治萎防变胶囊对CAG模型大鼠血浆ET-1含量和胃组织氧自由基域的影响*

成映霞，段永强，朱立鸣，李万义

慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)是消化系统疾病治疗中的难点之一，属于癌前病变。老年CAG特别是CAG伴肠上皮化生和异常增生者，其胃癌发生率高达10%［1］，而内皮素异常增高、自由基损伤在胃黏膜炎症、萎缩病变中具有重要的诱导作用［2、3］。治萎防变胶囊是基于临床效方而研制的疗效确切的医院制剂，主治气虚血瘀型慢性萎缩性胃炎。本研究旨在通过实验观察治萎防变胶囊对CAG大鼠血浆ET-1含量和胃组织氧自由基域的影响，探讨其防治CAG的作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物造模与分组

采用Wistar大鼠 90只，体重 180g±20g，雌雄各半，标准饲料喂养，均由甘肃中医学院医学实验中心提供，SPF级动物合格证号 SCXK［甘］2004-0006-0000202。

除空白对照组10只大鼠正常饲养不予造模外，其余大鼠气虚血瘀型CAG造模参照陆为民方法［4］:(1)用灭菌水将甲基硝基亚硝基胍(N-Methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine，MNNG)配成 0.1mg∕ ml浓度给大鼠自由饮用(避光)，每日配制1次;(2)采用饥饱失常喂养法:2d足量喂养，1d禁食;(3)盐酸雷尼替丁胶囊按每天0.03g/kg灌胃，每日1次。综合造模60d后，每隔1周杀检大鼠，取胃黏膜做病理检查判定肠化生的情况，至第12周大鼠胃黏膜肠化生形成后开始治疗。将CAG大鼠按体重编号，用随机数字表法分为模型组、治萎防变(Zhiweifangbian，ZWFB)大剂量组、ZWFB中剂量组、ZWFB小剂量组和维酶素组，每组9只，雌雄各半分笼饲养。

灌胃给药治疗共90d。空白对照组、模型组给予同体积蒸馏水灌胃;ZWFB大、中、小剂量组分别给予 0.6g·kg－1·d－1、0.3g·kg－1·d－1和 0.15g·kg－1·d－1ZWFB药剂灌胃(相当于 60kg成人剂量的10倍、5倍和 2倍);给予对照组 0.25g·kg－1·d－1维酶素灌胃(相当于60kg成人剂量的5倍)，等效剂量按人与动物体型系数折算［5］。块的冷水中)，后以 3500r/min离心10min，取上清液置4℃冰箱保存待测。

1.4 统计学处理

1.2 试剂与仪器

治萎防变胶囊，批号061208(甘肃中医学院附院制剂室制备，0.4g/粒);维酶素，批号060407(山东鲁北药业有限公司，0.2g/片);考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，批号20071119;脂质过氧化物(Lipid peroxidation，LPO)试剂盒，批号 20071120;丙二醛(Malondialdehyhe，MDA)试剂盒，批号 20071118;超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)试剂盒，批号20071120;谷胱甘肽-过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GSH-Px)试剂盒，批号 20071120(南京建成医学生物研究所);内皮素-1(Endothelin-1，ET-1)放免试剂盒，批号20071119(北京北方生物技术研究所);甲基硝基亚硝基胍(MNNG)，批号 68051，Fluka公司产品;盐酸雷尼替丁胶囊，批号0611025(江西汇仁药业有限公司);DF110型电子分析天平;721型可见光分光光度计;XYJ80-2离心机;HH-4数显恒温水浴箱;FT-630G微机多探头r计数器;KDC-2044低速冷冻离心机。

所有数据均输入计算机，采用SPSS13.0统计软件处理，实验数据以均数±标准差(珋x±s)表示，组间样本均数差异的比较选用F检验，在F检验有统计学意义时，进一步用q检验进行两两比较。

2 结果

2.1 各组大鼠血浆ET-1含量的比较

表1显示，与空白组比较，模型组大鼠血浆ET-1计数水平升高，差异具有统计学意义(P<0.01);经治萎防变胶囊治疗后并与模型组比较，治萎防变胶囊各剂量组血浆ET-1计数水平降低，且以治萎防变胶囊大剂量效果显著，差异具有统计学意义(P<0.05)。

表1 各组大鼠血浆ET-1含量比较(珋x±s)

1.3 标本采集

CAG造模成功并治疗后，各组动物于末次灌胃给药后，禁食不禁水24 h，测体重做记录后用乌拉坦1.5g/kg腹腔注射麻醉并取材。

股动脉取血2ml注入含10%EDTA二钠3μl和抑肽酶 40μl的试管中，混匀，3000r/min离心10min，取血浆，置于－20℃冰箱保存待检ET-1。

胃组织匀浆制备:采血后断头处死，低温条件下快速剖取胃组织，以冰冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重后用眼科小剪刀尽快剪碎置于匀浆器中，用组织重9倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰

2.2 各组大鼠胃组织SOD活性和MDA含量比较

表2显示，与空白组比较，模型组大鼠胃组织SOD计数水平降低，MDA计数水平升高，差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.01);经治萎防变胶囊治疗后并与模型组比较，治萎防变胶囊各剂量组SOD计数水平升高，MDA计数水平升降低，且以治萎防变胶囊大剂量效果显著，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.05)。

表2 各组大鼠胃组织SOD活性和MDA含量比较(珋x±s)

2.3 各组大鼠胃组织GSH-Px活性和LPO含量比较

表3显示，与空白组比较，模型组大鼠胃组织GSH-Px计数水平降低，LPO计数水平升高，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01);经治萎防变胶囊治疗后并与模型组比较，治萎防变胶囊各剂量组GSH-Px计数水平升高，LPO计数水平升降低，且以治萎防变胶囊大剂量效果显著，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.05)。

表3 各组大鼠胃组织GSH-Px活性和LPO含量比较(珋x±s)

3 讨论

慢性萎缩性胃炎属中医“痞满”、“胃脘痛”范畴，其病机特点为气血两虚、瘀血内停的虚实夹杂之症，其中血瘀是CAG的主要病理基础。因本病病程迁延，反复难愈，病变由气入血、由经入络，又易导致因虚致瘀的病理改变，这与现代医学“胃黏膜血循环障碍”的认识相一致［6］。

内皮素(ET)是一种强力血管收缩因子。近年发现，胃肠黏膜上皮可产生ET，并认为是胃黏膜损伤作用最强的内源性递质，多种原因诱发的胃黏膜损伤均能使 ET 水平升高［7］。据报道［8］，CAG 患者胃黏膜血流量(Gastric mucosal blood flow，GMBF)较非萎缩性胃炎明显降低，推测GMBF降低是CAG发病的重要因素之一，由于胃黏膜血液供应减少，胃黏膜容易受损，促进腺体萎缩。研究结果表明［9］，ET参与了CAG的病变进程，其含量的变化与萎缩的程度有关。由此可见，胃黏膜血流量的降低是导致萎缩性胃炎的主要原因之一。ET-1为ET的异体之一，具有强烈的血管收缩作用，对胃黏膜的损伤作用已为许多研究确认。在动物模型中，药物等［10、11］诱发胃黏膜损害时，血浆或胃黏膜内ET-1浓度均有升高，而ET-1含量的升高会导致胃黏膜血流量降低，提示ET-1在动物胃黏膜损害的发病机制中起重要作用。

近年来，关于氧自由基(Reactive oxygen species，ROS)在胃黏膜致炎、致癌致突变方面的研究日益重视，由于ROS作用于生物膜上不饱和脂肪酸可产生大量的脂质过氧化物(LPO)，进一步导致胃黏膜炎症、萎缩甚至异形增生发生。研究表明，大鼠受MNNG攻击的早期反应主要是过氧化反应增强［12］，蓄积在体内的自由基(Free radicals，FR)可以攻击脂类、蛋白质、核酸，而由磷脂和蛋白质结合生成的脂蛋白为主要成分的生物膜极易受到FR的攻击，生物膜的磷脂由于自由基反应，而生成脂质过氧化物LPO并在脂质过氧化的同时还可引起新的FR生成。LPO可分解成MDA，而 MDA、LPO易与膜蛋白、膜脂上的–NH2交联形成mchiff's碱，使生物膜结构发生变化，降低了膜的流动性，使膜功能降低甚至丧失，影响到整个细胞代谢功能、结构的改变，从而引起细胞的老化、死亡。SOD、GSH-Px是体内自由基清除系统中最重要的酶类，在胃壁细胞内活性很高，其作用的重要意义在于清除H2O2和OH的前身，从而保护细胞不受毒性FR的损伤。

治萎防变胶囊主要由人参、枳实、白术、半夏、白花蛇舌草、三七等药物经过提取、分离而组成，主治气虚血瘀型慢性萎缩性胃炎。现代药理研究证明，人参［13］、枳 实［14］、白 术［15］、半 夏［16］、白 花 蛇 舌草［17］、三七［18］所含有效成分具有不同程度改善胃肠平滑肌运动、解痉镇痛、抗自由基损伤、抑制血小板聚集、抑杀幽门螺杆菌以及诱导肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤的作用。

本研究观察到，与空白组比较，模型组大鼠血浆ET-1含量显著升高;胃组织 GSH-Px、SOD活性显著降低，MDA、LPO含量显著升高，说明CAG状态下所造成的胃损伤已影响到机体黏膜组织的血循环和氧化/抗氧化系统的平衡。而CAG造模成功并经药物治疗后，治萎防变胶囊能显著降低血浆ET-1含量，显著提高胃组织 GSH-Px、SOD活性，显著降低MDA、LPO含量，且以治萎防变胶囊大剂量作用显著，说明治萎防变胶囊具有增加胃黏膜血流量，改善微循环和提高机体抗氧化酶活性，减轻自由基损伤并抑制脂质过氧化物反应，从而拮抗胃黏膜发生炎症、萎缩的作用。

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