宫颈鳞癌及宫颈上皮内瘤变组织中PINCH、nm23-H1蛋白的表达及临床意义

孟亚丽 张霞 王立芹 李学慧 朱振龙 张红真

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，病因尚未完全明了，可能与多种致病因素作用有关，宫颈上皮内瘤变(CIN)是与宫颈癌密切相关的一组癌前病变［1］。PINCH蛋白是LIM(Lin-11、IsI-1和Mec-3蛋白)家族的成员之一，后来被证明该蛋白在多种肿瘤相关间质中表达显著［2，3］，与多种肿瘤的转移与侵袭有关。nm23-H1是一种肿瘤转移抑制基因，抑制细胞的侵袭和转移。本文对宫颈鳞癌及CIN组织中PINCH和nm23-H1的表达情况进行研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集河北医科大学第一医院2008至2010年各项临床资料完整的宫颈鳞癌及CIN蜡块90例(试验组)，其中CIN 30例(CIN组)，(CINⅠ10例、CINⅡ8例、CINⅢ12例)，宫颈鳞癌60例。宫颈鳞癌患者病理组织分级，G1级20例，G2级17例，G3级23例;根据国际妇产科联盟(FIGO，2000年)临床分期，Ⅰ期26例，Ⅱ期23例;Ⅲ期11例。淋巴结转移42例。取因子宫肌瘤而行子宫全切术，术后经病理检查证实为正常宫颈上皮者20例(对照组)。

1.2 试剂与方法 石蜡包埋组织做5μm连续切片，常规HE染色和免疫组化SP法染色。所用兔抗人PINCH蛋白多克隆抗体由Prof.AnnRearden(Department of Pathology，University of California，U.S.A.)惠赠，二抗、三抗购自福州迈新生物技术开发有限公司，用已知阳性的乳腺癌组织作为阳性对照。鼠抗人nm23-H1抗体及SP试剂盒(即用型)购自北京中杉金桥公司，以已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。严格按SP试剂盒说明书操作，DAB显色。

1.3 结果判断标准 PINCH以组织间质中纤维母细胞及肌纤维母细胞的胞膜及胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞;nm23-H1蛋白阳性染色为肿瘤细胞质内出现明显棕黄色细颗粒。每例随机选出10个不重复、不重叠的高倍镜视野(10×40)，计数阳性细胞数及所有细胞数，计算阳性细胞率=∑阳性细胞数/∑细胞数×100%。根据阳性细胞率进行分级，PINCH和nm23-H1阳性细胞率≤10%为阴性，阳性细胞率＞10%为阳性。

1.4 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验、校正χ2检验及线性趋势χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同宫颈组织中PINCH和nm23-H1的表达 正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中，PINCH蛋白的表达呈逐渐增高的趋势，nm23-H1蛋白的表达呈逐渐降低的趋势，差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 不同宫颈组织中PINCH和nm23-H1的表达 例(%)

2.2 PINCH和nm23-H1表达与临床病理特征的关系 PINCH蛋白和nm23-H1蛋白的表达均与患者的淋巴结转移及FIGO分期有关(P＜0.01)，与患者年龄、肿瘤的组织病理分级及肿瘤大小无关(P＞0.05)。见表2。

2.3 PINCH和nm23-H1表达的相关性 在CIN组中，PINCH和 nm23-H1的表达有关联(C=0.697，P＜0.01)。在宫颈癌组中，PINCH和 nm23-H1的表达有关联(C=0.531，P＜0.01)。见表 3、4。

3 讨论

肿瘤的发生、发展、浸润和转移是一个多阶段、多基因参与的过程，既往对肿瘤的研究多集中于肿瘤细胞本身的变化，对肿瘤的间质研究较少，PINCH主要表达在多种肿瘤相关间质中。PINCH蛋白最早是在20世纪90年代由Rearden从人衰老红细胞膜中发现的蛋白质［4］，是LIM(Lin-11、IsI-1和 Mec-3蛋白)家族的成员之一，含有5个LIM结构域(双锌指结构)，通过它特殊的结构域参与连接整合素和生长因子的信号传导系统，在整合素和生长因子信号传导通路中PINCH蛋白处于一个关键的“十字”交汇点处，相当于一个“三通管”的作用，所以在肿瘤的发生、发展中可能起着十分重要的作用［3］。本研究发现，正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中，PINCH在组织间质中表达呈现逐渐增高的趋势，差异有统计学意义(P＜0.01)，表明PINCH蛋白主要存在于正在增殖或具有增殖能力的细胞中，与宫颈癌的恶性程度密切相关，可能是宫颈癌的早期事件，与Zhang等［5］研究结果一致。本研究还发现，PINCH阳性表达与宫颈鳞癌的淋巴结转移和FIGO分期有关，提示PINCH表达强的宫颈组织有较强的侵袭能力，预示预后不良。

表2 宫颈鳞癌组织PINCH和nm23-H1表达与其临床病理特征的关系 例(%)

表3 CIN组中PINCH和nm23-H1表达的关系 例

表4 宫颈鳞癌组中PINCH和nm23-H1表达的关系 例

nm23-H1是一种肿瘤转移抑制基因。nm23-H1编码核苷二磷酸激酶NDPK，其基因的蛋白产物酶参与体内三磷酸核苷的生成，在细胞分化中参与微管的集合以及 G蛋白介导的信号传递过程，使肌球蛋白轻链磷酸化而抑制细胞迁移，诱导凋亡，抑制分化，影响细胞的活动、粘连和附着，从而抑制细胞的侵袭和转移［6］。nm23-H1等位基因的突变、缺失、低表达与多种恶性肿瘤发生转移的潜能密切相关［7］。目前普遍认为nm23-H1与肿瘤发生发展、转移关系密切［8］。本研究结果显示，正常宫颈、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中，nm23-H1表达呈现逐渐降低的趋势，差异有统计学意义(P＜0.01)，说明nm23-H1与宫颈鳞癌发生、发展密切相关，同时还发现临床分期越晚，nm23-H1表达越低，淋巴结转移组阳性表达率显著低于无淋巴结转移组。提示nm23-H1蛋白的表达缺失可能在宫颈上皮内瘤变发展为宫颈癌及宫颈癌继续进展转移过程中发挥着重要作用，表达降低预示预后不良。

本研究结果显示，在宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌组织中，PINCH和nm23-H1的表达相关(P＜0.05)。提示在宫颈癌发生和进展、侵袭转移的生物学行为中，PINCH和nm23-H1可能起到协同作用，若明确其作用，从而阻断宫颈上皮内瘤变向宫颈癌发展，为宫颈癌的早期治疗和及早阻止宫颈癌的淋巴结转移提供新途径。

1 乐杰主编.妇产科学.第7版.北京:人民卫生出版社，2008.261-263.

2 闫宝勇，王大维，李庆星，等.COX-2及PINCH蛋白在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关性.现代口腔医学杂志，2009，23:55-57.

3 郑燕，李学慧，孟亚丽，等.子宫内膜癌中PINCH蛋白的表达及临床意义.中国综合临床，2010，26:912-915.

4 Rearden A.A new LIM protein containing an autoepitope homologous to“senescent cell antigen”.Biochem Biophys Res Commun，1994，201:1124-1131.

5 Zhang HZ，Li XH，Zhang X，et al.PINCH protein expression in normal endometrium，atypical endometrial hyperplasia and endometrioid endometrial carcinoma.Chemotherapy，2010，56:291-297.

6 范波，姚珍薇.宫颈癌中EphA2，nm23-H1蛋白的表达与淋巴结转移的相关性研究.中华妇幼临床医学杂志，2008，4:15-18.

7 王从玉，邓跃华，刘弋，等.nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义.中国肿瘤临床，2008，35:1117-1120.

8 郭亮，张敏，高洁凡.转移相关基因蛋白CD44v6和nm23在宫颈病变中的表达及意义.河北医药，2009，31:911-913.