中发挥不同作用。研究发现,在不同的组织细胞及肿瘤中, Cyr61的表达水平不同,其功能也不同。如Cyr61在神经胶质瘤、骨肉瘤中高表达,促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤组织血管形成[4,5]。而 Cyr61在子宫内膜癌、子宫平滑肌瘤、前列腺癌、非小细胞肺癌中低表达,起到类似抑癌基因的作用[4,7]。目前有关 Cyr61与胃癌的研究国内报道较少。本研究发现Cyr61在胃癌组织中呈高表达,明显高于配对癌旁组织及正常组织,同时发现, Cyr61蛋白的表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关,这与 Lin等[8]的研究结果一致。提示Cyr61可用于胃癌的检测及作为胃癌侵袭转移的判断指标之一。

低氧诱导因子-1是由HIF-1α及HIF-1β亚单位构成的异二聚体[9],其中 α亚单位被认为是特异性氧调节亚单位,HIF-1α是其活性调节亚单位。Zhong等[10]研究发现 90%的结肠癌、肺癌及前列腺癌组织中HIF-1α表达升高,而在肿瘤附近正常组织中则不表达。研究发现HIF-1α与胃癌肿瘤大小及肝转移密切相关;王莉等研究发现其与胃癌的淋巴结转移密切相关[11-13]。本研究发现 HIF-1α蛋白在胃癌组织中的表达高于配对癌旁组织,癌旁组织又高于正常组织。同时分析HIF-1α与临床病理参数的关系发现,HIF-1α蛋白的表达与胃癌TNM分期、肿瘤浸润深度和淋巴结转移、细胞分化程度显著相关,而与患者年龄、性别、原发肿瘤大小无关。HIF-1α可作为评估胃癌发展、转移及预后的参考指标之一。

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