高效液相色谱法测定乳核消胶囊中淫羊藿苷含量

谭安军，张伏军，尹小玲，赵嘉将

(1.重庆市永川区中医院，重庆 402160;2.重庆三峡中心医院药剂科，重庆 404000;3.太极集团有限公司，重庆 401147)

乳核消胶囊是由淫羊藿、柴胡、山慈菇、王不留行等药材精制而成的中药复方制剂，具有行气活血、化痰散结的功效，主要用于治疗乳房纤维囊性增生症和乳腺纤维腺瘤，以及气滞痰凝血瘀证，症见乳内肿块，或有胀痛，或月经不调，精神郁闷，胸胁胀痛。为有效控制产品质量，笔者建立了测定方中要药淫羊藿主要成分淫羊藿苷含量的高效液相色谱法，报道如下。

1 仪器与试药

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站(美国Waters公司)。淫羊藿苷对照品(批号为110737－200414，供含量测定用，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为纯化水;乳核消胶囊(市售品，批号为091201，091202，091203，091207，091208)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－水(40∶60);流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm;进样量:10 μL。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液制备

取本品装量差异项下的内容物，研细，取0.2 g，精密称定，加甲醇40 mL超声提取15 min，滤过，残渣用甲醇洗涤2次，每次5 mL，合并滤液，回收甲醇至干，残渣加甲醇适量使溶解，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.11 mg的溶液，作为对照品溶液。按乳核消胶囊制备工艺制备缺淫羊藿的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:照拟订的色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL，进样。供试品溶液色谱中，在与淫羊藿苷对照品溶液色谱相应位置上有一相同色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，表明阴性样品对测定无干扰，选择性较好。见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色谱仪，以淫羊藿苷进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得回归方程 Y=194 258 X－14 239，r=0.999 8(n=5)。结果表明，淫羊藿苷进样量在 0.22 ～2.20 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定淫羊藿苷峰面积。结果的 RSD为1.10%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于0，3，8，10，16 h时依法进样测定。结果淫羊藿苷峰面积值的 RSD为1.06%(n=5)，表明供试品溶液在16 h内稳定性良好。

重现性试验:取同一批样品6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果样品中淫羊藿苷平均含量为 2.12 mg/粒，RSD为1.21%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:取已知含量的样品6份，分别加入淫羊藿苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取5批样品，依法制备供试品溶液并测定。结果批号为091201，091202，091203，091207，091208 的样品中淫羊藿苷含量分别为 2.32，2.17，2.25，2.11，2.36 mg/粒。

3 讨论

[1]，选用甲醇－水系统作为流动相，毒性更小，经济适用。经多次试验，以甲醇－水流动相能使样品中淫羊藿苷峰与相邻色谱峰达到基线分离，且分离良好、峰形对称，阴性对照无干扰。

分别考察了4种供试品溶液制备方法:甲醇回流提取后，加水使溶解，用乙酸乙酯提取，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇使溶解;甲醇回流提取;甲醇超声提取;乙醇超声提取。结果表明，甲醇超声提取的方法快速、准确、峰形对称。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:229.